目的:鉴定并筛选胆管癌差异性甲基化基因以预测胆管癌患者的预后。方法:选择2019年10月至2020年5月福建省立医院8例胆管癌患者胆管癌组织及癌旁组织进行850K甲基化测序分析，获取差异性甲基化基因。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中下载2018年36例患者胆管癌全基因组甲基化数据及临床信息，从基因表达综合（GEO）数据库下载2012年胆管癌甲基化数据（GSE32879），从GEPIA2数据库下载2018年TCGA数据库胆管癌总生存（OS）及无病生存（DFS）差异生存基因组数据。联合送检样本850K甲基化测序分析的差异甲基化位点（DMP）和差异甲基化区域（DMR）结果、TCGA和GEO数据库中甲基化基因以及胆管癌生存基因，在Sangerbox VENN工具中进行多数据集合分析，交集筛选得出共同差异性甲基化基因。在Sangerbox中运用最小 P值法确定基因表达的临界值，分为差异性甲基化基因高、低表达组，比较两组胆管癌患者OS、DFS、疾病特异性生存（DSS）、无病间隔（DFI）、无进展间隔（PFI）。进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。 结果:8例患者的胆管癌组织与癌旁组织850K甲基化测序共鉴定出121 954个DMP，DMR中共鉴定出差异性甲基化基因1 399个；交集鉴定得出共同预后相关基因氨基葡萄糖（N-乙酰）转移酶1（GCNT1）和神经营养受体酪氨酸激酶3（NTRK3）。GCNT1在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P=0.040）；NTRK3在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异无统计学意义（ P=0.790）。采用最小 P值法，以GCNT1及NTRK3联合表达情况预测胆管癌患者预后，按两基因表达量总和排序，以排序的30%为临界值时，胆管癌高表达组及低表达组间DFS差异最为显著（ P<0.001）；两组间OS差异无统计学意义（ P=0.065）。GO功能分析结果显示，GCNT1与蛋白质糖基化、大分子糖基化、糖化、糖蛋白生物合成过程、糖蛋白代谢过程、转移酶活性和转移糖基、蛋白质O-聚糖基化、O-聚糖加工等有关；NTRK3与神经营养素信号通路、Ras信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制、ErbB信号通路、磷脂酶D信号通路、癌症中枢碳代谢、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等有关。KEGG分析结果显示，GCNT1主要与黏蛋白型O-聚糖生物合成、代谢途径等系统功能相关联，NTRK3主要与细胞表面受体通路、细胞内信号转导、刺激反应的正向调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、酶联受体蛋白信号通路、MAPK信号通路级联及调节、蛋白质磷酸化信号转导等系统功能相关联。 结论:胆管癌差异性甲基化基因GCTNT1、NTRK3表达对胆管癌患者预后有一定预测作用。

目的:分析婴儿型纤维肉瘤(infantile fibrosarcoma，IFS)的临床特征及治疗效果，并探讨其预后相关因素。方法:本研究为回顾性研究，以2010年1月至2022年1月复旦大学附属儿科医院收治的23例术后病理检查证实为IFS的患儿为研究对象，采用Kaplan-Meier法计算患儿总体生存率和无事件生存率，患儿预后相关因素的单因素分析采用Log-Rank检验，多因素分析采用Cox回归。结果:23例患儿中，男15例，女8例；发病年龄最小为1天，最大为46个月；发病部位：头颈部4例，躯干13例，四肢6例，首诊时伴肺转移1例；17例肿瘤长径>5 cm；11例ETS变异转录因子6(ETS variant transcription factor 6， ETV6)-神经营养受体酪氨酸激酶3(neurotrophic receptor tyrosine kinase 3， NTRK3)基因融合检测结果为阳性；16例首诊接受切除手术，7例接受活检手术；术后按照美国横纹肌肉瘤研究组(Intergroup Rhabdomyosarcoma Study，IRS)分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期4例，Ⅲ期9例，Ⅳ期1例；5例接受新辅助化疗，其中3例疗效不明显；5例口服拉罗替尼，均疗效良好。截至随访时间，23例中6例因随访时间不满3年删失，IFS 3年总体生存率为(15/17，88.24%)，3年无事件生存率为(11/17，64.71%)；9例因随访时间不满5年删失，IFS 5年总体生存率为(12/14，85.71%)，5年无事件生存率为(9/14，64.29%)。单因素分析结果表明首次手术方式选择切除手术与IFS良好预后相关(χ 2＝4.938， P＝0.026)；多因素Cox回归分析显示首次手术方式及术后IRS分期非IFS预后独立影响因素( P>0.05)。 结论:IFS总体预后较好；首诊时接受切除手术对IFS生存有利。新辅助化疗在IFS中的有效性有待探究；拉罗替尼是携带 NTRK基因融合、难治性IFS患儿的有效治疗手段。

目的:探讨重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation，rTMS)对卒中后睡眠剥夺模型大鼠学习记忆及海马区突触可塑性蛋白表达的影响。方法:28只SPF级8周龄健康雄性Wistar大鼠，按照随机数字表法分为对照组、假手术组、模型组和rTMS组，每组7只。模型组和rTMS组大鼠采用大脑中动脉栓塞＋对氯苯丙氨酸腹腔注射法建立卒中后睡眠剥夺模型，rTMS组大鼠在建模后连续14 d进行rTMS干预；假手术组大鼠仅分离动脉但不结扎、不插线；对照组大鼠正常饲养。采用旷场实验观察大鼠自主行为，水迷宫实验观察其空间学习记忆能力，Western blot法检测海马组织酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor type B，TrkB)含量，免疫荧光法检测海马组织脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)、即刻早期基因c-fos表达情况，光学显微镜及透射电镜观察海马区神经元形态及结构。采用SPSS 21.0软件进行统计分析，逃避潜伏期数据采用重复测量方差分析，其他数据多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果:(1)旷场实验结果表明，干预后4组大鼠穿越方格数、直立次数和总得分均差异有统计学意义( F＝27.638，10.425，30.690，均 P<0.001)。rTMS组大鼠穿越方格数[(72.71±10.10)个]、直立次数[(6.57±0.87)次]、总得分[(79.29±10.03)分]均高于模型组[(43.71±6.96)个，(3.43±0.65)次，(47.14±6.82)分](均 P<0.05)。水迷宫实验结果表明，rTMS干预后，4组大鼠逃避潜伏期比较，交互作用不显著( F＝1.108， P＝0.37)，时间主效应( F时间＝27.295， P时间<0.01)和组别主效应( F组别＝8.691， P组别<0.01)均显著，在第3天和第4天，rTMS组大鼠逃避潜伏期均低于模型组(均 P<0.01)。干预后，4组大鼠穿越平台次数、目标象限游泳距离及停留时间均差异有统计学意义( F＝8.569，3.308，3.547，均 P<0.05)，rTMS组大鼠的穿越平台次数[(2.00±0.31)次]、目标象限游泳距离[(196.95±24.57)cm]及停留时间[(17.72±1.36)s]均高于模型组[(1.57±0.30)次，(146.61±4.79)cm，(13.58±0.98)s](均 P<0.05)。(2)光学显微镜和透射电镜下均显示，与正常对照组比较，模型组大鼠海马区细胞排列紊乱、细胞器完整性被破坏，经rTMS干预后，rTMS组大鼠海马区神经细胞排列及结构均有所改善。(3)免疫荧光结果显示，rTMS组大鼠海马区的c-fos(1.49±0.09)、BDNF(0.84＋0.06)均高于模型组[(1.24±0.12)，(0.48±0.08)，均 P<0.05]。Western blot结果显示，rTMS组大鼠海马组织TrkB(1.81±0.03)表达水平高于模型组(0.96±0.02)( P<0.05)。 结论:rTMS能改善卒中后睡眠剥夺大鼠的学习记忆能力和自主行为能力，可能与促进海马区c-fos、BDNF、TrkB表达有关。

先天性无痛无汗症（congenital insensitivity to pain with anhidrosis, CIPA）是一种以痛觉丧失、无汗、反复发热、自残、发育迟缓、不同程度的智力低下为主要临床表现的周围神经病，这是一种因编码酪氨酸激酶受体A（tyrosine kinase receptor A, TrkA）蛋白的神经营养因子酪氨酸激酶受体1型（neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1, NTRK1）基因失活突变造成的常染色体隐性遗传病。文章报道1例痛觉丧失、无汗、智力低下，外伤后胫骨骨折的先天性无痛无汗症6岁男孩，该患儿仅用七氟醚吸入麻醉即得到了满意的麻醉效果，血流动力学未发生显著波动。

目的:探讨儿童神经营养性-原肌球蛋白受体酪氨酸激酶(NTRK)重排梭形细胞肿瘤的临床特点、基因突变类型、治疗方案。方法:对2021年6月就诊于湖南省儿童医院皮肤科的一例儿童NTRK重排梭形细胞肿瘤的临床特点及基因检测结果进行分析，回顾相关文献。结果:本例患儿为10月龄男性，出生后即发现左腰部一红色肿块，肿块无自觉症状，入院后完善病理检查：考虑NTRK重排梭形细胞肿瘤，病理蜡块基因检测，检测到核纤层蛋白-神经营养因子受体络氨酸激酶(LMNA-NTRK1)基因融合。结论:当患儿出现皮肤红色肿块，激光等相关治疗效果不佳时，需要考虑罕见的儿童NTRK重排梭形细胞肿瘤可能。

目的:探究过敏煎治疗儿童哮喘的作用机制.方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台数据库检索过敏煎中的药物活性成分及相关靶点,整理中药活性成分-疾病有效靶点,获取蛋白-蛋白互作网络,进行拓扑分析,进一步进行基因本体论及京都基因与基因组百科全书富集分析.将处理后的活性成分作为小分子配体,蛋白靶点作为受体进行分子对接,将分子对接结果进行可视化分析.结果:共得到过敏煎54个有效活性成分,137个潜在靶点,157条信号通路.结论:过敏煎中槲皮素、山柰酚、汉黄芩素等有效成分可能通过神经营养的酪氨酸激酶1型受体、淀粉样前体蛋白、表皮生长因子受体等核心靶点作用于PI3K/Akt,AGE/RAGE、肿瘤坏死因子、白细胞介素17等信号通路,形成多成分、多靶点、多通路的治疗特点,从而发挥治疗哮喘的作用.

目的:采用网络药理学、分子对接和动物实验探讨舒心安神汤治疗抑郁症的作用及机制.方法:通过TCMSP、Swiss Target Prediction、Uniprot数据库筛选舒心安神汤中的活性成分及作用靶点,采用Gene Cards、OMIM、Drug Bank数据库获得抑郁症疾病靶点;用Cytoscape软件构建可视化网络,利用Venny 2.1软件筛选、收集药物与疾病的共有靶点.将筛选出的药物和疾病的共同靶点输入String数据库,获得蛋白质相互作用(PPI)网络图,进一步筛选出核心靶点.于DAVID数据库中对交集基因进行GO富集和KEGG通路分析,预测其富集的信号通路并进行可视化展示,将核心靶点与相关活性成分在CB-Dock在线平台进行分子对接验证,并采用LC-MS对舒心安神汤主要化学成分进行分析鉴定.构建皮质酮诱导抑郁小鼠模型,利用行为学实验、尼氏染色、Western blotting法进行舒心安神汤药效评估并对脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TRKB)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)反映突触可塑性相关蛋白的表达进行考察.结果:网络药理学预测得到舒心安神汤治疗抑郁症的潜在活性成分141个,主要为槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、芍药苷、莫诺苷、斯皮诺素及姜辣素等活性成分,关键靶点包括IL6、ESR1、AKT1和EGFR等,GO富集分析结果发现抑郁反应与蛋白磷酸化调控、细胞外基质激酶结合及蛋白激酶活性等相关.KEGG通路富集结果显示,舒心安神汤治疗抑郁可能通过调节PI3K-AKT、HIF-1及MAPK等信号通路发挥作用.分子对接发现芍药苷、莫诺苷、斯皮诺素、姜辣素与ESR、AKT1和BDNF结合能力较强.LC-MS鉴定出舒心安神汤中含有15种高响应化学成分,与网络药理学核心成分预测基本一致.动物实验结果表明,与模型对照组比较,舒心安神汤20.5 g/kg组的小鼠体质量、蔗糖偏好明显增加,强迫游泳时间和新奇抑制摄食试验潜伏期明显减少(P＜0.05);尼氏染色显示模型对照组小鼠海马CA3区神经元排列欠规则,细胞周围间隙增宽,胞质内尼氏小体明显减少,而舒心安神汤20.5 g/kg组小鼠海马CA3区神经元排列较为规则,细胞周围间隙缩短,尼氏体较为丰富;舒心安神汤20.5 g/kg组能明显上调小鼠海马组织TRKb、p-AKT、BDNF、CREB的蛋白表达(P＜0.05).结论:舒心安神汤可能通过其含有的槲皮素、β-谷甾醇、芍药苷、姜辣素和斯皮诺素等主要成分作用于ESR1、AKT1等靶基因,并影响BDNF/TRKB信号通路及下游相关蛋白等,发挥改善抑郁症的作用,其机制可能与上调BDNF、TRKB、p-AKT及CREB蛋白表达,改善海马神经元可塑性有关.

中药通过调控不同信号通路改善阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)认知障碍,如磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)、脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B(brain-derived neurotrophic factor/tyrosine kinase receptors,BDNF/TrkB)、核因子E2 相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor E2-related factor 2/heme oxygenase-1,Nrf2/HO-1)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、酪氨酸激酶(Janus kinase,JAK)/信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路等,各通路作用于AD的靶点和层次不尽相同,多涉及促进细胞的增殖分化、抑制细胞凋亡、减轻氧化应激损伤、参与炎症反应调节、促进细胞的自噬能力等.目前,中药治疗AD的研究多为中药单体或单一信号通路机制研究,中药复方成分的多靶点作用及各通路间的上下游通路蛋白受体表达有待深入研究;中药最佳量效浓度尚未统一;实验研究多为中药对AD动物模型及相关细胞的治疗,较少应用通路阻断剂或相关基因敲除手段反向验证其调控机制,亟需进一步开展高质量、大样本临床试验研究,明确中药调控不同通路治疗AD间的联系,以期拓展中药机制研究思路,也为中药防治AD及神经退行性疾病的临床应用提供理论依据.

目的 基于生物信息学和机器学习探究靶向心源性脑卒中的铜死亡相关特征基因,分析特征基因与心源性脑卒中之间的潜在关系.方法 通过基因表达综合数据库(Gene expression omnibus,GEO)获取心源性脑卒中患者的相关数据集,基于该数据集对铜死亡相关基因进行差异性分析,采用聚类分析和机器学习筛选铜死亡特征基因,通过接收者操作特征曲线验证特征基因的准确性和构建疾病预测模型以预测心源性脑卒中患病的风险;利用免疫细胞浸润分析和基因集富集分析探究疾病和铜死亡亚型与免疫微环境的关系及铜死亡特征基因与免疫细胞的相关性和生理病理学过程.结果 共筛选出3个铜死亡差异特征基因分别为丙酮酸脱氢酶E1亚基alpha 1(Pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)、溶质载体家族 31 成员 1(Solute carrier family 31 member 1,SLC31A1),3个特征基因表现出良好的准确性,并且其构建的疾病预测模型对心源性脑卒中的患病风险有良好的预测性.免疫浸润分析发现,心源性脑卒中与巨噬细胞、肥大细胞具有较强的相关性,3个特征基因同样与巨噬细胞、肥大细胞有一定的相关性,并且与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和γδT细胞有很强的相关性.基因集富集分析表明,铜死亡主要与免疫炎症反应、三羧酸循环、丙酮酸代谢和神经营养因子信号传导通路集ErbB受体酪氨酸激酶家族(ErbB receptor tyrosine kinase family,ERBB)信号通路等密切相关.结论 铜死亡特征基因PDHA1、DLD、SLC31A1和心源性脑卒中与免疫微环境之间存在很强的相关性,为心源性脑卒中的病理机制提供了依据,并为靶向药物的开发提供了方向,对心源性脑卒中的认识和治疗具有重要意义.

目的 研究玄参干预对大鼠基因表达谱的影响,探讨玄参干预对大鼠的潜在保护和毒性作用及其机制.方法 将20只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为玄参组和空白组,每组10只.玄参组大鼠给予玄参提取物1350 mg· kg-1灌胃,空白组灌胃给予等容积0.9％氯化钠溶液,均为1次/d,连续15 d.分别于灌胃15 d后,检测肝脏组织的基因表达谱,通过时间序列趋势分析软件(Short Time-Series Expression Miner,STEM)筛选具有趋势表达的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并对其进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能注释和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析.结果 玄参组筛选76个DEGs,其中28个上调,48个下调,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05).KEGG通路分析结果显示,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒整合位点(Wingless-Type MMTV Integration Site Family,Wnt)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、非受体酪氨酸激酶家族-信号转导子和转录激活子(Janus Kinase-Signal Transducer and Ac-tivator of Transcription,Jak-STAT)、核因子激活的 B 细胞的 κ-轻链增强(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、Toll 样受体(Toll-like receptor)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)、催产 素(Oxyto-cin)、神经生长因子受体(TNFRSF16)相关蛋白 1[nerve growth factor receptor(TNFRSF16)associatedprotein 1,Ngfrap1]和神经营养因子受体相关死亡结构域(neurotrophin receptor associated death domain,Neurotrophin)这9条信号通路,包含Mecom、Amhr2、Pias2、Ticam2、Cyp7a1、Ngfrap1和Nfatc4这7个靶基因.经查阅文献,Mecom可能为表征玄参对大鼠潜在保护作用的靶基因,而另外6种则可能为表征玄参对大鼠潜在毒性作用的靶基因.结论 玄参作用的两重性,既可对机体产生预防和治疗作用,也会产生潜在的不良反应.