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DJ-1蛋白对视神经钳夹伤后小鼠视网膜神经节细胞及视功能的影响
编辑人员丨1天前
目的:观察Park7基因编码的DJ-1蛋白对小鼠视神经钳夹损伤(ONC)后视网膜神经节细胞(RGC)及视功能的影响。方法:健康雄性C57BL/6J小鼠37只和116只分别随机分为正常组、ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组和对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、绿色荧光蛋白(GFP)-ONC组。ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组小鼠分别于建立ONC模型后2、5、7 d处死取材,进行后续实验。Park7组、Park7-ONC组小鼠玻璃体腔注射敲低Park7基因的重组腺相关病毒(rAAV)1 μl,GFP-ONC组小鼠玻璃体腔注射仅带有GFP的rAAV 1 μl;注射后4周观察病毒转染情况。ONC组、Park7-ONC组、GFP-ONC组玻璃体腔注射后23 d,建立ONC模型,建模后5 d取材进行后续实验。视网膜铺片免疫荧光染色观察RGC平均密度变化;全视野闪光视网膜电图检测各组小鼠a波、b波和明视负向反应(phNR)潜伏期及振幅变化和振荡电位(OPs)振幅变化;视动反应(OMR)检测小鼠视敏度;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠视网膜中DJ-1、Bax、B淋巴细胞瘤/白血病-2 (Bcl-2)蛋白相对表达水平。多组间数据比较采用单因素方差分析;组间两两比较采用最小显著差法 t检验。 结果:与正常组比较,ONC 2 d组、ONC 5 d组小鼠视网膜DJ-1蛋白相对表达量均显著上升,差异有统计学意义( t=16.610、5.628, P<0.01、<0.05)。病毒转染后4周,Park7组小鼠视网膜RGC层、内丛状层可见强GFP表达。与对照组比较,ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降,差异有统计学意义( t=16.520, P<0.000 );与ONC组比较,Park7-ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降,差异有统计学意义( t=6.074, P<0.01 )。随刺激光亮度增加,对照组小鼠暗适应a波、b波潜伏期逐渐缩短,振幅逐渐增大。刺激光亮度3 cd·s/m 2,对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、GFP-ONC组小鼠暗适应a波、b波潜伏期及振幅比较,差异均无统计学意义(潜伏期: F= 0.503、2.592, P=0.734、0.068;振幅: F= 0.439、1.451, P=0.779、0.247 );与对照组比较,ONC组小鼠Ops、PhNR振幅明显下降,差异有统计学意义( t=15.07、12.80, P<0.000、<0.001);与ONC组比较,Park7-ONC组小鼠Ops、PhNR振幅明显下降,差异有统计学意义( t=4.042、5.062, P<0.05、<0.01);各组小鼠PhNR潜伏期比较,差异无统计学意义( F=1.327, P=0.287 )。与对照组比较,ONC组小鼠视敏度明显下降,差异有统计学意义( t=23.020, P<0.000 );与ONC组比较,Park7-ONC组小鼠视敏度明显下降,差异有统计学意义( t=3.669, P<0.05 )。Park7组与对照组、Park7-ONC组与ONC组比较,小鼠视网膜中DJ-1蛋白相对表达量均明显下调,差异有统计学意义( t=47.140、26.920, P<0.000、<0.000);ONC组与GFP-ONC组比较,差异无统计学意义( t= 0.739, P=0.983 )。与ONC组比较,Park7-ONC组小鼠视网膜中Bax蛋白相对表达量明显升高,Bcl-2蛋白相对表达量明显降低,差异均有统计学意义( t=5.960、9.710, P<0.05、<0.05);Park7-ONC组Bcl-2/Bax相对表达量比值明显低于ONC组,差异有统计学意义( t=13.620, P<0.01 )。 结论:敲低Park7基因后其编码的蛋白质DJ-1表达下调,加重ONC模型小鼠RGC损伤以及视网膜电生理反应及视功能下降。
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编辑人员丨1天前
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心脏神经节丛刺激对急性心肌梗死后心力衰竭犬心脏功能及自主神经重构的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究低强度心脏神经节丛(GP)刺激对急性心肌梗死(AMI)后急性心力衰竭(简称心衰)犬心脏功能及自主神经重构的影响.方法 体重18~20 kg正常成年杂种犬18只按4:5比例随机分为对照组(n=8)和GP刺激组(GPS组,n=10),以戊巴比妥钠麻醉后开胸,结扎冠状动脉左前降支后1h以180~240次/分快速心室起搏(VP) GPS组AMI后行低GP刺激,对照组不予GP刺激.GPS组分别在基础状态、AMI 1 h、VP-3 h、VP-6 h,对照组于相应时间进行心脏超声.检测左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、收缩末期室间隔厚度(IVSS)和左室射血分数(LVEF).GPS组于基础状态、AMI 1 h、VP-2 h、VP-4 h、VP-6 h,对照组于相应时间采静脉血并采用犬酶联免疫吸附测定血清去甲肾上腺素(NE)、B型脑钠肽(BNP)、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)的水平,实验结束后处死犬取心肌组织.采用Western Blot法检测心肌梗死周边区生长相关蛋白43(GAP 43)、酪氨酸羟化酶(TH)以及左侧星状神经节c-fos、神经生长因子(NGF)的表达.结果 与基础状态相比,两组AMI-1 h、VP-3h、VP6h的LVEDV、LVESV均有增加趋势,LVEF、IVSS均有减少趋势,但组内各时间点的LVEDV、LVESV、LVEF无差异(P均>0.05);与对照组相比,GPS组的LVEDV、LVESV和LVEF无显著差异(P均>0.05),但GPS组分别在VP-3 h、VP-6 h时测得的IVSS都显著高于对照组(P均<0.05).VP6 h后,与对照组相比,GPS组有改善LVEF的趋势,但无差异(P=0.074).与基础状态相比,两组AMI-1 h血浆NE、BNP、Ang-Ⅱ水平显著升高(P均<0.05);与对照组相比,GPS组VP-6 h时显著抑制AMI导致的NE、BNP、Ang-Ⅱ水平升高(P均<0.05).GPS组心肌梗死周边区GAP43和TH的表达显著低于对照组(P<0.05),左侧星状神经节c fos和NGF的表达亦显著低于对照组(P<0.05).结论 低强度GP刺激可改善左室功能,抑制AMI后VP所致急性心衰犬的心脏交感神经重构.
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编辑人员丨2023/8/6
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心脏神经节丛与心律失常的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
多种心律失常的发生常与自主神经失调相联系,而心脏神经节丛(ganglionated plexus,GP)作为心脏内在自主神经系统的核心,与各种房性、室性心律失常更是密切相关.GP干预可能具有抗心律失常作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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Caspase-1对氧诱导视网膜病变中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的促进作用及其机制
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨Caspase-1对小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的作用及其机制.方法:随机将12只7日龄(P7)C57BL/6J 小鼠分为正常组、OIR组和OIR+VX-765组,正常组在正常氧环境中饲养,其余两组构建OIR模型;P12~P16,OIR+VX-765组和OIR组分别每天腹腔注射 Caspase-1抑制剂 VX-765(4mg/kg)和等量0.4%聚乙二醇(VX-765溶剂);于P17制作视网膜铺片行Lectin染色,比较三组间视网膜无血管区和新生血管区面积的大小;采用免疫荧光染色法观察视网膜组织中Caspase-1的表达和活化小胶质细胞的分布.培养小胶质细胞BV-2细胞分为对照组、缺氧组及抑制剂组,抑制剂组和缺氧组分别经VX-765和0.4%聚乙二醇预处理3h后,缺氧条件下培养24h;对照组常规培养相同时间.通过Western blot 检测Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β 和 VEGF 的蛋白表达变化;用各组BV-2细胞培养上清液作为条件培养基,刺激培养血管内皮细胞RF/6A,进行管腔形成和细胞迁移实验,并比较各组间的差异.结果:P17正常组小鼠视网膜血管化完全,未见明显无血管区及视网膜新生血管;OIR组视网膜无血管区和新生血管面积百分比分别为16.58% ±1.14%、4.00% ±0.41%;OIR+VX-765组两者明显减少,分别为12.23% ±1.02%和2.16% ±0.52%(P<0.01).免疫荧光染色结果显示, Caspase-1在正常小鼠视网膜组织中表达较弱,在OIR小鼠中主要在神经节细胞层和内丛状层有明显的阳性表达,并与活化的小胶质细胞有明确的共定位.Western blot检测结果显示,缺氧处理的培养小胶质细胞 BV-2中Caspase-1、p20、IL-1β 和 VEGF 蛋白表达明显提高,而Caspase-1抑制剂则可明显下调p20、IL-1β和VEGF的蛋白表达水平(P<0.05).管腔形成和细胞迁移实验结果显示,RF/6A细胞经缺氧组BV-2培养上清液处理后,管腔形成长度和细胞迁移数目分别为271±12和347±34个,而加入抑制剂后,二者明显减少,分别为171 ±22和212 ±27个(P<0.05).结论:在小鼠OIR中,Caspase-1能够调节小胶质细胞促进视网膜新生血管的生成,其作用机制可能与Caspase-1活化小胶质细胞中其下游炎性效应分子 IL-1β,并释放VEGF相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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白细胞介素17A对心房神经节丛功能及心房颤动诱导性的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨白细胞介素17A(IL-17A)对心房神经节丛(GP)功能及心房颤动(房颤)诱导性的影响.方法 12只成年杂种犬麻醉后,使用随机数字表将其平均分为2组:实验组(n=6),0.1 ml IL-17A(25μg/ml)微量注射至心脏右前GP(ARGP);对照组(n=6),等量0.9%氯化钠溶液微量注射至ARGP.电压递增式高频电刺激作用于ARGP可引起心率减慢.以刺激电压为横坐标,心率降低最大百分比为纵坐标绘制心率-电压反应曲线,反映ARGP功能.分别在基础状态、干预后30 min测定ARGP的功能、心房及肺静脉位点的有效不应期(ERP)及房颤诱发窗口(WOV).结果 与基础状态比较,实验组干预30 min后ARGP功能显著增强[以刺激电压35 V为例:(64.3±5.2)%对(40.1±3.7)%,P<0.05];各部位ERP显著缩短[以右下肺静脉为例:(98.3±8.7) ms对(76.5±7.3) ms,P<0.05];房颤WOV显著延长[以右下肺静脉为例:(11.7±4.7)ms对(32.2±3.7) ms,P<0.05].而对照组干预30 min后与基础状态比较,各项电生理指标无明显变化(P>0.05).结论 IL-17A可以显著增强ARGP的功能及房颤诱导性.
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编辑人员丨2023/8/6
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肿瘤坏死因子α对心房神经丛功能和房颤阈值的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨炎症因子肿瘤坏死因子α( TNF-α)对心房神经丛( GP)功能及心房颤动阈值(AF-TH)的影响. 方法 采用随机数字表法将14只健康成年家犬分为实验组7只和对照组7只.实验组向心房右前GP(ARGP)中注入0. 1 ml TNF-α(0. 1 mg/ml),对照组向ARGP中注入等体积的生理盐水.将电极置于ARGP并发放高频刺激(20 Hz,0. 1 ms脉宽)引起窦率减慢,测得窦率减慢的最大值作为ARGP 的功能指标,并将微电极插入 ARGP 记录其神经活性.在基础状态和干预30 min后,分别测定各组ARGP的功能和活性,并测定右心房和右肺静脉各位点的AF-TH. 结果 实验组在干预后高频刺激ARGP引起窦率减慢的百分比显著增大,且ARGP神经放电频率[(70 ± 6)次/min 比 (36 ±7)次/min,P<0. 01]和幅度[(0. 42 ±0. 08)mV 比 (0. 16 ±0. 06)mV,P<0. 01]均显著增大,右心房及右肺静脉各位点AF-TH降低;对照组以上指标无显著改变. 结论 TNF-α可显著提高心房自主神经节的活性和功能,并降低心房与肺静脉各位点的AF-TH.
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编辑人员丨2023/8/6
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白细胞介素-1β对心房神经节丛功能及神经活性的影响?
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)在心房神经节丛(GP)注射后对其功能及神经活性的影响.方法 12只健康成年雄性家犬随机分为2组.实验组(n=6)在右前GP(ARGP)注射0.1 ml IL-1β溶液(20μg/ml);对照组(n=6)注射等量生理盐水.分别在基础状态(注射前)和注射10 min后,以高频电刺激诱导窦性心率(sinus rate,SR)降低,测定ARGP功能;使用微电极记录神经放电,测定ARGP神经放电的频率和振幅.结果 实验组注射10 min后,电刺激ARGP诱导的SR减慢作用与基础状态相比明显增强[以刺激电压梯度3(3~5 V)为例,(48.7±11.2)%vs(35.1±7.8)%,P<0.05],对照组未见明显改变(P>0.05);实验组注射10 min后ARGP神经活性频率和振幅均显著上升[频率:(69±9)次/分vs(32±5)次/分;振幅:(0.25±0.06)mV vs(0.12±0.05)mV,P<0.05],对照组注射前后无显著差异(P>0.05).结论 IL-1β对ARGP的功能及神经活性具有显著的激活作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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心脏神经节丛消融与窦性心动过缓
编辑人员丨2023/8/6
窦性心动过缓作为最为常见的缓慢性心律失常,与心脏自主神经的失衡密切相关.心脏自主神经又分为心脏内在自主神经系统和心脏外在自主神经系统.其中心脏内在神经系统由大量的心脏神经节丛形成的错综复杂的支配网络构成,并进一步对心脏电生理活动进行调节.目前对于心脏神经节丛的定位主要有三种方法:高频电刺激 、频谱分析及解剖定位.根据目前的文献报道,心脏神经节丛消融对于有症状的窦性心动过缓患者可能具有一定的疗效,但其作为一种新兴的治疗方法在推广前仍需大量的后续研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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右室流出道室性早搏射频消融致严重迷走反射一例
编辑人员丨2023/8/6
一例特发性室性早搏患者,12导联心电图示室性早搏V 1导联呈左束支传导阻滞图形,Ⅱ 、Ⅲ 、aV F导联呈高大R波.于右室流出道高位间隔成功行射频消融术,术中出现显著窦性心动过缓,随后发生心脏停搏,因导管移动机械刺激诱发心房颤动后自主心律恢复,心脏停搏时间共计116.s.提示:右室流出道起源的室性心律失常在消融时有发生严重迷走神经反射的可能,操作中应予以重视,必要时可放置右室起搏电极避免出现不良后果.
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编辑人员丨2023/8/6
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心脏自主神经作用于心房颤动的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
心房颤动(房颤)是临床上常见的心律失常之一.心脏自主神经在房颤的发生和维持中扮演了十分重要的角色.心脏内在和外在自主神经都对心脏节律和功能的调节具有重要意义,异常的自主神经激活可以导致房颤的发生.因此,在房颤研究中,自主神经调控已成为治疗房颤的研究热点.目前,较常用的心脏自主神经调控方法主要包括:去交感神经化、刺激迷走神经、消融心脏神经节丛等.本文主要就心脏自主神经影响房颤的作用机制及心脏自主神经调控方法加以综述.
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编辑人员丨2023/8/6
