槐米[1](Flos Sophorae Immaturus)为豆科植物槐树(Sophora japonica)的干燥花及花蕾,是药食同源的一种药材,其中芦丁和槲皮素是主要药用成分,具有清热,凉血,止血的功效,主要用于降低人体血脂和胆固醇,治疗高血压、心血管疾病等多种疾病[2].本研究将纳豆菌和槐米共同发酵,通过单因素实验、正交试验获得最佳发酵条件提高芦丁、槲皮素及总黄酮的含量,利用槐米发酵液进行体外抗氧化、抗血栓研究.

目的:观察由纳豆和补气活血方药对气虚血瘀证大鼠表征和不同部位组织血流量的影响.方法:通过饥饿+低温力竭游泳的方法复制大鼠气虚血瘀模型,将70只SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组,气虚血瘀模型组,阳性药组(14.0 g/kg),纳豆组(1.875 g/kg),纳豆+补气活血方药高、中、低剂量组[(1.875+12.5)、(1.875+6.25)、(1.875+3.175) g/kg],每组10只,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,阳性药组给予补养还五汤,纳豆+补气活血方药高、中、低剂量组给予相应剂量纳豆+补气活血方药,纳豆组给予纳豆冲剂灌胃,除空白组外,其余各组边造模边给药,连续60 d后,分别根据拟定的标准对各组大鼠表征进行观察评分,将大鼠麻醉后,用激光多普勒血流仪测定大鼠不同组织部位血流量变化情况,之后取材备用.结果:与空白组比较,模型组大鼠表征舌质由淡红转化为黯紫,精神状态不佳,便溏,毛发枯黄,易脱落,尾部和肾部的组织血流量显著下降(P＜0.01),但肝部血流量显著升高(P＜0.01).给药后,纳豆+补气活血方药高、中剂量能显著改善大鼠精神不佳、舌质黯紫等表征(P＜0.05),纳豆组、纳豆+补气活血方药高、中、低剂量组对可以显著升高尾部、肾部血流量(P＜0.01),纳豆组、纳豆+补气活血方药高、低剂量组可以显著降低肝部血流量(P＜0.01).结论:纳豆+补气活血方药可以有效改善气虚血瘀证大鼠各部位组织血流量的异常,提示其能对气虚血瘀证大鼠有补气活血功效,纳豆对肝脏起到一定的保护作用.

目的 观察纳豆+甘麦大枣加味汤对气虚血瘀大鼠血液流变学和凝血功能的影响.方法 采用饥饿和力竭游泳的方法复制大鼠气虚血瘀模型,边造模边给药,各组给药干预60 d后,采用半自动血流仪测定大鼠血液及血浆黏度,全自动血凝仪检测凝血4项相关指标.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量显著下降(P<0.01),全血黏度显著降低(P<0.05),PT显著升高(P<0.01),APTT以及Fbg均显著下降(P<0.01).与模型组比较,纳豆+自拟方药高、中剂量组能够显著升高200 s-1和50 s-1切变率下的全血黏度(P<0.05),显著降低PT时间(P<0.01),升高Fbg含量(P<0.05).结论 食品纳豆不能显著改善大鼠气虚血瘀模型,但有改善的趋势,且纳豆+甘麦大枣加味汤可显著改善大鼠血黏度和凝血功能,具有很好的补气益血化瘀的作用.

目的:观察诺丽果汁和纳豆两种发酵食品对实验性糖尿病小鼠血糖及血脂的影响.方法:ICR雌性小鼠一次性尾静脉注射四氧嘧啶(55 mg/kg),72 h后将空腹血糖值≥12.00 mmol/L、尿糖呈强阳性(+++)者视为糖尿病小鼠模型将糖尿病模型小鼠随机分为3组(n=10):模型(DM)组、诺丽果汁(NJ)组和纳豆(NT)组,另取10只正常ICR雌性小鼠作为正常对照(NC)组.NJ组、NT组分别给予诺丽果汁(25.0 ml/kg)、纳豆(0.6 g/kg)灌胃,其他两组小鼠分别给予生理盐水(25.0 ml/kg)灌胃,连续给药30 d,小鼠自由进食、饮水,记录小鼠饮水量及进食量. 末次给药后1.5h,测定小鼠葡萄糖耐量,经股动脉采血测定小鼠糖化血清蛋白(GSP)、血清胰岛素(Ins)和血脂等指标的变化情况.结果:与NC组比较,DM组小鼠饮水量、进食量、GSP及血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)等均显著升高(P＜0.01),葡萄糖耐量、Ins及高密度脂蛋白(HDL)均显著降低(P＜0.01);与DM组比较,NJ组与NT组小鼠GSP、TG及LDL均明显降低(P＜0.01,P＜0.05),葡萄糖耐量、Ins和HDL明显升高(P＜0.05).结论:诺丽果汁与纳豆具有降低糖尿病模型小鼠血糖、增加糖耐量及改善血脂的作用,提示二者对糖尿病防治可能具有一定的应用价值.

目的 探讨苗岭纳豆素胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 48只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,阳性药物普萘洛尔组,苗岭纳豆素胶囊高、中、低剂量组;假手术组及模型组每天按1 mL/100 g灌胃生理盐水,普萘洛尔阳性组,高、中、低剂量组,药物用生理盐水配置,灌胃给药,每天2次.用8％水合氯醛麻醉,按结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支方法造模,缺血30 min,再灌注180 min,实时监测心电图ST段及T波的变化.假手术组只穿线不结扎冠状动脉前降支.再灌注末股动脉采血,检测血清中谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)等相关指标变化,同时利用TTC染色法对各组心肌梗死面积进行测定.结果 与假手术组比较,模型组ST段明显抬高或T波高耸,血清中AST、LDH、CK-MB活性及cTnⅠ、MDA、TNF-α的量均明显升高,SOD活性显著降低,梗死面积显著增大(P＜0.01或P＜0.05).与模型组比较,普萘洛尔组和苗岭纳豆素胶囊各剂量组抑制ST段抬升或T波增大,降低AST、LDH、CK-MB释放,同时显著抑制血清中cTnⅠ、MDA、TNF-α上升,提高SOD活力(P＜0.01或P＜0.05),并且心肌梗死面积明显减小(P ＜0.001).结论 苗岭纳豆素胶囊对心肌缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用.

目的 探讨10批不同发酵时间的纳豆芽孢杆菌纯种发酵淡豆豉提取物的高效液相色谱 (HPLC) 图谱中主要色谱峰与促大鼠成骨细胞增殖活性的相关性,为表征纯种发酵淡豆豉抗骨质疏松作用物质基础和优化单一菌种发酵淡豆豉工艺提供依据.方法 HPLC建立纯种发酵不同时间淡豆豉的乙醇提取物指纹图谱 (纳豆芽孢杆菌纯种发酵6、12、18 h、1～7 d:H6、H12、H18、D1～D7) ;噻唑蓝 (MTT) 法测定各提取物的促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性,并通过高效液相色谱-质谱联用 (HPLCMS) 技术对色谱峰进行确认;灰色关联度分析法研究其谱效关系.结果 纯种发酵不同时间的淡豆豉乙醇提取物在质量浓度100μg·L-1时均具有较明显的促成骨细胞增殖作用,发酵4 d时活性最强,其促成骨细胞增殖率可达43.6％.谱效关系分析表明,与药效关联度较高的是黄豆黄素、染料木苷、黄豆黄苷和大豆苷.结论 关联度分析结果中黄豆黄素,染料木苷,大豆苷与课题组前期体外活性实验结论相互佐证,证实了本实验中谱效关系分析的科学性.与前期研究结果相比,纯种发酵淡豆豉与自然发酵淡豆豉的促成骨细胞增殖活性成分基本一致.

目的:研究温度、pH、金属离子对纳豆激酶稳定性的影响.方法:采用琼脂糖—纤维蛋白平板法测定活性.结果:纳豆激酶在低于40 ℃相对稳定,高于45℃时活性下降趋势明显,55 ℃活性完全丧失;纳豆激酶的最适pH为7.0,在6.0～9.0相对稳定;Mg2+、Ca2+、Na+对于NK有明显的激活作用,低浓度K+没有明显的激活或抑制作用,高浓度的K+对纳豆激酶的活性有抑制作用,Fe2+、Zn2+、Cu2+、Ba2+、Al3+、Mn2+对NK的活性有不同的抑制作用.结论:纳豆激酶的保存温度要低于40 ℃,pH值在6.0～9.0的环境下,也可适当加入Mg2+、Ca2+、Na+增加NK的稳定性.

考察了纳豆菌接种量、料液比、发酵温度及发酵时间对纳豆菌发酵豆粕产生的纳豆多糖得率的影响,进行了响应面设计实验,得出最佳发酵工艺参数;探究了纳豆多糖的抗氧化活性,并与维生素C进行比较.实验结果表明:接种量为0.6％,料液比为1∶3,发酵温度40℃,发酵时间48 h,在此工艺条件下水溶性纳豆多糖得率最高为4.371％.纳豆多糖浓度为1.5 mg/mL时,对羟基自由基的清除率是50.07％,对超氧阴离子自由基的清除率达95.79％,对DPPH自由基的清除率为16.35％.

目的:探讨黄豆、黑豆混合后发酵与发酵后混合大豆异黄酮含量的差异及最佳配比.方法:以枯草芽孢杆菌菌种,黑豆与黄豆按3:1、2:1、1:1、1:2、1:3比例混合后发酵及发酵后混合制备样本,以色谱柱Symmetry?-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)、流动相为甲醇-0.5％ 乙酸梯度洗脱、检测波长254 nm、流速1.0 mL/min、柱温40℃ 、进样量10μL为条件测定样品大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量.结果:大豆苷、染料木苷、大豆苷染料木苷总量含量在1:3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品;大豆苷元含量在3:1、2:1、1:1、1:3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品;染料木素含量在3:1、2:1、1:3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品;大豆苷元染料木素总量含量在3:1、2:1、1:1、1:3时混合后发酵样品高于发酵后混合样品.结论:黄豆、黑豆混合后发酵优于发酵后混合,并以1:3配比时为最优.

旨在获得纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌种间融合高产Surfactin的新菌株.以纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌为亲本菌株,通过制备纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌的原生质体,采用PEG介导的双亲灭活标记法融合原生质体,拟融合子通过PCR鉴定、CPC-BTB法高通量筛选、HPLC复筛以及融合菌株的稳定性验证获得高产Surfactin的新菌株.研究结果表明纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌的原生质体制备最佳酶解浓度分别为0.25 mg/mL和0.2 mg/mL,最佳酶解时间分别为25 min和20 min,其原生质体得率分别为83.1％ 和84.3％.两者的原生质体融合条件为:纳豆芽孢杆菌紫外灭活80 min,暹罗芽孢杆菌85℃热灭活40 min,融合体系为50％ 的PEG6000在38℃下融合时间15 min.获得了遗传稳定的融合菌株F8,该菌株Surfactin产量相对于纳豆芽杆菌提高了33.3％,暹罗芽孢杆菌提高了60％.