目的:探讨透明细胞软骨肉瘤（clear cell chondrosarcoma，CCCS）的临床表现、影像学特点、病理组织学特征、诊断陷阱、治疗以及预后。方法:回顾性分析2010年1月至2020年1月23例收治并手术治疗的透明细胞软骨肉瘤患者资料，其中男21例，女2例；年龄（45.78±16.19）岁（范围：27~72岁）。21~40岁8例（35%），41~60岁10例（43%），61~80岁者5例（23%）。发病部位股骨8例，骨盆7例，胸腰椎4例，骶骨3例，胫骨1例。术前穿刺及术后大体标本用10%中性福尔马林固定，5%硝酸脱钙处理，石蜡包埋，行苏木素-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色及免疫组织化学染色（envision法），收集术前影像学表现及临床症状，术后显微镜下病理组织学表现及免疫表型，归纳总结透明细胞软骨肉瘤的临床、影像学及病理形态学特点。结果:23例透明细胞软骨肉瘤中影像学均显示骨质破坏，部分病例为境界相对清楚的溶骨性破坏，部分病例有硬化缘。7例术前有血清碱性磷酸酶升高。肿瘤组织大体灰白灰红色，部分病例可见瓷白色软骨样区域。镜下肿瘤细胞圆形、多角形，部分胞浆透亮，境界清楚，部分胞浆嗜酸性，细胞核圆形、居中，核分裂像罕见。常常可见结节状分布的软骨样基质及幼稚的编织骨，散在多核破骨巨细胞样巨细胞。免疫组化染色可不同程度的表达S-100、D2-40、EMA、Vimentin、p16、SATB2，表达不具备特异性。治疗主要通过外科手术整块切除，术后出现复发10例（43.5%），无远处转移病例。结论:透明细胞软骨肉瘤是软骨肉瘤的一种少见亚型，具有低度恶性生物学行为，准确诊断需要临床、影像学和病理三结合，外科整块切除预后较好。

目的:比较多重荧光PCR-熔解曲线法与病理诊断法检测福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肺组织样本中病原真菌的价值。方法:选择2014—2019年本院病理科病原真菌阳性患者的42份肺组织样本（念珠菌8份、曲霉菌23份、隐球菌11份）作为阳性组，病原真菌阴性的肺组织样本50份作为阴性组，均进行多重荧光PCR-熔解曲线法检测，并应用配对 χ2检验和Kappa值对两种方法的检测结果进行比较。 结果:阳性组42份样本多重荧光PCR-熔解曲线法检出23份阳性，并可分辨至种水平，其中念珠菌4份（白色念珠菌2份、热带念珠菌1份、克柔念珠菌1份）、曲霉菌13份（烟曲霉11份、黄曲霉2份）、新型隐球菌6份。阴性组50份样本多重荧光PCR-熔解曲线法检测均阴性。Kappa值0.568，以病理诊断法为"金标准"，多重荧光PCR-熔解曲线法检测病原真菌的灵敏度为54.8%（23/42）、特异性为100.0%（50/50）。结论:多重荧光PCR-熔解曲线法检测FFPE样本中病原真菌的灵敏度不高，但可以将病原真菌鉴定至种，是病理诊断法的补充。

目的 探讨围绕福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed paraffin embedded,FFPE)样本特性获取更高质量/得率的纳米磁珠核酸提取方案,改进分子病理技术.方法 合成4大类15个小类的备选磁珠,以FFPE样本为中心,筛选高质量/得率磁珠.模拟常规组织、粗针穿刺(肝脏)、纤维支气管镜样本(肺),装管相同张数连片.采用筛选的最佳磁珠与市场出售的常见磁珠试剂提取核酸,横向对比纯化总量、片段大小等质量参数.应用PCR和Sanger验证核酸的下游应用.结果 以FFPE样本DNA为中心筛选自制纳米磁珠,获得最佳性能纳米磁珠总回收率为58.5％±1.58％,5种市售商品化磁珠和3种国产磁珠总回收率为18.68％～40.71％.相同组织量(连片)提取的DNA总量,在模拟常规组织、粗针穿刺和纤维支气管镜样本核酸得率比市售试剂盒提高39.49％～181.72％(P＜0.05).模拟纤维支气管镜样本1张(4 μm)总量可达100 ng以上、5张总量可达400 ng以上.结论 以FFPE样本DNA为中心筛选的DNA纯化纳米磁珠,与商品化磁珠相比有较大提升,为临床分子病理检测的质量保证、自动化检测和项目拓展提供空间.

目的 探讨淋巴瘤累及骨髓穿刺组织石蜡切片EBER原位杂交检测最佳烤片时间.方法 选取苏州大学附属第一医院病理科EBER原位杂交检测结果为阳性的淋巴瘤累及骨髓穿刺组织20 例.所有骨髓标本均经10%中性福尔马林固定、混合酸脱钙、石蜡包埋组织,每例标本连续切片6 张,根据烤片时间不同随机分成6组,烤片后进行EBER原位杂交检测.结果 烤片5 min和10 min组均出现脱片现象,烤片30 min及以上,则骨髓组织结构完整,无脱片现象发生.烤片30 min组EBER染色质量评分最高,随着烤片时间延长,EBER阳性信号着色强度逐渐减弱,阳性细胞核数量逐渐减少,EBER阳性率也降低.结论 75℃烘箱中烤片30 min,骨髓石蜡切片EBER原位杂交检测效果最佳,无脱片现象发生、组织结构完整、阳性信号呈棕黄色定位于细胞核、背景干净,阳性率高.

目的 对比分析石蜡包埋(FFPE)宫颈组织和宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒(HPV)检测结果差异,评估组织样本HPV分型检测的必要性.方法 随机抽取2021-2022年于解放军总医院第七医学中心就诊患者101例,其中病理诊断为慢性宫颈炎21例、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)20例、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)41例、宫颈鳞状细胞癌(CSCC)19例,通过杂交导流技术比较其宫颈脱落细胞和福尔马林固定组织标本中的HPV检测结果.结果 宫颈脱落细胞和组织对HPV DNA的总体一致率为78.2％.伴随宫颈病变进展,宫颈脱落细胞和宫颈组织样本中HPV结果一致性显著增高(P＜0.0001).相比于宫颈脱落细胞,宫颈组织HPV检测对宫颈病变具有较高的特异性(P＜0.0001).最常见的组织内HPV感染型别依次为HPV16、52、58,18和33,是较易引起宫颈组织病变的HPV分型和潜在有效的HPV疫苗型别.结论 宫颈组织样本HPV DNA分型检测有助于评估病毒感染位置及转染状态并指导疫苗研发.

目的 采用两种不同方法检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)手术样本微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)并比较分析相关临床病理及分子特征.方法 收集2018年6月至2022年2月本院经手术治疗的CRC患者的福尔马林固定石蜡包埋组织(formalin fixation and paraffin embedding,FFPE)样体450例.根据检测方法将患者分为两组:免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)组(n=312)采用 IHC 法检测 DNA 错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白 MutS homolog 2(MSH2)、MSH6、MutL homolog 1(MLH1)和PMS homolog 2(PMS2)的表达;多重荧光聚合酶链式反应-毛细管电泳(multiple fluorescent polymerase chain reaction based capillary electrophoresis,mPCR-CE)组(n=353)采用 mPCR-CE 法检测 MSI 单核苷酸位点(NR24、BAT25、CAT25、BAT26和MONO27).其中215例同时接受IHC法和mPCR-CE法检测.对这215例样本采用实时荧光定量PCR方法检测KRAS原癌基因GTP酶(KRASproto-oncogene,GTPase,KRAS)、NRAS原癌基因GTP酶(NRAS proto-oncogene,GTPase,NRAS)和 B-Raf 原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(B-Raf proto-oncogene serine/threonine-protein kinase,BRAF)基因(KRAS/NRAS/BRAF,KNB)突变,采用IHC方法检测Ki-67蛋白表达.比较分析两种不同方法检测的MSI结果分布在人口学特征(年龄和性别)、临床病理特征(肿瘤位置、组织类型、分化程度、肿瘤侵犯深度、神经侵犯、脉管侵犯和淋巴结转移状态)以及分子特征方面的差异.结果 IHC组错配修复缺陷(mismatch repair deficiency,dMMR)样本占6.1％(19/312),其中52.6％(10/19)的dMMR样本是由MLH1和PMS2共同表达缺失导致.dMMR的分布在人口学特征和临床病理特征方面比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).mPCR-CE组高频MSI(high-frequency MSI,MSI-H)样本占4.0％(14/353),MSI-H的分布仅在肿瘤位置方面比较,差异具有统计学意义(P=0.020).IHC法和mPCR-CE法共同检测样本中,检测结果一致性为97.2％(209/215);dMMR和MSI-H的分布在BRAFV600E突变方面比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 尽管IHC法和mPCR-CE法检测CRC MSI/dMMR的一致性高达97.2％,但dMMR和MSI-H在CRC中的分布在临床病理特征方面并不一致,表明在特定亚群中需要采用特定方法检测CRC MSI/dMMR.

目的 探索利用HE染色切片褪色样本进行ALK基因融合检测的可行性.方法 选取3例ALK基因融合阳性的福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed and paraffin embedded,FFPE)组织样本的HE染色切片,分别经盐酸乙醇褪色法和高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色后,提取RNA,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术,检测ALK基因融合.结果 从经盐酸乙醇褪色法或高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色的HE染色切片中提取的RNA的纯度与从对照切片中提取者无显著差异,但其浓度较从对照切片中提取者显著降低.在模板量相同的条件下,经盐酸乙醇褪色的HE染色切片与对照组切片均检测到明确的ALK基因融合阳性,而经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片无任何曲线升起.从经盐酸乙醇褪色的HE染色切片中提取的RNA的完整性与从对照切片中提取的RNA的完整性无差异,但显著高于从经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片中提取者.为保证研究的准确性,本研究采用免疫组织化学与荧光原位杂交法对选取的ALK基因融合阳性样本进行验证,结果发现所选样本均为明确阳性.结论 HE染色切片经盐酸乙醇褪色后提取的RNA可以用于ALK基因融合检测.

目的 探讨角化细胞分化因子 1(KDF1)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中表达与辅助化疗耐药和预后的关系.方法 收集癌症基因组图谱(TCGA)数据库中的数据(n=379)分析EOC中KDF1 mRNA的表达模式和预后价值.收集大同市第五人民医院病理科 135 例福尔马林固定石蜡包埋组织,包括 111 例EOC组织,12 例卵巢良性肿瘤组织和 12 例卵巢畸胎瘤组织.采用免疫组化染色法检测组织KDF1 表达.患者化疗结束后,采用实体肿瘤疗效评价标准 1.1 版评估辅助化疗反应,完全缓解(CR)和部分缓解(PR)纳入敏感亚组,疾病稳定(SD)和疾病进展(PD)纳入耐药亚组.结果 通过对TCGA数据库中的卵巢癌数据进行差异表达分析,发现KDF1 在卵巢癌患者中呈高表达(P＜0.001),并与卵巢癌患者较低的总体生存率(OS)相关.在临床验证队列中,EOC组织中KDF1 蛋白表达明显高于畸胎瘤组织和卵巢良性肿瘤组织(P＜0.001).根据KDF1 免疫染色强度评分中位值,将EOC患者分为KDF1 低表达组(＜7.67 分)和高表达组(≥7.67 分).辅助化疗耐药亚组组织KDF1 蛋白评分显著高于敏感亚组(P＜0.001).当KDF1 蛋白评分≥7.77 分时可良好地预测辅助化疗耐药的风险,ROC曲线下面积为 0.875(95%CI:0.812～0.937),灵敏度和特异度分别为 86.80%和 72.60%.Cox风险比例回归模型分析结果显示,KDF1 高表达是预测EOC患者OS和PFS的独立影响因素(P＜0.05).KDF1 低表达组和高表达组患者中位OS分别为 37.98、16.18 个月;中位PFS分别为 18.95、11.51 个月,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 组织中KDF1 高表达与EOC患者辅助化疗耐药和不良预后风险更高有关,可能是潜在的预测生物标志物.

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,qPCR)法在诊断及鉴别诊断肺和胸膜结核病和其他肉芽肿性疾病中的意义.方法 收集经病理学检查发现上皮样肉芽肿性病变的肺和胸膜活检的石蜡包埋组织142例,应用qPCR法检测结核分枝杆菌DNA,同时行抗酸染色,并与临床资料对比进行回顾性分析.结果 在142例肺胸膜活检标本中,60例临床诊断确诊为结核病.采用qPCR法检测结核分枝杆菌DNA阳性者58例,敏感性为96.67％,特异性为100％;抗酸染色阳性者17例,敏感性为28.33％,特异性为97.56％,差异有统计学意义(x2 =21.47,P＜0.001).结论 结核分枝杆菌核酸检测有助于在石蜡包埋的肺和胸膜小活检组织中快速、准确的诊断结核病,可用于疑似结核的肉芽肿性病变的鉴别诊断.

目的·比较脑组织新鲜样本和福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)样本中RNA的质量,并分析长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)的表达情况.方法·收集不同保存条件下的FFPE及成对新鲜脑组织,提取并检测RNA质量,运用实时定量PCR (RT-qPCR)分析各RNA指标的扩增效率和表达稳定度,筛选内参指标并对比不同扩增长度候选指标的△Ct值改变情况,以明确FFPE样本中lncRNA真实表达水平.结果·FFPE样本中RNA纯度相对较高,但完整性明显低于新鲜样本.所有指标均成功扩增,长链RNA的扩增效率与产物长度、样本处理方式、保存温度及保存时间有关,而5S、miR-9及miR-125b扩增效率均接近理想状态并在所有样本中稳定表达,适合作为内参指标.与新鲜样本相比,在4℃保存的FFPE样本中,只有HAR1F和MALAT1-L (＞200 bp)的△Ct值升高;在室温保存的FFPE样本中,多数指标的△Ct值显著增加,但是短扩增(＜60 bp)指标在所有样本中表达一致.结论·尽管处理方式和保存条件会影响组织RNA的完整性,但通过选择合适的扩增长度及内参指标,能够准确定量FFPE组织中lncRNA的表达水平.