目的:构建具有损伤再生能力的新型小肠类器官，体外模拟肠道损伤、再生和修复过程。方法:分离6～8周龄、18～24 g无特定病原体动物级C57BL/6小鼠回肠黏膜隐窝结构，设计ENR、ENR＋肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和8C培养体系，分别构建肠道稳态、炎症损伤和损伤再生条件下的小肠类器官并观察形态。通过免疫荧光染色检测类器官包含的细胞类型和空间排布，以及损伤再生基因凝集素蛋白( Clu)、膜联蛋白A1( Anxa1)、干细胞抗原1( Sca1)和小鼠再生胰岛衍生蛋白3β( Reg3 b)的蛋白质表达情况。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测 Clu、 Anxa1、 Sca1、 Reg3 b的mRNA表达情况。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:8C和ENR培养体系下的小肠类器官均包含肠道干细胞、杯状细胞、潘氏细胞和肠道内分泌细胞，细胞空间排布与肠上皮基本一致。8C培养体系下的新型小肠类器官的扩增能力较ENR、ENR＋TNF-α培养体系下的小肠类器官明显增强，生长速度更快，结构更大、更复杂。qRT-PCR结果显示，8C培养体系下的新型小肠类器官再生基因 Clu、 Anxa1和 Sca1的mRNA相对表达水平均高于ENR和ENR＋TNF-α培养体系(0.68±0.31比0.20±0.07、0.36±0.19，0.48±0.13比0.07±0.02、0.18±0.11，0.56±0.20比0.02±0.01、0.08±0.04)，差异均有统计学意义( t＝4.82、2.77，8.62、4.89，8.58、7.50；均 P<0.05)。免疫荧光检测显示，8C培养体系下的新型小肠类器官再生基因 Clu、 Anxa1、 Sca1和 Reg3 b的蛋白质表达水平均高于ENR、ENR＋TNF-α培养体系(31.62±1.69比9.73±2.39、15.11±2.16，42.65±1.85比19.70±1.18、24.97±2.82，63.80±2.73比37.10±1.59、43.27±2.53，53.26±1.84比27.75±3.78、33.16±3.50)，差异均有统计学意义( t＝12.95、10.41，18.13、9.09，14.63、9.56，10.51、8.80；均 P<0.001)。 结论:新型培养体系下建立的小肠类器官具备损伤再生特征，为研究上皮组织器官再生提供了新的体外模型。

炎症性肠病的患病人数在我国高速增长,传统药物治疗难以改变病程,且 2/3 的患者存在生物制剂失应答,亟需开发新疗法实现黏膜愈合.隐窝肠干细胞可分化成肠上皮细胞,并与肠上皮细胞协同修复肠道黏膜,维持肠道内稳态.炎症性肠病患者免疫功能紊乱,破坏肠道干细胞池自我更新,阻止黏膜修复再生导致黏膜屏障受损.近年来随着类器官共培养技术与单细胞测序技术的应用,免疫细胞与干细胞之间相关调控关系越加明确.干细胞移植有望重建黏膜屏障实现黏膜愈合,目前已开展多项干细胞临床研究并取得一定临床突破.本文综述免疫细胞与肠干细胞相关调控关系及干细胞临床研究前沿进展.

背景:放射性肠损伤造成小肠干细胞数量急剧减少和功能减退,导致损伤后的肠上皮修复非常困难,促进小肠干细胞数量和功能的恢复是当前治疗放射性肠损伤、修复受损肠上皮的研究热点.目的:综述放射性肠损伤后小肠干细胞补充来源及调控机制的最新研究进展.方法:分别以“小肠干细胞,放射性肠损伤;intestinal stem cell,radiation-induced intestinal injury”为检索词,由第一作者检索2010年1月至2016年6月中国期刊全文数据库、PubMed数据库及万方数据库相关文章,进行归纳总结.结果与结论:小肠干细胞的命运受多种信号通路的调控,研究比较明确的有Wnt/β-catenin、BMP、Notch和EGF信号通路.早期分泌型祖细胞在正常稳态下增殖缓慢,对放射性损伤不敏感,并且在一定条件下可重新逆转分化成为小肠干细胞,是“储备干细胞”的良好来源,而巢在早期分泌型祖细胞逆转分化为小肠干细胞的过程中发挥着重要作用.探究上述逆转分化过程的具体调控机制对于深入理解放射性肠损伤后肠上皮的修复过程,从而确立主动调控肠损伤修复的理念具有重要科学意义.

炎症性肠病(IBD)是一组慢性非特异性炎症性肠道疾病,需要终身治疗,长期随访.近年来,儿童IBD的发病率逐年上升,严重影响儿童的生活质量、生长发育及心理健康.而IBD的诊断需要综合分析患者的病史、血液学检查、影像学检查,内镜及组织病理学检查等.目前尚无可靠的无创检查及血清学标志用于随访患者临床疾病活动程度.肠三叶因子(TFF3)在肠道炎症的修复、促进黏膜再生中起着重要作用,在IBD的发病机制中占据着重要位置.本文就TFF3在IBD中的研究进展做一综述.

炎症性肠病(IBD)是一类多种病因引起、异常免疫介导的肠道慢性复发性炎症,主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病.白细胞介素22(IL-22)是一种具有独特生物学特性的细胞因子.在肠道中IL-22具有通过激活STAT3通路来促进黏膜屏障完整性的抗菌肽和黏蛋白表达的能力,并可促进肠上皮细胞再生和增强肠上皮细胞屏障功能.IL-22在IBD患者肠道黏膜中表达水平明显增强,IL-22可促进肠道炎症损伤的修复,但是随着细胞因子等环境变化,如IL-23、T-bet、IL-22结合蛋白的表达水平变化,IL-22表现出了其特征性的双面性,一方面可以促进炎症损伤的修复,另一方面会加重炎症损伤反应.文中阐述IL-22的起源、作用方式以及在临床治疗领域应用的前景.

目的:检测不同类型萎缩性胃炎伴肠上皮化生中再生基因4(Reg4)和Musashi-1(Msi-1)的表达情况,探讨其在肠化隆起灶(EIM)和肠化凹陷灶(DIM)中的意义.方法:收集2016年8月至2017年10月在我院内镜中心胃镜检查出的胃窦活检标本218例,采用免疫组化和PCR法分别进行Reg4和Msi-1因子的蛋白和mRNA水平检测.结果:Reg4在非萎缩性胃炎组(NAG)、萎缩性胃炎组(AG)、萎缩性胃炎伴肠化凹陷组(DIM)、萎缩性胃炎伴肠化隆起组(EIM)和胃癌组(GC)组织中的蛋白阳性表达率分别为11.1％、25.6％、41.7％、89.6％和34.2％;Msi-1的阳性率分别为13.3％、20.5％、22.9％、70.8％ 和71.1％,呈渐进性增高,其中EIM组中Reg4和Msi-1的阳性表达率与其他组相比差异具有明显统计学意义(P<0.05),而与胃癌组比较差异无统计学意义(P>0.05).PCR检测结果显示,Reg4和Msi-1在EIM中mRNA表达水平高于DIM.结论:Reg4、Msi-1的异常表达与EIM发生发展密切相关,Reg4、Msi-1有望成为肠腺化生恶变的监测指标.

哺乳动物肠上皮是一种拥有快速自我更新能力的组织,在维持机体免疫稳态与肠道应激后的损伤修复中发挥重要作用.源于隐窝底部的多能肠干细胞不断进行增殖、迁移与分化,并沿隐窝-绒毛轴向上移动,从而维持肠上皮完整性.该过程受严格而复杂的基因调控网络参与.越来越多的数据表明,肠上皮完整性受到广泛的非编码RNA的调控,主要包括肠黏膜再生、保护与上皮屏障功能等方面.本文重点讨论了两类非编码RNA(包括microRNAs和lncRNAs)转录后调控肠上皮屏障功能的研究进展.其中,miR-503、miR-146和lnc-uc.173、lnc-SPRY4-IT1、lnc-plncRNA1、lnc-Gata6等,能够促进肠黏膜的更新,增强上皮屏障功能;相反,miR-222、miR-29b、miR-195和lnc-H19与lnc-BC012900等,抑制肠上皮再生并破坏肠上皮屏障功能.miRNAs、mRNAs与lncRNAs间构成复杂的分子网络,共同调控肠上皮稳态.深入研究与肠上皮相关的miRNAs和IncRNAs分子及其作用机制,探寻引起肠黏膜炎症的关键分子靶标,为肠道炎症临床诊治提供新方向与新方法.

目的 了解内质网应激在细胞增殖中的研究进展,为组织的损伤修复、器官的增殖再生等研究找到可靠的循证资料依据.方法 复习近年来关于内质网应激相关的多条信号通路在细胞增殖和损伤修复中研究进展的相关文献并加以综述.结果 内质网应激通过未折叠蛋白反应的3条途径在与白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-cα、血管内皮生长因子、Wnt等多种信号分子发生作用后,通过不同的途径参与了肠上皮细胞、骨骼肌细胞、肝细胞、胰岛细胞等多种不同组织细胞的增殖再生过程.结论 尽管内质网应激在决定细胞命运这一领域的研究中众说纷纭,但通过近年来有关内质网应激对维持细胞存活和促进细胞增殖这一方面的研究进行回顾后分析发现了内质网应激在促进细胞增殖这一过程中的复杂性、多样性和重要性,它既能通过与Wnt蛋白这种经典的信号通路促进细胞增殖,也能独立于Notch通路之外通过与RNA结合蛋白Musashi蛋白作用发挥其修复组织、促进增殖的作用,这种复杂的反应通路在不同的细胞中与不同的促因子相互作用,为细胞增殖、损伤修复和器官再生的研究提供了研究的方向和探索的可能,让我们看到了内质网应激在细胞增殖中的巨大作用.

结肠类器官是一种衍生于结肠干细胞或多能干细胞的三维细胞培养模型,其实质是在添加多种生长因子的基质胶中对结肠干细胞或多能干细胞及其衍生的肠上皮细胞、肠内分泌细胞、杯状细胞等进行三维培养.体外构建的结肠类器官在细胞成分、组织架构及特定功能等方面与结肠上皮组织高度相似,实现了在体外培养环境中对结肠上皮组织的复制.与传统的结肠疾病研究模型(常规细胞培养模型和动物实验模型)相比,结肠类器官具有明显的优势,如培养成功率高、培养周期短、与来源组织高度一致等.自2011年Sato等首次报道结肠类器官模型的构建方法以来,结肠类器官迅速成为结肠相关疾病研究领域的热点.目前,结肠类器官已经被广泛应用于结肠上皮的生理功能的调整以及感染性腹泻、溃疡性结肠炎、肠道损伤再生、结肠肿瘤等多个领域的研究.本综述讨论了结肠类器官的构建及其应用研究的最新进展.

肠道是最复杂的器官之一,负责营养的吸收和消化.肠道具有多层结构保护整个肠道免受病原体的侵害.肠道上皮是由单层柱状上皮细胞组成,是抵抗病原体的第一道屏障.因此,肠上皮必须保持完整性以保护肠免受感染和毒性剂的侵害.上皮细胞分为两个谱系(吸收型与分泌型),并且每隔3～4天脱落至肠腔中.细胞的快速更替是由于肠道干细胞的存在,肠道干细胞排列在隐窝底部终极分化的潘氏细胞之间并沿隐窝绒毛轴分化成不同的上皮细胞.一旦肠道干细胞受到损伤,潘氏细胞将通过提供WNT配体和Notch刺激来补充肠道干细胞.因此,潘氏细胞充当辅助细胞以维持干细胞微环境,即生态位.该综述探讨了干细胞和潘氏细胞之间的相互作用,进一步探讨了维持肠道稳态的信号通路.