目的 调查成都市售菌菇类食品中唐菖蒲伯克霍尔德菌的污染情况,分析其病原特征,为食品安全风险监测提供支持.方法 参照GB 4789.29-2020,增加了可疑菌落微生物质谱鉴定,对121份菌菇类食品进行检测,并对分离到的菌株进行全基因组测序,分析其遗传特性及与米酵菌酸生物合成相关bon基因的携带情况.结果 121份样品唐菖蒲伯克霍尔德菌的阳性率为50.41％(61/121),其中银耳的阳性率达到67.14％(47/70).4份样品中分离的10株唐菖蒲伯克霍尔德菌携带bon基因簇;存在主要污染银耳的优势克隆群,但未携带bon基因簇.结论 银耳易被唐菖蒲伯克霍尔德菌污染,需加强对重点食品中该致病菌的风险监测,尤其是携带bon基因簇菌株的检测.

目的:探讨食管癌根治术后病原菌分布情况及发生肺部感染的影响因素。方法:采用回顾性病例对照研究方法。收集2021年1月至2022年12月长治医学院附属和平医院收治的555例行食管癌根治术患者的临床资料；男344例，女211例；年龄为（64±8）岁。观察指标：（1）术后发生肺部感染及病原菌分布情况。（2）术后发生肺部感染影响因素分析。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验。计数资料以绝对数或百分比表示，组间比较采用 χ2检验，等级资料比较采用非参数检验。单因素分析根据资料类型采用对应的统计学检验方法。多因素分析采用Logistic逐步回归模型前进法。 结果:（1）术后发生肺部感染及病原菌分布情况。555例患者中，91例术后发生肺部感染，发生率为16.40%（91/555）。91例术后发生肺部感染的患者中，共分离培养细菌59株，其中革兰氏阴性菌53株，革兰氏阳性菌 3株，真菌3株，包括多重耐药菌20株。53株革兰氏阴性菌中，鲍曼不动杆菌18株（12株多重耐药），肺炎克雷伯菌18株（3株多重耐药），铜绿假单胞菌6株（2株多重耐药），大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、流感嗜血杆菌各2株（2株大肠埃希菌和1株阴沟肠杆菌多重耐药），粘质沙雷菌、克氏柠檬酸杆菌、纹状棒杆菌、奇异变形菌、产酸克雷伯菌各1株。3株革兰氏阳性菌中，金黄色葡萄球菌2株，肺炎链球菌1株。3株真菌均为白色假丝酵母菌。18株鲍曼不动杆菌中，对亚胺培南、头孢曲松、头孢他啶、头孢哌酮或舒巴坦、环丙沙星、阿米卡星、左氧氟沙星的耐药情况分别为12、12、11、9、8、6、5株；18株肺炎克雷伯菌的上述指标分别为0、1、1、1、2、0、2株。（2）术后发生肺部感染影响因素分析。多因素分析结果显示：肿瘤病理学分期为Ⅱ期和Ⅲ期、术前住院时间≥6 d、手术时间≥240 min、手术方式为开胸手术、围手术期抗菌药物使用种类≥3种、术后抗菌药物使用时间≥5 d是患者术后发生肺部感染的独立危险因素（ P<0.05）。 结论:食管癌根治术后肺部感染病原菌主要为鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌。肿瘤病理学分期为Ⅱ期和Ⅲ期、术前住院时间≥6 d、手术时间≥240 min、手术方式为开胸手术、围手术期抗菌药物使用种类≥3种、术后抗菌药物使用时间≥5 d是患者术后发生肺部感染的独立危险因素。

目的:探讨巨噬细胞来源外泌体对白念珠菌（CA）形态转换的影响及其作用机制。方法:体外培养人急性单核细胞白血病细胞系THP-1，采用佛波酯诱导其分化成M0巨噬细胞。活化CA并配置其菌悬液，感染M0巨噬细胞，并于高内涵成像分析系统下观察细胞吞噬现象。采用差速离心法分别提取M0巨噬细胞来源的外泌体（外泌体组）及CA感染M0巨噬细胞后分泌的外泌体（CA外泌体组），并通过透射电镜观察、纳米颗粒跟踪分析、Western印迹法检测外泌体表面标志蛋白来鉴定并比较两组外泌体。将这两组外泌体分别与CA共培养（外泌体处理组、CA外泌体处理组），CA独立培养作为空白对照组，倒置显微镜下观察上述3组CA的形态变化，酶联免疫吸附试验检测胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量，实时荧光定量PCR检测cAMP相关基因RAS1及CDC35（也称Cyr1）的表达水平。结果:Western印迹检测显示，外泌体组和CA外泌体组外泌体均表达外泌体标志物肿瘤易感基因101蛋白（TSG101），均不表达阴性标志蛋白钙联蛋白（calnexin）；透射电镜观察及纳米颗粒跟踪分析显示，两组外泌体形态、大小无明显差异。倒置显微镜观察显示，与空白对照组相比，外泌体处理组及CA外泌体处理组CA由酵母相向菌丝相的转换明显受到抑制，其菌丝长度也明显缩短。酶联免疫吸附试验结果显示，外泌体处理组及CA外泌体处理组CA细胞内cAMP含量[分别为（16.70 ± 0.84）和（16.82 ± 0.87）pmol/ml]均显著低于空白对照组[（21.82 ± 1.08）pmol/ml； t = 6.45、6.23，均 P = 0.003]。实时荧光定量PCR结果显示，外泌体处理组及CA外泌体处理组CA cAMP相关基因RAS1及CDC35表达均较空白对照组下调（均 P < 0.01），且CA外泌体处理组RAS1 mRNA表达量低于外泌体处理组（ t = 7.43， P = 0.002）。 结论:M0巨噬细胞外泌体以及M0巨噬细胞感染CA后外泌体均能有效抑制CA菌丝的生长，且后者抑制作用更强，其作用机制可能是通过下调cAMP/蛋白激酶A通路中的cAMP实现。

目的:建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）快速检测血浆中米酵菌酸含量的方法。方法:于2020年11月，血浆样品经甲醇-乙腈溶液（体积比1∶1）提取净化后直接进样，经C18色谱柱分离，以5 mmol/L乙酸铵水-乙腈溶液为流动相梯度洗脱，在优化后的仪器条件下，采用电喷雾负离子多反应监测（MRM）模式，外标法定量，并对所建立的方法进行方法学验证。结果:血浆中米酵菌酸在2~100 μg/L线性关系良好，相关系数为0.999 8，平均回收率为83.7%~112.0%，批内、批间相对标准偏差均<10%；方法的检出限为0.7 μg/L，定量下限为2.0 μg/L。结论:该方法简便、快速、准确，灵敏度高，可满足中毒患者血样中米酵菌酸测定的要求。

[目的]筛选玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)转录因子的互作蛋白,解析黑色素调控转录因子StMR1 调控玉米大斑病菌致病性的分子机制.为解析玉米大斑病菌侵染过程中转录因子的调控网络,阐明病菌的致病机理提供参考.[方法]收集玉米大斑病菌菌丝和孢子不同萌发阶段作为试验材料,采用Gateway方法构建玉米大斑病菌cDNA文库,使用同源重组的方法构建转录因子StMR1 的诱饵载体,采用酵母双杂交技术筛选其互作蛋白并进行一对一验证.[结果]构建的玉米大斑病菌文库插入的平均片段长度大于 1 000 bp,初级文库及次级文库的库容量为 1.2×107 和 1.04×107 CFU,重组率为 100%,可以用于酵母双杂交筛选.成功构建可以用于筛库的诱饵载体pGBKT7-StMR1,经初筛与复筛得到 3 个互作蛋白,一对一验证短链脱氢酶、糖基转移酶、富含亮氨酸重复序列蛋白均与转录因子StMR1 存在互作.[结论]成功构建了丰富度高且质量好的玉米大斑病菌cDNA文库并筛选到了与转录因子StMR1 互作的蛋白.

[目的]通过米曲霉中异源表达虫草素合成关键基因,构建米曲霉工程菌株合成虫草素.[方法]以米曲霉尿苷/尿嘧啶和组氨酸双营养缺陷型菌株AoΔpyrGΔHisB为背景菌株,利用农杆菌介导的转化方法对虫草素合成关键基因CmCns1-CmCns3 进行过表达;通过荧光显微镜观察CmCns1 和CmCns2 在米曲霉中的亚细胞定位;利用高效液相色谱法(HPLC)测定转基因米曲霉虫草素含量,同时对米曲霉发酵液添加合成虫草素的前体甘氨酸和腺嘌呤,探究其在米曲霉中对合成虫草素的影响.[结果]蛹虫草CmCns1 和CmCns2 在米曲霉中定位于脂滴;并且米曲霉中单独过表达CmCns1、共表达CmCns1 和CmCns2 以及共表达CmCns1-CmCns3 均能合成虫草素,发酵 48 h虫草素胞外产量最高达到 37.74 μg/mL;向米曲霉发酵液添加甘氨酸和腺嘌呤,不能有效提升虫草素的含量.[结论]成功在米曲霉异源表达合成虫草素.

[目的]为解决在D-乳酸工业发酵生产中使用农业粗加工或废弃物等廉价原料(含有少量L-乳酸)而导致终产物D-乳酸光纯降低的问题.[方法]构建了带有不同启动子的L-乳酸脱氢酶基因lldD的表达质粒:pUC19-PLD(PpflBp6)、pUC19-NLD(PnirB)及pUC19-PNLD(PpflBp6-PnirB),并将它们分别转化入大肠杆菌D-乳酸工程菌HBUT-D中,得到菌株HBUT-D3、HBUT-D5 和HBUT-D7.通过LldD的酶活检测以及对NBS培养基(添加 1 g/L L-乳酸)发酵结果的TOPSIS多元评估,优选出可快速去除L-乳酸且不影响D-乳酸发酵的菌株,并使用农业廉价原料进行发酵.[结果]HBUT-D7 的LldD比酶活为64 U/g,L-乳酸的消耗速率为 34 mg/(L·h),D-乳酸的生产强度为 4.09 g/(L·h),综合评估为最优菌株.以玉米浆为原料进行发酵时,HBUT-D及HBUT-D7 的L-乳酸消耗速率分别为 10.41 mg/(L·h)及 34.75 mg/(L·h);D-乳酸生产强度分别为 4.24 g/(L·h)及 3.87 g/(L·h);D-乳酸光学纯度分别为 99.07%及 99.92%.以糖蜜为原料进行发酵时,HBUT-D及HBUT-D7 的L-乳酸消耗速率为6.87 mg/(L·h)和 17.18 mg/(L·h);D-乳酸生产强度分别为 1.93 g/(L·h)及 1.88 g/(L·h);D-乳酸光学纯度分别为 99.22%及 99.99%.[结论]厌氧诱导启动子的表达质粒可提高菌株HBUT-D7 的L-乳酸脱氢酶酶活,使其在使用廉价原料发酵时能有效消除L-乳酸,提高发酵终产物D-乳酸的光学纯度.

目的 分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者医院革兰氏阴性杆菌肺炎病原菌分布及耐药性.方法 回顾性分析120例COPD患者医院感染的临床资料,分析病原菌培养、药敏实验结果及诊治预后情况.结果 120例医院感染革兰氏阴性杆菌肺炎患者共计分离136株病原菌,革兰氏阳性菌4株占2.94％,革兰氏阴性菌132株占97.06％,革兰氏阴性菌中非发酵菌和肠杆菌属占比接近,非发酵菌以铜绿假单胞菌、鲍曼溶血不动杆菌为主,肠杆菌属中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主.铜绿假单胞菌、鲍曼溶血不动杆菌对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿奇霉素、阿莫西林/克拉维酸的耐药率均低于10％,而对头孢唑林、头孢哌酮、头孢噻肟、哌拉西林、环丙沙星、头孢他啶耐药率则高于50％,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢曲松的耐药率介于10％～50％之间;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿奇霉素的耐药率均为0,对阿莫西林/克拉维酸耐药率低于10％,对头孢他啶、头孢唑林、头孢哌酮、环丙沙星的耐药率均高于50％,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢曲松、哌拉西林、头孢噻肟的耐药率介于10％～50％之间.120例医院革兰氏阴性杆菌肺炎患者经治疗后,3例死亡,117例患者预后良好.结论 COPD患者医院感染革兰氏阴性杆菌肺炎患者病原菌分布广泛,部分病原菌对现有抗菌药物耐药性较高,临床应定期总结病原菌分布情况及耐药性,为临床经验性抗菌药物提供指导,确保患者得到及时有效的抗菌治疗,获得良好预后.

目的 了解居民对米酵菌酸的认知、态度、行为情况及其影响因素,为米酵菌酸食物中毒事件预防措施与健康教育策略的制定提供参考.方法 2023年4月29 日-5月3日以微信公众号发布的网络问卷进行现况调查,收集居民基本情况、米酵菌酸相关知识、行为和态度3个维度的信息.调查对象按性别、年龄调整权重后采用x2检验对米酵菌酸知信行情况进行单因素分析;采用单因素和多因素logistic回归模型对调查对象三维度得分进行多因素分析.结果 最终获得有效问卷10 754份,有效率为88％(10 754/12 231).居民对米酵菌酸知识总体知晓率为50％,行为总体正向率为50％,态度总体积极率为43％.居民米酵菌酸食物中毒防治知信行总体合格率在不同性别、民族、学历、年龄、职业、居住地属性以及月均收入人群中的差异均有统计学意义(x2=56.76、316.50、131.19、360.02、75.09、282.14、78.98,P均＜0.05).女性知识、行为、态度得分均高于男性(OR=1.649、1.207、1.108,95％CI:1.506～1.805、1.108～1.315、1.017～1.207).小学/初中及以下学历(OR=0.615,95％CI:0.499～0.753)、农村地区(OR=0.613,95％CI:0.479～0.779)知识得分更低.月收入＜2 000元人群知识和行为得分均低于月收入10 000～元人群(OR=0.746、0.672,95％CI:0.615～0.903、0.565～0.799).10～＜25岁人群知识和行为得分较其他年龄组低.结论 居民米酵菌酸知识和态度整体水平低,预防米酵菌酸中毒的行为正确水平有待提高.需针对男性、年轻、低学历、月收入低及非城市居民制定相应的健康教育策略.