目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）对离体心肌缺血-再灌注损伤的影响及对细胞凋亡与自噬的作用。方法:选取心电图正常的SPF级雌性SD大鼠（体重250~280 g），Langendorff灌流系统建立成功的离体心肌缺血-再灌注损伤模型共70只，随机分为五组（ n = 14），心脏缺血-再灌注组（IR组）、CaMKII磷酸化激活剂组（IR+异丙肾上腺素组）、CaMKII磷酸化抑制剂类似物组（IR+KN92组）、CaMKII磷酸化抑制剂组（IR+KN93组）、空白对照组（Control组）。采用再灌注末，左心室功能的变化、心肌细胞形态的变化评价心肌损伤程度；原位末端标记(TUNEL)法来检测细胞凋亡指数；蛋白印迹法（Western blot）检测CaMKII、受磷蛋白（PLN）的磷酸化水平（p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN）、以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和自噬标记蛋白LC3II/LC3I、Beclin-1、P62的表达水平。 结果:与Control组相比，IR组的大鼠左心室功能降低,心肌纤维形态排列紊乱，凋亡指数增高，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax/Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达增多，P62表达减少，凋亡和自噬水平明显升高（均 P < 0.05）。与IR组相比，IR+KN93组的大鼠心肌损伤有明显改善，凋亡指数减少，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax /Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达减少，P62表达增多，凋亡和自噬水平明显降低（均 P < 0.05）。IR+异丙肾上腺素组与IR组相比，进一步降低大鼠左心室功能，同时凋亡和自噬水平进一步升高（ P < 0.05），而IR+KN92组大鼠与IR组相比，心肌各指标比较差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:抑制CaMKII磷酸化通过降低细胞凋亡和自噬进而减轻离体心肌缺血-再灌注损伤。

位于第4常染色体的牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）基因是迄今发现的遗传性牙本质发育异常的主要致病基因。根据de La Dure-Molla等提出的新分类，将由DSPP基因突变引起的主要表现为牙本质发育异常的疾病统称为牙本质发育不全（dentinogenesis imperfecta，DI），包括Shields分类法的牙本质发育不良Ⅱ型（dentin dysplasia type-Ⅱ，DD-Ⅱ）、牙本质发育不全Ⅱ型（dentinogenesis imperfecta type-Ⅱ，DGI-Ⅱ）和牙本质发育不全Ⅲ型（dentinogenesis imperfecta type-Ⅲ，DGI-Ⅲ）3种疾病。将Shields分类的牙本质发育不良Ⅰ型（dentin dysplasia type-Ⅰ，DD-Ⅰ）称为根部牙本质发育不良（radicular dentin displasia）。本文对遗传性牙本质发育异常的分类方法、临床特征、致病基因的研究进展进行阐述，根据不同阶段的临床特征，提出相应的临床管理和治疗策略。

血小板为血液重要组成成分，在止血及血栓形成过程中发挥关键作用。血小板行使功能涉及多种信号通路，蛋白磷酸化作用能够特异性调控血小板信号通路的激活。蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)参与调控血小板的蛋白磷酸化及去磷酸化过程。既往研究已发现多种血小板蛋白激酶，但对发挥负向调控作用的PTP研究较少。笔者拟从血小板生理功能及其活化、血小板内信号蛋白的磷酸化调控、PTP在血小板功能调控中的作用和靶向血小板PTP的临床应用方面，对PTP调控血小板功能的研究现状进行阐述，旨在为新靶向药物的研发提供依据。

目的:通过在单细胞水平分析小鼠磨牙细胞间异质性，构建牙髓细胞发育的时空图谱，进一步揭示牙齿发育的过程和调控机制。方法:分别收集出生后0、3 d的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙各10颗，制备单细胞悬液，采用单细胞转录组测序（single-cell RNA sequencing，scRNA-seq）技术进行测序。从本课题组前期研究中提取出生后7 d小鼠磨牙scRNA-seq数据，与0、3 d数据进行合并分析。使用Seurat程序对测序数据进行质控、标准化、降维和聚类分析；Monocle程序进行拟时序分析，预测发育轨迹；Scillus程序进行基因本体分析，对细胞功能进行注释。使用原位杂交技术对标记基因进行体内定位，明确不同亚群细胞的体内分布和时空变化。结果:Seurat分析显示小鼠磨牙细胞具有26个细胞亚群，可分为牙髓细胞、牙囊细胞、上皮细胞、免疫细胞、内皮细胞、管周细胞、胶质细胞和红细胞等八大类细胞，其中牙髓细胞包含5个亚群：成熟牙髓细胞，标记基因为柯萨奇病毒腺病毒受体（coxsackie virus and adenovirus receptor，Cxadr）；牙乳头细胞，标记基因为SPARC相关模块化钙结合蛋白2（SPARC related modular calcium binding 2，Smoc2）；周期细胞，标记基因为Ⅱ型DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase Ⅱ alpha，Top2a）；前成牙本质细胞，标记基因为棕榈酰蛋白羧酸酯酶（notum palmitoleoyl-protein carboxylesterase，Notum）；成牙本质细胞，标记基因为牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，Dspp）。随着牙胚发育，成熟牙髓细胞的比例逐渐增加，周期细胞和成牙本质细胞比例逐渐降低。原位杂交染色和基因本体分析结果显示，Cxadr+成熟牙髓细胞定位于牙冠上部，主要功能为成骨和“细胞外结构组织”；Smoc2+牙乳头细胞位于根尖，主要功能与“细胞外结构组织”和器官发育相关；Top2a+周期细胞位于牙冠下部，进行有丝分裂；Notum+前成牙本质细胞邻近上皮根鞘，和Dspp+成牙本质细胞的主要功能同为生物矿化。Monocle分析显示牙髓细胞有2条发育轨迹，从Smoc2+牙乳头细胞起始，经过Top2a+周期细胞，再分化为Cxadr+成熟牙髓细胞或成牙本质细胞。结论:scRNA-seq技术能在转录组水平充分揭示细胞间的异质性，为研究器官发育过程和调控机制提供了有力工具。

目的:评价分泌磷蛋白1(SPP1)在脊髓损伤小鼠神经病理性痛内源性保护机制中的作用及其与血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的关系。方法:清洁级健康雌性昆明小鼠72只，7~8周龄，体重30~35 g，采用随机数字表法分为4组( n＝18)：假手术组(Sham组)、脊髓损伤致神经病理性痛组(NP组)、脊髓损伤致神经病理性痛+SPP1-siRNA组(NS-siRNA组)和脊髓损伤致神经病理性痛+空载病毒组(NP-EV组)。采用半横断脊髓的方法制备小鼠神经病理性痛模型。NS-siRNA组和NP-EV组鞘内注射7 μl AAV-SPP1-siRNA-GFP腺病毒或空载腺病毒AAV-vector-GFP后5 d制备模型。于术后1、2和3周时每组随机取6只小鼠测定机械缩足反应阈(PWMT)和热刺激甩尾潜伏期(TFL)，随后处死取同侧损伤部位脊髓组织，采用RT-PCR法检测SPP1 mRNA表达，Western blot法检测SPP1、VEGF、Akt和p-Akt的表达。 结果:与Sham组比较，NP组、NS-siRNA组和NP-EV组术后1、2和3周时PWMT降低，TFL缩短，脊髓SPP1 mRNA、SPP1、VEGF和p-Akt表达上调( P<0.05)；与NP组比较，NS-siRNA组术后1、2和3周时PWMT降低，TFL缩短，脊髓SPP1 mRNA、SPP1、VEGF和p-Akt表达下调( P<0.05)；与NS-siRNA组比较，NP-EV组术后1、2和3周时PWMT升高，TFL延长，脊髓SPP1 mRNA、SPP1、VEGF和p-Akt表达上调( P<0.05)。 结论:SPP1参与了脊髓损伤小鼠神经病理性痛的内源性保护机制，可能与激活脊髓VEGF/Akt信号通路有关。

骨桥蛋白又称为分泌型磷酸化糖蛋白1，是最先在骨基质中提取出的一种磷蛋白，在人体由人的 SPP1基因编码；在小鼠则由 SPP1配对物编码。骨桥蛋白存在于所有的体液和细胞外基质中，广泛分布在人体上皮、心脏、骨骼、牙齿等多个组织器官。骨桥蛋白是一种多功能的分泌型糖蛋白，参与疾病形成和发展所需的多种生理病理过程。近年来，一些研究表明，骨桥蛋白的血清水平在宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌中均较高，且在不同的病理类型中有着明显差异。宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌是常见的妇科恶性肿瘤，其标准治疗方法是外科手术切除和全身化疗，虽然在很大程度上延缓了疾病的发展，其预后仍然较差，并且现有的肿瘤标记物特异性较低。因此，亟需深入研究妇科恶性肿瘤发展的分子机制以找到靶向治疗的新思路以及为疾病的早期诊断和生存预后寻找新的标记物。本文主要对骨桥蛋白的分子生物学功能以及在妇科肿瘤中的研究进展进行综述。

遗传性牙本质发育异常的分类及临床表现已被广泛关注和解读，对其遗传学基础的认识也日益深入。牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）是牙本质发育不全Ⅱ型、牙本质发育不全Ⅲ型和牙本质发育不良Ⅱ型的致病基因。本文对DSPP的突变分类及其突变后导致的蛋白转运和功能障碍进行阐述，初步分析DSPP突变类型与临床表现的对应关系，以期为遗传性牙本质发育异常的研究和诊治提供可借鉴的思路。

目的:探索充分的控磷饮食宣教对维持性血液透析（maintenance hemodialysis，MHD）患者血磷水平、饮食磷摄入以及高磷血症认识的影响。方法:本研究为回顾性队列研究，选取2019年10月至2020年12月于华山医院、华东医院、同济医院接受个体化降磷临床试验的MHD患者116例为研究对象，根据研究过程中是否接受充分的控磷饮食宣教将其分为短时组（84例）与长时组（32例），短时组不接受控磷饮食宣教或接受控磷饮食宣教时间≤60 min，长时组接受控磷饮食宣教且宣教时间>60 min；比较两组经4周干预后血磷水平、饮食磷摄入情况、患者对高磷血症的认识水平。结果:基线时，短时组和长时组间年龄[64（56，69）岁比65（60，73）岁， Z=-1.493， P=0.136]、男性比例[58.3%（49/84）比56.3%（18/32）， χ2=0.041， P=0.839]、透析龄[55（26，130）个月比53（20，132）个月， Z=-0.062， P=0.951]以及体重指数、糖尿病史、单室尿素清除指数（spKt/V）、使用骨化三醇比例、血钙、血磷、全段甲状旁腺素和饮食中蛋白、磷、磷蛋白比的差异均无统计学意义（均 P>0.05）；充分的控磷饮食宣教减少了饮食磷摄入[777.98（653.81，943.16）mg/d比896.56（801.51，1 015.51）mg/d， Z=-2.903， P=0.004]，降低了饮食磷蛋白比[13.16（11.52，14.21）mg/g比15.27（13.31，17.48）mg/g， Z=-3.929， P<0.001]及血磷水平[（1.42±0.37）mmol/L比（1.85±0.44）mmol/L， t=4.984， P<0.001]，显著提高了MHD患者的血磷达标（62.5%比41.7%， χ2=4.034， P=0.045）以及对高磷血症原因（完全正确加部分正确所占百分比：93.8%比72.6%， χ2=6.120， P=0.013）、高磷血症后果（完全正确加部分正确所占百分比：78.1%比52.4%，χ 2=6.372， P=0.012）、高磷食物种类（完全正确加部分正确所占百分比：65.6%比52.4%，χ 2=1.650， P=0.199）的认识水平。 结论:对MHD患者进行充分的控磷饮食宣教，可显著提高患者对高磷血症的认识水平，降低患者血磷水平及饮食磷摄入。

目的:利用生物信息学分析方法筛选与肝细胞癌(HCC)患者预后、诊断和免疫细胞浸润相关的关键基因,并分析其潜在治疗药物.方法:从基因表达汇编(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载HCC基因表达谱数据及相应的HCC患者临床信息.采用R软件limma包筛选HCC差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,利用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,使用Cytoscape软件对PPI网络进行可视化并筛选关键基因.通过Kaplan-Meier生存曲线和LASS O回归算法鉴定HCC预后相关关键基因,并利用外部数据集对其表达进行验证和诊断效能分析.采用CIBERSORT算法评估预后相关的关键基因表达与HCC免疫细胞浸润的关系.利用MiRNet和Network Analyst数据库分别构建微小RNA(miRNA)-关键基因mRNA和转录因子(TFs)-关键基因mRNA分子调控网络.利用CMap数据库筛选潜在治疗HCC的小分子药物.结果:共筛选出146个DEGs,其中表达上调基因30个,表达下调基因116个.GO功能和KEGG信号通路富集分析,DEGs明显富集在类固醇、烯化合物和激素代谢等生物过程(BP)及视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450(CYP450)、补体和凝血级联反应等信号通路.PPI网络分析筛选得到14个关键基因,其中甲酰氨基转移酶环化脱氨酶(FTCD)、分泌型磷蛋白2(SPP2)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、补体C6(C6)和CYP450家族成员2C9(CYP2C9)与HCC患者预后、临床病理分期和组织学分级有明显相关性,在HCC诊断中具有较高的诊断效能,与HCC的免疫细胞浸润有密切关联.Hsa-mir-182-5p、同源框CUT样蛋白1(CUX1)、早期生长反应1(EGR1)、SMAD家族成员4(SMAD4)和肿瘤蛋白P53(TP53)是靶向上述预后相关关键基因的重要调控因子.DL-硫沙芬(DL-thiorphan)、异丙嗪(promethazine)和芹菜素(apigenin)可能对HCC有治疗作用.结论:FTCD、SPP2、TAT、C6和CYP2C9可能是HCC诊断、预后判断和治疗的潜在靶点,预测得到的3种小分子药物DL-thiorphan,promethazine和apigenin可为HCC治疗药物的研发提供参考.

目的 从单细胞水平探究细粒棘球蚴感染小鼠不同时期肝组织微环境细胞中T细胞亚型组成及其转录谱特征.方法 从课题组前期细粒棘球蚴感染后1个月(1只)、3个月(1只)和6个月(2只)的BALB/c小鼠和健康小鼠(1只,对照组)肝组织的单细胞转录组测序数据集(中国国家生物信息中心组学原始数据归档库:CRA008416)(https://ngdc.cncb.ac.cn/gsa)中提取测序数据进行质控.采用统一流形逼近与投影(UMAP)算法对单细胞群聚类进行可视化作图,采用共享最近邻相似度(SNN)聚类算法分析最优细胞分群.采用SingleR软件包基于immgen参考数据集对细胞亚群进行细胞类型注释.使用Seurat软件包的FindMarkers函数分析不同时期感染小鼠和对照组小鼠的调节性T细胞(Treg)和CD8+T细胞的差异表达基因(DEG).利用基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分别对DEG进行功能富集分析和通路富集分析.结果 质控后获得37 760个细胞,人工优化后分为8种类型细胞.对T细胞重聚类后获得12个细胞群.注释后鉴定获得7种T细胞,包括CD4+初始T细胞、CD4+效应T细胞、Treg、CD8+初始T细胞、CD8+T细胞、增殖性T细胞、γ8 T细胞.在细粒棘球蚴感染1个月后T细胞各亚群占比无明显变化,感染后3个月增殖性T细胞(11.91％,56/470)和Treg(13.40％,63/470)占比均高于对照组(3.51％,38/1 082;4.34％,47/1 082),感染后6个月CD8+T细胞占比(30.20％,1 145/3 791)高于对照组(15.43％,167/1 082).Treg在感染后3个月高表达肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8(Tnfaip8)、Maf、伊卡洛斯家族锌指3(Ikzf3)等维持Treg的基因;CD8+T细胞在感染后6个月高表达白细胞表面分化抗原40配体(Cd40lg)、类几丁质酶3(Chil3)、分泌型磷蛋白1(Spp1)等耗竭性基因.GO分析结果显示,感染后3个月Treg的DEG主要富集于转化生长因子β受体复合物组装、正调节T细胞活化、环磷酸腺苷介导的信号传导等通路;感染后6个月CD8+T细胞的DEG主要富集调节血管内皮生长因子受体、色氨酸分解代谢过程、细胞外基质细胞信号等通路.KEGG分析结果显示,感染后3个月Treg的DEG主要参与原发性免疫缺陷和Ras信号传导途径等通路;感染后6个月CD8+T细胞DEG主要参与脂肪酸代谢、谷胱甘肽代谢、叶酸代谢等通路.结论 细粒棘球蚴感染后3个月、6个月小鼠的肝组织T细胞亚型存在差异,感染后3个月Treg占比增加,感染后6个月CD8+T细胞占比增加,Treg、CD8+T细胞的DEG及其主要富集的通路存在差异.