目的:探讨双环醇对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肾损伤(AKI)的肾保护作用及其相关机制。方法:选择2018年5月至2018年6月自武汉大学动物实验中心购买的雄性SD大鼠48只，随机分为五组：对照组(12只)、LPS诱导组(LPS组，12只)和三个双环预处理组(LPS+双环醇组，24只)，其中低剂量组(LPS+BL组)、中剂量组(LPS+BM组)、高剂量组(LPS+BH组)各8只。在LPS+双环醇组中，大鼠连续3 d接受3种不同剂量的双环醇灌胃。在最后一次给药后3 h，LPS组和LPS+双环醇组接受腹腔注射LPS诱导AKI模型。采用血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、组织学检查评估肾损伤。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。行TUNEL染色评估肾细胞凋亡，采用Western blot法测定Bax、Bcl-2、Caspase-3、TLR4、NF-κB/p65和p-IκBα蛋白的表达。结果:与LPS组比较，双环醇预处理各组的BUN和Scr水平均显著降低(均 P<0.01)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均降低(均 P<0.05)，IL-10表达水平显著升高( P<0.001)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的肾损伤评分均明显降低(均 P<0.05)。与LPS组比较，双环醇预处理各组的凋亡细胞数量均明显减少(均 P<0.05)。与LPS组比较，双环醇预处理各组的Bax和裂解Caspase-3的蛋白表达水平均明显降低(均 P<0.05)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的TLR4、核NF-κB/p65和p-IκBα蛋白表达水平均明显降低(均 P<0.05)。 结论:双环醇对LPS诱导的AKI具有肾保护作用，其相关机制与通过TLR4/NF-κB信号通路调节炎性细胞因子的产生和Bax/Bcl-2依赖的凋亡级联有关。

目的:探讨影响脑胶质瘤恶性进展、患者生存预后的关键基因及其在脑胶质瘤中的表达特征和临床意义。方法:回顾性分析中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)RNA测序数据库310例、癌症基因组图谱(TCGA)RNA测序数据库699例、GSE16011 mRNA芯片数据库268例和REMBRANDT mRNA芯片数据库中317例脑胶质瘤患者的临床资料及其脑胶质瘤样本的测序数据，筛选出与患者预后相关的共同差异基因，通过文献检索确定目标基因。在上述4个数据库中评价该目标基因的表达特征。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线及单因素和多因素Cox回归分析法评价该目标基因对脑胶质瘤患者预后的作用。通过Pearson相关检验，筛选出CGGA和TCGA数据库中与目标基因表达呈正相关( r>0.5且 P<0.05)的基因，进一步利用在线软件DAVID对其进行生物功能聚集分析。采用实时荧光定量聚合酶联链式反应(qRT-PCR)检测星形细胞株和脑胶质瘤细胞株中该基因的表达量。采用细胞免疫荧光染色法检测经药物处理后脑胶质瘤细胞株(U87、U251和LN229)中γ-H2AX蛋白的表达情况。 结果:经筛选，组蛋白1H2BH(HIST1H2BH)为目标基因。在上述4个数据库中，HIST1H2BH的表达量在世界卫生组织(WHO)Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ级间的差异均有统计学意义(均 P<0.01)，其中在Ⅳ级中最高，Ⅱ级中最低；且HIST1H2BH在异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型脑胶质瘤中的表达量均高于IDH突变型(均 P<0.001)。在CGGA和TCGA数据库中，全级别脑胶质瘤和胶质母细胞瘤患者，HIST1H2BH高表达组的总体生存率均低于低表达组(均 P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示，HIST1H2BH表达量高是影响脑胶质瘤患者总生存期的危险因素( HR＝1.275，95% CI：1.040~1.563， P<0.05)。生物功能富集分析结果显示，与HIST1H2BH表达量呈正相关的基因主要参与细胞增殖、DNA损伤修复和细胞外基质调控。qRT-PCR结果显示，HIST1H2BH在HA、U87、U251和LN229细胞株中相对表达量的差异有统计学意义(分别为1.03±0.03、1.62±0.08、3.41±0.27、2.86±0.20， P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示，经替莫唑胺处理后，U87细胞株的γ-H2AX蛋白的表达水平较U251和LN229细胞株增加( P<0.05)。 结论:HIST1H2BH在脑胶质瘤中的表达随病理学级别的升高而增加，是影响脑胶质瘤患者生存期的危险因素，可能与其参与DNA损伤修复从而引起肿瘤细胞耐药有关。

目的:制备出具备生物学活性的羊膜粉并探索其保存条件，探讨该羊膜粉制成的羊膜-纤维蛋白胶泥（AM-FS）对兔重度眼表碱烧伤模型的疗效。方法:实验研究。取新鲜羊膜风干后液氮冷却研磨成颗粒直径<260 μm的羊膜粉并进行灭菌。检测该羊膜粉制备后及不同温度［室温（25℃）、4 ℃、-20 ℃］下保存10、20、30 d后转化生长因子β（TGF-β）、神经生长因子受体（NGFR）、肝细胞生长因子（HGF）、表皮生长因子（EGF）及碱性成纤维生长因子（bFGF）的表达，并与新鲜羊膜进行比较。倍比稀释制备0.125~65 mg/ml共10种羊膜粉浓度及不含羊膜粉的AM-FS，将兔角膜上皮细胞（CEC）置于其中培养72 h，选取波长450 nm处的吸光度（ A）值最大者，以其羊膜粉浓度进行后续动物实验。将32只兔（32只右眼）制作重度眼表碱烧伤模型，采用随机数表法分为AM-FS组、新鲜羊膜移植组、纤维蛋白胶（FS）组及抗生素对照组每组8只兔（8只眼），给予不同眼表干预手段，之后每周观察角膜修复情况，第28 d取材行HE染色观察角膜组织，并行免疫组织化学染色观察单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。对生长因子或受体的表达差异倍数进行对数处理后得到的logFC值并用BH法校正；采用 t检验及方差分析对数据进行统计学分析。 结果:羊膜粉中TGF-β与NGFR的表达量低于新鲜羊膜，logFC分别为-0.11、-2.07。羊膜粉中HGF、EGF、bFGF的表达量均高于新鲜羊膜，logFC分别为0.72，0.46，2.62（ P<0.05）；保存10、20 d的羊膜粉中HGF、bFGF、EGF的表达均不低于新鲜羊膜；30 d时羊膜粉除HGF、bFGF外其余生长因子或受体的表达较新鲜羊膜下降，室温保存者HGF、bFGF、EGF的表达均不低于4 ℃和-20 ℃保存者。CEC培养72 h后0.25 mg/ml的羊膜粉的 A值最大（0.98±0.05）。AM-FS组与新鲜羊膜移植组角膜恢复情况较好，第28 d的角膜混浊程度评分分别为（3.75±0.46）和（3.50±0.46）分，低于抗生素对照组的（4.29±0.45）分（ t=2.480，3.629； P=0.019，0.001），而两者间的差异无统计学意义（ t=1.148， P=0.261）。抗生素对照组的角膜新生血管面积与其他3个组比较，差异均有统计学意义（ t=4.040，4.339，2.820；均 P<0.01）；干预后7和28 d，AM-FS组的角膜新生血管面积分为（9.88±0.20）和（18.96±0.18）mm 2，均大于新鲜羊膜移植组的（9.54±0.22）和（18.08±0.96）mm 2（ t=3.085，3.017；均 P<0.01），而在第14和21 d两组差异无统计学意义（ P>0.05）。光镜下可见AM-FS组和新鲜羊膜移植组的角膜结构完整，上皮细胞排列趋于正常，角膜愈合优于FS组和抗生素对照组。VEGF在新鲜羊膜移植组的阳性表达弱于其余3个组；MCP-1在AM-FS组和新鲜羊膜移植组的表达水平相似。 结论:本研究制备的风干羊膜粉中活性生长因子表达量高，性质稳定可室温保存；羊膜粉浓度为0.25 mg/ml的AM-FS可促进兔眼碱烧伤后角膜上皮的修复、减轻炎性反应及角膜新生血管。

目的:研究及分析动脉粥样硬化患者外周血单核细胞差异表达基因，筛选动脉粥样硬化潜在的分子标志物。方法:通过GEO数据库获取GSE23746和GSE9820基因芯片数据集。GSE23746包含了76例就诊于华盛顿大学附属医院的颈动脉粥样硬化患者及19例对照者的单核细胞样本。GSE9820包含了18例就诊于荷兰阿姆斯特丹自由大学医学中心的重度病变的冠心病患者及13例对照者的单核细胞样本。分别筛选颈动脉粥样硬化患者及冠状动脉粥样硬化患者相对于对照组的差异表达基因，并确定两个数据集的共同差异表达基因。然后对差异表达基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。再对差异表达基因进行蛋白相互作用网络（PPI）分析，并选出关键基因。结果:在颈动脉粥样硬化和冠状动脉粥样硬化患者的外周血单核细胞中分别筛选出16个和153个下调的差异表达基因。颈动脉粥样硬化的差异表达基因主要参与炎症反应、中性粒细胞趋化、免疫应答等生物过程；富集到的KEGG通路包括Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路、NOD样受体信号通路。冠状动脉粥样硬化的差异表达基因主要参与的生物过程包括核小体装配、凝血、基因表达的调控；富集到的KEGG通路包括系统性红斑狼疮以及细胞因子趋化通路。通过构建PPI网络，在颈动脉粥样硬化患者中识别出5个枢纽基因TNF、IL1B、趋化因子（C-X-C基序）配体8（CXCL8）、趋化因子（C-C基序）配体4（CCL4）、B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子（NFKBIA），在冠状动脉粥样硬化患者中识别出5个枢纽基因（组蛋白HIST1H2AC、HIST1H2BJ、HIST1H2BH、HIST2H2AC、HIST2H2BE），这些基因主要参与炎症反应及炎症信号分子的转录和表达。同时还筛选出两个数据集的共同差异表达基因早期生长反应基因1（EGR1）和趋化性细胞因子配体CCL3样蛋白1（CCL3L1）。结论:基于GEO数据库的生物信息学分析，动脉粥样硬化患者外周血单核细胞的炎症信号被抑制；共同差异表达基因EGR1和CCL3L1可作为潜在的生物标志物用于动脉粥样硬化的筛查。这为动脉粥样硬化的机制研究和临床诊疗提供新的思路。

目的 探讨钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)卡格列净和上皮钠通道阻滞剂阿米洛利或苯扎米尔联用对阿霉素诱导的肾病综合征(NS)模型大鼠骨代谢的影响.方法 取49只雄性SD大鼠,随机抽取7只为对照组(NG组).其余42只通过尾静脉注射阿霉素造模并随机分为模型组(MG组)、卡格列净组(KG组)、苯扎米尔组(BH组)、阿米洛利组(AL组)、卡格列净+苯扎米尔组(KB组)、卡格列净+阿米洛利组(KA组),每组7只.各用药组每日定时按大鼠体质量予以灌胃,NG组和MG组给予等量生理盐水,疗程6周.治疗前1 d检测各组大鼠的24 h尿蛋白(24 h-UTP),验证模型制备成功.治疗后第6周,分别检测各组大鼠的24 h-UTP、尿钠(UNa)、尿钾(UK)以及血清白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、血钙(SCa)、血钠(SNa)、血钾(SK)、25-羟维生素D(25-OH-D)、碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺素(PTH)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)和Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)水平.结果 造模成功后,MG组的24 h-UTP、TG、TC、LDL、SCa水平均升高,ALB、25-OH-D、ALP、PINP、PTH水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).药物干预6周后,KG组大鼠体质量下降,差异有统计学意义(P＜0.05).与MG组比较,各药物组的24 h-UTP、TC、TG、LDL、SCa水平降低,ALB水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与MG组比较,KA组的25-OH-D、ALP、PINP、β-CTX水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).造模及药物治疗对UNa、UK、SK、SNa水平无影响(P＞0.05).结论 单用卡格列净、苯扎米尔组、阿米洛利以及卡格列净分别联合苯扎米尔、阿米洛利用药均可改善阿霉素诱导的NS模型大鼠的大量蛋白尿、低蛋白血症和高脂血症.联用卡格列净和阿米洛利具有显著的促成骨作用或促破骨作用,其可能通过形成新的成骨/破骨平衡,进而发挥降低NS大鼠骨折风险的作用.

目的 观察甲泼尼龙预处理对大鼠机械通气相关性肺损伤的影响,并探讨其机制.方法 实验大鼠分为C组、V组、Mp1组、Mp2组、Mp3组,各20只.C组不行机械通气,自主呼吸空气4 h;V组、Mp1组、Mp2组、Mp3组机械通气4h,机械通气前20 min后三组分别静脉输注甲泼尼龙2、10、30 mg/kg,V组静脉输注等容量生理盐水.比较各组插管即刻(T1)及机械通气1、2、4 h(T2-4)时股动脉血氧合指数(OI).光镜下观察各组肺组织病理学变化情况.比较各组T4时肺通透指数(LPI)、肺湿/干重(W/D)、肺泡损伤率(IAR)、肺组织细胞凋亡指数(AI).采用RT-PCR法检测肺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK) mRNA表达.采用Western blotting法检测JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、唯BH3结构域蛋白(BID、BIM、PUMA)、Caspase-3蛋白表达.结果 与C组相比,V组和Mp1组T3、T4时OI低,W/D、LPI、IAR、AI高,p-JNK蛋白、JNK mRNA、BID、BIM、PUMA、Caspase-3表达高(P均＜0.05).与V组相比,Mp2、3组T34时OI高,W/D、LPI、IAR、AI低,p-JNK蛋白、JNK mRNA、BID、BIM、PUMA、Caspase-3表达低(P均＜0.05),且肺组织病理损伤轻.结论 甲泼尼龙预处理可减轻大鼠机械通气相关性肺损伤,这可能与其抑制肺组织JNK磷酸化,下调唯BH3结构域蛋白表达,抑制Caspase-3表达,减少肺组织细胞凋亡有关.

目的 探讨二氢生物喋呤还原酶(QDPR)高表达对脂肪酸(PA)诱导的细胞凋亡的作用.方法 HEK293T细胞转染实验分为A、B、C 3组,A组为空载体转染组,B组为经过PA刺激的空载体转染组,C组为经过PA刺激的QDPR重组质粒转染组.首先将空载体及构建的QDPR重组质粒分别转染至HEK293T细胞,培养24 h后采用0. 5 mmol/L PA刺激上述细胞,将没有经过PA刺激的空载体组细胞、PA刺激的空载体组细胞和PA刺激QDPR重组质粒组细胞三组细胞继续培养24 h后收集细胞.采用四氢生物喋呤(BH4)和活性氧簇(ROS)检测试剂盒检测3组BH4和ROS的生成量;采用Western blot法检测3组凋亡相关蛋白Beclin 1 、Caspase 3和Beclin 2的表达.结果 ①转染细胞后,QD-PR融合蛋白成功表达;②与A组相比,B组的BH4生成量差异无统计学意义;与B组相比,C组BH4生成量明显增多(P<0.05);③与A组相比,B组的ROS生成量明显增加(P<0.05);与B组相比,C组ROS生成量明显下降(P<0. 05);④Western blot结果显示:与A组相比,B组经过PA刺激后细胞中Beclin 1和Caspase 3表达水平显著上调(P< 0.05),Beclin 2表达水平下降(P<0. 05);QDPR过表达后C组Beclin 1和Caspase 3表达水平显著下调(P<0. 05) , Beclin 2表达水平升高(P<0.05).结论 QDPR高表达后,可以刺激BH4的生成,同时能降低PA诱导的ROS的生成量,还可以降低细胞凋亡相关蛋白Beclin 1和Caspase 3的表达,增强抗凋亡蛋白Beclin 2的表达,提示其可能通过调节 BH4和ROS含量影响细胞凋亡.

目的 探讨右美托咪定(DEX)对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法将大鼠分为五组(每组n =20):对照组(C组)、机械通气组(V组)和不同剂量右美托咪定组(DEX 1 ～3组).机械通气参数设置:潮气量40 mL/kg,呼吸频率50次/min,吸呼比1: 1,FiO2 21％.DEX 1 ～3组机械通气前20 min分别静脉输注DEX 0.5、2.5、5.0 μg/kg,机械通气期间DEX分别以0.5、2.5、5.0μg/(kg-h)的速率静脉输注4 h.于插管即刻及机械通气1、2和4 h时采集股动脉血样,进行动脉血气分析,并记录 Pa02,计算氧合指数(01).机械通气4 h时处死大鼠,回收肺泡支气管灌洗液(BALF),测定肺通透指数(LPI),取左肺下叶,测定肺湿/干质量(W/D)比值.采用Western blot法检测JNK、p- JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3和唯BH3结构域促凋亡因子(BID、BIM)的表达水平.采用RT- PCR法检测JNK mRNA的表达.光镜下,观察肺组织病理学结果,测定肺泡损伤率(IAR),采用 TUNEL法观察肺组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数.结果 与C组比较,V组和DEX 1组01降低,W/D比值、LPI、IAR(％ )、AI(％ )升高,p-JNK和JNK mRNA表达上调,促凋亡因子BID、BIM的表达增加,同时伴有Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3表达增加(P＜0.05),DEX 2、3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与V组比较,DEX 2、3组01升高,W/D比值、LPI、IAR(％ )、AI(％ )降低,p-JNK和JNK mRNA表达下调,促凋亡因子BID、BIM表达减少,同时伴有 Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Caspase-3表达减少(P＜0.05),DEX 1组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与V组比较,DEX 2、3组肺组织病理损伤减轻,TUNEL法检测细胞凋亡减少.结论 DEX可减轻大鼠机械通气相关性肺损伤,与其抑制肺组织JNK磷酸化,下调唯BH3结构域促凋亡因子BID、BIM的表达,进而上调Bcl-2表达,下调Bax表达,抑制Caspase-3表达来减少肺组织细胞凋亡,减轻肺损伤有关.

目的 观察热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对间充质干细胞C3H10T1/2增殖、凋亡及成骨分化的影响.方法 用0、0.001、0.010、0.100和1.000 μmol/L浓度17-AAG处理C3H10T1/2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测C3H10T1/2增殖;流式细胞术检测0、0.1和1.0 μmol/L浓度17-AAG作用下细胞的凋亡率;0、0.1、0.5、1.0 μmol/L 17-AAG处理后,Western blot检测凋亡相关蛋白的变化,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3试剂盒检测Caspase-3酶活性的变化;0、0.01 μmol/L17-AAG处理后,碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性测定检测两组成骨分化的强弱.结果 0、0.001、0.010、0.100和1.000 μmol/L 17-AAG处理细胞后,随着浓度增加,C3H10T1/2的生长增殖明显受到抑制,呈时间浓度依耐性.流式细胞术检测,0、0.1、1.0 μmol/L 3组凋亡率分别为(1.36±0.43)％、(5.37±1.10)％、(13.30±1.94)％,0.1、1.0 μmol/L组较对照组差异均有统计学意义(P=0.014、0.011),0.1、1.0μmol/L两组之间差异也有统计学意义(P=0.048).Western blot结果显示随着17-AAG浓度的升高,抗凋亡蛋白B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)减少,促凋亡蛋白bcl-2相关X蛋白(bax)、BH3结构域凋亡诱导蛋白(bid)表达增加.Caspase-3活性测定17-AAG浓度0.1、0.5、1.0 μmol/L组与对照组比值分别为1.84 ±0.11、2.19±0.13、2.79 ±0.24,与对照组比较差异均有统计学意义(P =0.006,P=0.004,P=0.006).成骨诱导14d,0.01 μmol/L组ALP染色比未处理组颜色加深,0.01 μmol/L组ALP活力与对照组ALP活力比值为1.646 ±0.139,差异有统计学意义(P=0.015).结论 高浓度17-AAG抑制间充质干细胞C3H10T1/2的增殖,促进其凋亡,低浓度17-AAG能促进C3H10T1/2的成骨分化.

目的 通过筛选细胞凋亡差异表达蛋白,探讨1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)诱导人星形胶质细胞(HAs)凋亡的相关分子机制.方法 以终浓度分别为0 ～ 80 mmol/L或0～ 40 mmol/L的1,2-DCE染毒HAs,培养24h后,采用磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞技术检测细胞凋亡,采用AAH-APO-1-2蛋白芯片筛选差异表达蛋白,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证相关蛋白的差异表达基因.结果 在1,2-DCE浓度为0 ～ 80 mmol/L时,随着染毒剂量增加,HAs细胞总凋亡率升高,呈剂量-效应关系(P＜0.01).凋亡蛋白芯片筛选出7个差异表达蛋白,其中,与对照组比较,胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)-1、IGFBP-4和细胞色素C(Cyto C)表达均上调,P27、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2相互作用的细胞死亡中介物(BIM)和BH3交叉域死亡受体激动剂(BID)表达均下调.差异表达基因的qRT-PCR验证结果显示,40 mmol/L剂量组HAs中IGFBP-1、IGFBP-4和Cyto C的mRNA表达上调,与蛋白芯片的表达趋势一致;该组HAs中Caspase-3、BIM、BID的mRNA表达也上调.结论 1,2-DCE可能通过线粒体通路诱导HAs凋亡.