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转录组和代谢组分析盐度对盐单胞菌合成羟基四氢嘧啶的影响
编辑人员丨2024/7/27
为了明确不同盐度对Halomonas campaniensis XH26合成羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)代谢通路和基础代谢的影响,研究采用无NaCl作为对照组,以12%、14%和16%NaCl浓度梯度作为高盐组.利用转录组测序和液质联用技术(LC-MS)分析了H.campaniensis XH26在不同NaCl浓度条件下的差异表达基因和差异代谢物,并利用qPCR对与Ectoine和5-HE合成密切相关的差异基因的表达量进行了相对定量分析验证.结果显示,5-HE合成量在高盐组间随盐梯度先增加后降低,并在14%NaCl浓度时达到最高.转录组结果显示,在186个KEGG代谢通路中,差异表达基因在ABC转运蛋白、双组分系统、鞭毛组装等通路中高度富集.筛选到与5-HE合成代谢相关的7个关键基因表达存在差异,包括lysC、ectA、ectB、ectC、ectD、doeC和doeD.qPCR验证结果与转录组学分析结果基本一致.代谢组分析共发现了 1159个差异代谢物,主要富集在氨基酸代谢、辅因子-维生素代谢和碳水化合物等代谢通路.研究还筛选出了显著差异的相容性溶质,包括四氢嘧啶、羟基四氢嘧啶和甜菜碱.研究分析了菌株H.campaniensis XH26的耐盐特性及盐适应机制,初步明确了5-HE产量及合成基因簇表达随盐度变化的规律,为高产5-HE的野生菌的优化和基因工程菌的构建提供了理论基础.
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编辑人员丨2024/7/27
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亚洲兰茂牛肝菌的化学成分及其活性
编辑人员丨2024/4/6
对亚洲兰茂牛肝菌 Lanmaoa asiatica("见手青")的化学成分和生物活性进行研究.采用多种柱色谱技术以及重结晶等方式对其 95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物进行分离纯化,共得到17 个单体化合物.根据波谱数据及文献比对鉴定了化合物的结构,其中 9 个为甾体类化合物:citreoanthrasteroid(1)、1(10→6)abeo-麦角甾-5,7,9,22-四烯-11β-甲氧基-3α-醇(2)、3β,5α,9α-trihydroxy-6β-methoxyergosta-7,22-dien(3)、过氧化麦角甾醇(4)、9(11)-去氢过氧化麦角甾醇(5)、3β-羟基-(22E,24R)-麦角甾-5,8(9),22-烯-7-酮(6)、(24S)-麦角甾-7-烯-3β-醇(7)、22E,24R-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(8)和麦角甾醇(9);其余化合物分别为:腺嘌呤核苷(10)、5′-deoxy-5′-methylamino-adenosine(11)、5′-deoxy-5′-methylamino-9-(α-L-lyxofuranosyl)adenine(12)、(R)-4-methylpiperidin-2-one(13)、尿嘧啶核苷(14)、尿嘧啶(15)、烟酰胺(16)和 1(2)-linolyl-2(1)-palmityl-glycero-O-4′-(N,N,N-trimethyl)homoserine(17).其中化合物 1-3的核磁信号全归属为首次报道,化合物 13为新天然产物,化合物1-17 均为该种首次分离.利用MTT法测定化合物对肿瘤细胞的细胞毒活性,结果显示甾体类化合物 1、3-6 和 9 对人乳腺癌细胞(MCF-7)、小鼠小胶质细胞(BV2)和人肺癌细胞(A549)均有较强的细胞毒活性.化合物 10 对BV2 细胞呈现出中等强度的细胞毒活性,其IC50 值为 48.34 μmol/L.本研究对亚洲兰茂牛肝菌的化学成分进行了较为系统的研究,对亚洲兰茂牛肝菌的进一步开发利用具有重要意义.
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编辑人员丨2024/4/6
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瑞舒伐他汀钙有关物质的合成
编辑人员丨2023/11/4
为控制瑞舒伐他汀钙的质量,制备了瑞舒伐他汀钙的5个有关物质:[(3R,5S,E)-7-[4-(4-氟苯基)-2-[[2-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[N-甲基(甲基磺酰胺基)]嘧啶-5-基]-2-羟基乙基]-N-甲基磺酰胺基]-6-异丙基嘧啶-5-基]-3,5-二羟基庚-6-烯酸酯]钙盐(有关物质A)、[(3R,5S,E)-7-[4-(4-氟苯基)-2-[[(E)-2-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[N-甲基(甲基磺酰胺基)]嘧啶-5-基]乙烯基]-N-甲基磺酰胺基]-6-异丙基嘧啶-5-基]-3,5-二羟基庚-6-烯酸酯]钙盐(有关物质B)、N--[4-(4-氟苯基)-5-[(E)-2-[(2R,4R)-4-羟基-6-氧代四氢-2H-吡喃-2-基]乙烯基]-6-异丙基嘧啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺(有关物质C)、N-[(R)-8-氟-6-[(2S,4R)-4-羟基-6-氧代四氢-2H-吡喃-2-基]-4-异丙基-5,6-二氢苯并[h]-喹唑啉-2-基]-N-甲基甲磺酰胺(有关物质D)、N-[(S)-8-氟-6-[(2S,4R)-4-羟基-6-氧代四氢-2H-吡喃-2-基]-4-异丙基-5,6-二氢苯并[h]喹唑啉-2-基]-N-甲基甲磺酰胺(有关物质E),并通过MS、1HNMR和比旋度对结构进行了确证.
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编辑人员丨2023/11/4
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赛艇测功仪2000m全力划过程中不同分段的血液代谢组学研究
编辑人员丨2023/10/21
目的:探究赛艇测功仪2000 m全力划过程中不同分段的血液代谢组学特征,分析不同分段与供能相关的潜在生物标志物.方法:选取12名男子赛艇运动员(一级运动员)在4天内依次进行赛艇测功仪2000 m全力划及过程中500、1000和1500 m模拟划测试,采集测试前安静状态和每次运动后即刻的肘静脉血样(分别标记为A、B、C、D和E组),基于高效化学同位素标记-液质联用(LC-MS)代谢组学技术进行分析.采用IsoMS Pro 1.2.15软件进行多元统计分析(PCA、PLS-DA)和火山图分析遴选出差异代谢物.差异代谢物通过MetaboAnalyst 5.0平台进行层次聚类分析,并结合Nova MT代谢组学数据库与HMDB在线数据库来注释潜在生物标志物和评估它们的生物学作用.结果:与A组(安静)相比,C组(500 m)运动后即刻的L-赖氨酸、鸟氨酸、丝氨酸、甘氨酸、4-羟脯氨酸和胱氨酸显著减少(P<0.01),N-甲基-L-谷氨酸、泛酸、对羟基苯乙酰甘氨酸、肌酐和腺嘌呤显著增加(P<0.01);与C组(500 m)相比,D组(1000 m)运动后即刻的4-羟脯氨酸、甘氨酸、四氢嘧啶、L-缬氨酸和5-氨基戊酸显著减少(P<0.01),泛酸、抗坏血酸、对羟基苯乙酰甘氨酸、次黄嘌呤、磷酸乙醇胺、3-亚砜-L-丙氨酸、N-甲基-L-谷氨酸、胱氨酸、高香草酸和腺嘌呤显著增加(P<0.01);与D组(1000 m)相比,E组(1500 m)运动后即刻的吲哚-3-羧酸显著减少(P<0.01),次黄嘌呤和抗坏血酸显著增加(P<0.01);与E组(1500 m)相比,B组(2000 m)运动后即刻的茶碱显著减少(P<0.01),4-羟脯氨酸、甘氨酸、次黄嘌呤、抗坏血酸、氨基己二酸和甲硫氨酸显著增加(P<0.01).结论:有氧代谢、无氧代谢和氧化应激相关的差异代谢物显著影响赛艇测功仪2000 m全力划过程中不同分段的供能和运动表现,其中,泛酸、N-甲基-L-谷氨酸、腺嘌呤和次黄嘌呤等无氧代谢产物在0~500 m分段或1500~2000 m分段发生显著变化,可作为鉴别赛艇运动员无氧供能的潜在生物标志物.
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编辑人员丨2023/10/21
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香花羊耳蒜全草化学成分的分离鉴定
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究香花羊耳蒜全草的化学成分.方法:采用各种色谱技术分离纯化化学成分.根据理化性质及波谱数据鉴定其结构.结果:从香花羊耳蒜的95%乙醇提取物中分离鉴定了12个化合物,分别为:对羟基苯甲酸(1)、对羟基苯甲醛(2)、4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(3)、4-甲氧基-2,5-菲二醇(4)、5,7,3’,5’-四羟基-4'-甲氧基黄酮(5)、5,7,8,3’-四羟基4’-甲氧基黄酮(6)、熊果酸-3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、D-α-2-丙氨酸(8)、胸腺嘧啶脱氧核苷(9)、腺嘌呤核苷(10)、β-谷甾醇(11)、胡萝卜苷(12).结论:其中,化合物1 ~ 10是首次从羊耳蒜属植物中分离得到.
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编辑人员丨2023/8/6
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渗透压冲击下中度嗜盐菌Halomonas sp. Y四氢嘧啶类相容性溶质的合成与释放
编辑人员丨2023/8/6
[背景]四氢嘧啶类物质在高温、冷冻和干燥等逆境条件下,对酶、蛋白质、核酸及整个细胞具有良好的保护作用,已经应用于酶制剂、生物医药及护肤品等相关领域.目前此类物质只能依赖中度嗜盐菌采用细菌泌乳工艺进行商业化生产,因此四氢嘧啶类高产菌株及其发酵技术的研究日益受到国内外研究者关注.[目的]分离获得高产合成四氢嘧啶类相容性溶质的中度嗜盐细菌,研究渗透压冲击对其胞内四氢嘧啶合成与释放的影响,探索细菌泌乳法制备四氢嘧啶的可行性.[方法]采用涂布平板法分离中度嗜盐菌,对分离菌株进行形态、生理生化和16S rRNA基因序列分析,鉴定其种属;采用高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)分析四氢嘧啶类物质,细菌泌乳法制备四氢嘧啶类物质.[结果]从盐池土样中分离到一株以四氢嘧啶类物质为主要相容性溶质的中度嗜盐菌Y,鉴定为盐单胞菌(Halomonas sp.) Y.盐单胞菌Y能在NaCl质量浓度为10-250 g/L的培养基中生长,最适生长的NaCl浓度为100 g/L; HPLC-MS测试结果证明盐单胞菌Y可同时合成四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶2种相容性溶质,在最适生长的盐浓度下其合成量分别达175.5 mg/g和47.9mg/g;在NaCl质量浓度为0-30 g/L的低渗溶液中胞内四氢嘧啶类物质经5 min即可达到最大释放率,而细菌泌乳工艺中最适合诱导四氢嘧啶释放的低渗溶液为质量浓度为10 g/L的NaCl溶液;采用细菌泌乳工艺制备四氢嘧啶,经连续11轮的高渗/低渗冲击,四氢嘧啶总合成量为6.0 g/L,总释放量为5.7g/L,平均释放率为64.5%,底物转化率为128.9 mg/g.[结论]盐单胞菌Y是一株较高产合成四氢嘧啶类的中度嗜盐菌,能够耐受反复的渗透压冲击,采用细菌泌乳工艺显著提高了四氢嘧啶的制备效率.
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编辑人员丨2023/8/6
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4-羟基-2-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-5-甲酸的合成工艺改进研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 对4-羟基-2-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-5-甲酸的合成工艺条件进行优化.方法 以1-脒基吡唑盐酸盐和乙氧基甲叉基丙二酸二乙酯为起始原料,在三乙胺催化下环合得到中间体4-羟基-2-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-5-甲酸乙酯,再经过氢氧化锂在四氢呋喃–水混合溶剂中水解得到目标化合物.结果 合成了目标化合物,经MS、1H-NMR确证了结构,质量分数为99.5%,本合成工艺的总收率为87%.结论 该合成工艺具有操作简单、反应条件温和、成本低、产率和纯度较高等优点,适合工业化生产.
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编辑人员丨2023/8/6
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骆驼刺正丁醇萃取部位中单体化合物的分离纯化及其对人宫颈癌HeLa细胞的影响研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:分离纯化骆驼刺正丁醇萃取部位中的单体化合物,并探讨其对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移的影响.方法:采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶色谱柱、制备型高效液相色谱等方法对骆驼刺正丁醇萃取部位进行分离纯化,根据理化性质和波谱(质谱、氢谱、碳谱等)数据分析、鉴定化合物结构.以人宫颈癌HeLa细胞为对象,以5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照,采用四甲基偶氮唑盐法检测经各化合物不同剂量(均为6.25、12.5、25、50、100、200μg/mL)预处理后的细胞抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50),以筛选活性单体;采用划痕实验考察上述活性单体(均为50μg/mL)对HeLa细胞迁移能力的影响;采用金氏公式评价5-FU与上述活性单体分别联用[(3.125+6.25)、(6.25+12.5)、(12.5+25)、(25+50)μg/mL]的效果.结果:从骆驼刺正丁醇萃取物部位中共分离得到6个化合物,分别鉴定为紫铆素(Ⅰ)、3′,4′,7-三羟基异黄酮(Ⅱ)、对甲氧基苯乙酸(Ⅲ)、4-羟基苯乙酮(Ⅳ)、橙黄胡椒酰胺(Ⅴ)、原儿茶醛(Ⅵ).与空白对照组比较,5-FU和各化合物(5-FU:6.25~200μg/mL各剂量,化合物Ⅰ:12.5~200μg/mL各剂量,化合物Ⅱ:25、50、200μg/mL,化合物Ⅲ:6.25、100、200μg/mL,化合物Ⅳ:50、100、200μg/mL,化合物Ⅴ:12.5、25、200μg/mL,化合物Ⅵ:6.25~200μg/mL各剂量)均可显著升高细胞抑制率,且化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ的IC50值均显著降低(P<0.05或P<0.01),其中化合物Ⅰ、Ⅵ的IC50值相对较低.5-FU与化合物Ⅰ、Ⅵ组细胞的迁移距离均较空白对照组显著缩小(P<0.05或P<0.01);5-FU分别与化合物Ⅰ、Ⅵ联用后,对HeLa细胞的增殖具有相加或增强的协同抑制作用(增效指数均大于0.9).结论:化合物Ⅰ~Ⅵ均为首次从骆驼刺属植物中分离得到,紫铆素和原儿茶醛是其正丁醇萃取部位的活性单体.这2种活性单体均可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移,具有较强的体外细胞抑制作用,且与5-FU联用后的抑制作用强于两者分别单用.
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编辑人员丨2023/8/6
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7-(4-烃氧基苯基)-4-(4-芳基哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶类化合物的合成与抗肿瘤活性研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 设计合成一系列7-(4-烃氧基苯基)-4-(4-芳基哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶类化合物并进行抗肿瘤活性研究.方法 以4-(4-羟基苯基)环己酮、氰乙酰胺、单质硫作为起始原料,通过Gewald反应、改进后的Niementowski喹唑啉缩合反应、三氯氧磷氯代反应、亲核取代反应、脱乙基反应及Williamson反应得到相应的目标化合物,采用MTT法测定目标化合物体外抑制人类肺癌细胞株A549增殖的活性,并初步探究其构效关系.结果 与结论目标化合物8a、8c、8f和8k在10 μmol· L-1浓度下对肿瘤细胞的抑制率达到30%以上,有进一步研究的价值.
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编辑人员丨2023/8/5
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瑞舒伐他汀钙有关物质的合成
编辑人员丨2023/8/5
目的 为保证瑞舒伐他汀钙质量,建立了一个标准质量控制体系,合成了3个有关物质.方法 以6-[(1E)-2-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰)氨基]-5-嘧啶]乙烯基]-2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯(1a)为起始原料,经脱缩酮得1b、水解叔丁酯得1c、分子内脱水合成(2S,4R)-N-[4-(4-氟苯基)-5-[2-(4-羟基-6-氧代四氢吡喃-2-基)乙烯基]-6-异丙基嘧啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺(杂质1),1b经DDQ氧化5位羟基再用四甲基三乙酰氧基硼氢化铵还原、接着水解叔丁酯、最后制备钙盐得(3R,5R,6E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲基磺酰基)氨基]嘧啶-5-基]-3,5-二羟基-6-庚烯酸(杂质2),1c经DDQ氧化5位羟基得(3R,6E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲基磺酰基)氨基]-5-嘧啶基]-3-羟基-5-氧代-6-庚烯酸(杂质3).结果 3个杂质的结构经过核磁共振氢谱和质谱确证.结论 本实验所得3个目标化合物可以作为瑞舒伐他汀钙质量研究的有关物质对照品.
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编辑人员丨2023/8/5
