目的:筛选肝癌细胞Hep-3B和Hep-G2敏感的细胞周期蛋白质依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制剂,并检测CDK抑制剂对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:采用CCK-8法检测10种CDK抑制剂对2株肝癌细胞Hep-3B和Hep-G2的增殖抑制率,选取抑制率较高的一种作为目标抑制剂,计算其对2株细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50).采用FCM法检测目标抑制剂处理后,肝癌Hep-3B和Hep-G2细胞周期分布及凋亡率的变化;进一步采用蛋白质印迹法检测细胞增殖及凋亡相关蛋白的表达水平变化.结果:6号抑制剂BMS-265246(5 μmol/L作用48 h)对肝癌细胞Hep-3B和Hep-G2增殖的抑制率可达到80％,该药物对2株细胞的IC5o值分别为2.84和1.73 μmol/L.5 μmol/L BMS-265246处理肝癌Hep-3B和Hep-G2细胞24 h后,G1期细胞所占百分率明显升高(P值均＜0.05),细胞中磷酸化Rb蛋白的水平明显降低(P值均＜0.01),转录因子E2F的靶蛋白c-Myc表达明显下调(P值均＜ 0.01).另外,5μmol/L BMS-265246对2株肝癌细胞均有明显的凋亡诱导作用,与未处理对照组相比,24 h和48 h凋亡率均明显升高(P值均＜ 0.05);药物处理组细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达明显下调(P值均＜ 0.05),而促凋亡蛋白Bax和Bak的表达明显上调(P值均＜ 0.05),同时可检测出caspase-3及其底物聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的活化片段.结论:CDK抑制剂BMS-265246在体外可诱导肝癌Hep-3B及Hep-G2细胞凋亡,并抑制细胞增殖;其作用机制可能与Bcl-2家族抗/促凋亡失衡、caspase通路激活,以及Rb去磷酸化和E2F活性受抑制有关.

目的 观察葡萄籽原花青素(GSPE)对心肌梗死大鼠心肌功能的改善作用并探讨其作用机制.方法 构建心肌梗死模型大鼠,随机分为5组:模型组、GSPE低、中、高组、多聚(腺苷酸-核糖)聚合酶1(PARP-1)抑制剂BSI-201组,每组15只,另设假手术对照组15只.GSPE低、中、高剂量组大鼠分别给予100、200、400 mg/ml GSPE灌胃给药;BSI-201组给予120 μmol/L BSI-201灌胃给药,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃处理,每天1次,持续4周.多普勒彩色超声心动图评估大鼠心脏功能;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死体积;HE染色检测心肌组织病理学变化;原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法分析心肌组织中Bax、cleaved-caspase3、Bcl-2、PAR蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠心率、左心室舒张末压、心肌梗死面积、细胞凋亡率显著升高,平均动脉压、左心室收缩压显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);心肌细胞破碎、坏死,心肌纤维排列不规则,可见大量炎性细胞浸润;心肌组织Bax、cleaved-caspase3、PAR蛋白表达显著升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.05).与模型组比较,GSPE低、中、高剂量组及BSI-201组大鼠心率、左心室舒张末压、心肌梗死面积、细胞凋亡率明显降低,平均动脉压、左心室收缩压显著升高(P＜0.05);组织病理损伤程度减轻;心肌组织Bax、cleaved-caspase3、PAR蛋白表达显著降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论 葡萄籽原花青素可能通过抑制PARP-1活化来抑制心肌细胞凋亡,改善心肌梗死大鼠心肌功能.

神经退行性疾病的发病率越来越高,但其治疗手段有限.多腺苷二磷酸核糖基化修饰(PARylation)是由多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)催化的蛋白质翻译后修饰.PARylation通过影响蛋白质在细胞内的移位、聚集、蛋白质活性和细胞死亡,参与脑卒中、帕金森病、阿尔茨海默病、运动神经元病等神经退行性变性疾病的发生和发展.PARP抑制剂通过抑制蛋白PARylation,在药物临床前试验和临床试验Ⅰ期都展现了明显的神经保护作用.然而,寻找作用更特异的、符合神经退行性变性疾病治疗药动学特点的新型PARP抑制剂,将是抗神经退行性药物研发的新方向.本文就PARylation与神经退行性变性疾病的研究进展作一综述.