目的:构建并鉴定气道上皮细胞条件性Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）基因敲除小鼠，观察慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）患者气道上皮SHP-1表达情况及SHP-1表达缺陷对肺气肿小鼠表型的影响。方法:检测慢阻肺患者肺组织中气道上皮SHP-1的表达情况。采用CRISPR/Cas9技术构建SHP-1 flox/flox转基因小鼠，并将其与气道上皮细胞Clara蛋白10-环化重组酶与雌激素受体融合转基因小鼠（CC10-CreER +/+）进行交配，腹腔注射他莫昔芬后，获得气道上皮SHP-1基因敲除小鼠（SHP-1 flox/floxCC10-CreER +/-，SHP-1 Δ/Δ）。提取小鼠鼠尾和肺组织DNA，经PCR扩增后判别小鼠的基因型；通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法验证气道上皮细胞SHP-1基因的敲除效果。使用弹性蛋白酶构建肺气肿小鼠模型，评估各组小鼠肺气肿严重程度。 结果:慢阻肺患者气道上皮SHP-1表达显著下调。基因型鉴定证实SHP-1 Δ/Δ小鼠表达CC10-CreER及SHP-1-flox。他莫昔芬诱导后，我们从DNA、RNA及蛋白水平证明SHP-1 Δ/Δ小鼠气道上皮细胞中SHP-1蛋白表达缺失，表明气道上皮细胞特异性SHP-1基因敲除小鼠构建成功。肺气肿动物模型中，SHP-1 Δ/Δ小鼠与对照组相比，肺气肿表型更为严重，表现为肺组织肺泡结构紊乱，肺泡壁破裂融合形成肺大疱。 结论:本研究成功建立并鉴定气道上皮细胞SHP-1基因敲除小鼠模型，为深入阐明SHP-1在慢阻肺进程中的作用及其机制提供了新的实验工具。

糖尿病酮症酸中毒（diabetic ketoacidosis，DKA）是糖尿病严重的急性并发症之一，以高血糖、酮症、酸中毒为主要表现，是胰岛素不足和拮抗胰岛素激素增加所致的代谢紊乱综合征。2型糖尿病并发酮症酸中毒相对少见，而在糖尿病酮症酸中毒中继发纵隔气肿则非常罕见。肺泡破裂后到达肺门的气体可沿不同的路径形成前纵隔、中纵隔、后纵隔的气肿，甚至形成颅内硬膜外积气。纵隔气肿的诊断主要依靠胸部电子计算机断层扫描。在纠正DKA后，纵隔气肿一般在5~10 d自行吸收，预后良好。四川省甘孜藏族自治州德格县人民医院收治的1例DKA患者出现Kussmaul呼吸后，肺泡内压力增大、肺泡内外压力差增大、肺泡壁蛋白质被分解，这些因素促使肺泡破裂形成纵隔气肿；经过快速补液、胰岛素控制血糖、维持酸碱平衡等治疗后，纵隔气肿自行吸收，根据排他性诊断，可明确DKA继发纵隔气肿。通过对该病例临床资料的分析，旨在提高临床医师对纵隔气肿与DKA之间的内在的认识，避免过度检查、过度治疗，为正确的诊治提供策略。

目的:探讨制备可相互转换的相同伤情平原和高原冲击伤动物模型致伤参数。方法:157只C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为平原对照组（8只）、平原致伤组（77只）、高原对照组（8只）和高原致伤组（64只），其中高原对照组和高原致伤组预先置于动物实验低压氧舱中模拟4 000 m高原环境习服5 d。将平原致伤组和高原致伤组小鼠置于Ⅰ型生物激波管内，选择不同驱动段压强致伤，以72 h内死亡率达70%左右为标准，确定平原致伤组和高原致伤组的驱动段压强，利用该参数进行平原和模拟4 000 m高原制备小鼠严重冲击伤模型，通过大体解剖、肺湿/干质量比值（W/D）、苏木素-伊红（HE）染色和肺组织损伤评分比较各组小鼠致伤24 h后肺病理变化，验证各组伤情的一致性。结果:平原致伤组和高原致伤组驱动段压强分别为5.4 MPa和4.0 MPa时，可使各组小鼠死亡率基本一致（分别为65%和75%）。与各自对照组比较，平原5.4 MPa致伤组和高原4.0 MPa致伤组小鼠冲击伤24 h后肺脏均出现大面积出血（呈斑点状和弥散性），出血区域及附近有明显肺水肿；肺W/D比值增高，其中高原致伤组明显高于高原对照组（5.579±0.646比4.476±0.076， P<0.05），平原致伤组与平原对照组比较差异无统计学意义（5.303±1.020比4.015±0.144， P>0.05）。肺组织病理切片显示，与各自正常组比较，平原5.4 MPa致伤组和高原4.0 MPa致伤组均可见大片肺泡破裂融合，肺泡壁增厚，肺泡腔内有少量炎症细胞浸润；平原5.4 MPa致伤组和高原4.0 MPa致伤组小鼠肺组织损伤评分明显高于相应对照组（分：8.67±0.82比1.67±0.52，9.00±1.10比2.17±0.41,均 P<0.05），但各致伤组间肺组织损伤评分比较差异无统计学意义。 结论:驱动压强5.4 MPa和4.0 MPa分别是制备相同伤情的平原和高原严重冲击伤参数，可相互转换，其结果为特殊环境严重冲击伤防治技术的应用和评估提供支撑。

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的主要病理生理改变为肺血管内皮屏障被大量破坏、肺水肿、炎性细胞浸润等，严重者可发生难治性低氧血症。细胞焦亡是由天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）触发、经一类保守的蛋白家族成员Gasdermin D（GSDMD）蛋白介导的细胞程序性坏死，表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物释放进而激活强烈的炎症反应。焦亡在脓毒症导致的ARDS中发挥关键作用。本文主要对细胞焦亡的分子机制以及焦亡与ARDS关系的相关研究进行综述。

旨在探讨核因子E2 相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族成员SLC7A11(xCT)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路介导的铁死亡在放射性肺纤维化中的作用机制及当归黄芪超滤物的干预作用.将 50 只Wistar大鼠随机分为 5 组,每组 10只.除空白组不予辐射外,其余各组大鼠均经麻醉后接受 40 Gy X射线单次局部胸部照射 1 次,建立放射性肺纤维化大鼠模型.辐射后,当归黄芪超滤物各干预组以 0.12、0.24、0.48 g·kg-1剂量分别灌胃,每日 1 次,连续给药 30 d.连续给药 30 d后,比色法检测各组肺组织氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)活性,还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及Fe2+水平;免疫荧光检测肺组织中活性氧(ROS)荧光表达;苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肺组织病理变化;免疫组化及Western blot检测肺组织Nrf2/xCT/GPX4 信号通路及纤维化蛋白表达水平.结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Fe2+、MDA水平显著上升,SOD活性、GSH水平显著下降,ROS水平显著上升;肺组织结构遭受严重破坏,肺间质明显增生,肺泡塌陷且实变严重,有较多的炎性细胞聚集和胶原纤维沉积;肺组织损伤程度相对较高,受损线粒体增多、变小、排列紊乱,形态不规则,基质变浅,线粒体嵴大多断裂、变短,轻微扩张,个别线粒体基质电子密度增高,部分线粒体外膜破裂,出现铁死亡特异性线粒体特征性改变;肺组织中转铁蛋白受体 1(TFR1)表达显著升高,GPX4、铁蛋白重链 1(FTH1)、Nrf2 及xCT表达显著降低;α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)蛋白表达显著升高.与模型组比较,当归黄芪超滤物干预可明显改善大鼠脂质过氧化、抗氧化相关指标,Fe2+水平显著降低;纤维化程度减轻;肺组织中TFR1、α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表达显著下降,GPX4、FTH1、Nrf2、xCT蛋白表达显著上升.综上所述,当归黄芪超滤物对放射性肺纤维化具有改善作用,其机制可能是通过调控 Nrf2/xCT/GPX4 信号通路抑制铁死亡发挥作用.

目的 观察二肽基肽酶4(DPP-4)基因沉默对脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞焦亡的促进作用,并探讨其可能的机制.方法 取对数生长期的MH-S肺泡巨噬细胞系(简称MH-S细胞),随机分为Control siRNA组(转染Control siRNA)、DPP-4 siRNA组(转染DPP-4 siRNA)、Control siRNA+LPS组(转染Control siRNA后加入LPS)、DPP-4 siRNA+LPS组(转染DPP-4 siRNA后加入LPS).倒置显微镜下观察各组细胞形态是否呈焦亡表现(细胞空泡化、发生聚团及细胞膜破裂),CCK-8法观察细胞增殖活性,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验观察焦亡所致细胞毒性(以LDH释放量表示),Calcein-AM/PI双染法观察细胞死亡情况(以PI阳性细胞率表示),Western blotting法检测细胞焦亡通路标志蛋白核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1 p20亚基(Caspase-1 p20)、焦孔素D-N端(GSDMD-N)及炎症因子白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白相对表达量.取对数生长期的MH-S细胞,随机分为Control siRNA+LPS作用组(转染Control siRNA后加入LPS)、DPP-4 siRNA+LPS作用组(转染DPP-4 siRNA后加入LPS)、Control siRNA+SB203580+LPS作用组(转染Control siRNA后加入p38抑制剂SB203580、LPS)、DPP-4 siRNA+SB203580+LPS作用组(转染DPP-4 siRNA后加入p38抑制剂SB203580、LPS),采用Western blotting法检测细胞p38活化相关指标及焦亡通路标志蛋白表达.结果 Control siRNA组细胞无焦亡表现,DPP-4 siRNA组可见少量细胞呈焦亡表现,Control siRNA+LPS组和DPP-4 siRNA+LPS组可见大量细胞呈焦亡表现,以DPP-4 siRNA+LPS组细胞焦亡表现更明显.Control siRNA组、DPP-4 siRNA组、Control siRNA+LPS组、DPP-4 siRNA+LPS组细胞增殖活性依次降低,LDH释放量、PI阳性细胞率及细胞NLRP3、ASC、Caspase-1 p20、GSDMD-N、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均依次升高,组间两两比较P均<0.05.与DPP-4 siRNA+LPS作用组比较,Control siRNA+LPS作用组、Control siRNA+SB203580+LPS作用组、DPP-4 siRNA+SB203580+LPS作用组p-p38/p38、p-NF-κB/NF-κB及NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD-N蛋白相对表达量均降低,以Control siRNA+SB203580+LPS作用组、DPP-4 siRNA+SB203580+LPS作用组降低更明显(P均<0.05).结论 DPP-4基因沉默可促进LPS诱导的肺泡巨噬细胞焦亡,其机制可能与促进p38、NF-κB磷酸化后启动NLRP3炎症小体形成及炎症因子释放,从而调控Caspase-1介导的经典细胞焦亡通路有关.

目的 基于谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路探讨银杏叶提取物(GBE)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织铁死亡的影响.方法 本实验时间为2022年6月—2023年6月.选取2月龄SPF级雄性Wistar大鼠40只,采用抽签法将大鼠分为空白组、模型组、罗红霉素组、GBE组,每组10只.模型组、罗红霉素组、GBE组大鼠采用脂多糖联合香烟烟雾构建COPD大鼠模型,造模成功后,空白组和模型组大鼠给予0.9%氯化钠溶液灌胃,罗红霉素组大鼠给予罗红霉素分散片0.017 5 g·kg-1·d-1灌胃,GBE组大鼠给予GBE 14 mg·kg-1·d-1腹腔注射.麻醉并处死各组大鼠,取腹主动脉血液和肺组织.观察各组大鼠肺组织HE染色结果,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平,采用qRT-PCR法检测各组大鼠肺组织GPX4、铁蛋白重链1(FTH1)、转铁蛋白(TF)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组大鼠肺组织GPX4、FTH1、TF表达量.结果 HE染色结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肺组织中可见较多充血以及水肿,炎性细胞浸润,支气管变形,肺泡破裂,较多肺大疱生成;与模型组相比,罗红霉素组与GBE组大鼠肺组织中炎性细胞减少,肺泡结构完整,肺组织结构相对完整.模型组大鼠血清TNF-α、IL-6水平高于空白组(P＜0.05);罗红霉素组、GBE组大鼠血清TNF-α、IL-6水平低于模型组(P＜0.05);罗红霉素组与GBE组大鼠血清TNF-α、IL-6水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠肺组织GPX4、FTH1 mRNA相对表达量低于空白组,TF mRNA相对表达量高于空白组(P＜0.05);罗红霉素组、GBE组大鼠肺组织GPX4、FTH1 mRNA相对表达量高于模型组,TF mRNA相对表达量低于模型组(P＜0.05);罗红霉素组与GBE组大鼠肺组织GPX4、FTH1、TF mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠肺组织GPX4、FTH1表达量低于空白组,TF表达量高于空白组(P＜0.05);罗红霉素组、GBE组大鼠肺组织GPX4、FTH1表达量高于模型组,TF表达量低于模型组(P＜0.05);罗红霉素组与GBE组大鼠肺组织GPX4、FTH1、TF表达量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 COPD的发生与肺组织铁死亡有关.GBE可通过GPX4信号通路降低炎症因子水平,提高FTH1基因及蛋白表达水平,降低TF基因及蛋白表达水平,从而抑制COPD大鼠肺组织铁死亡.

脓毒症是重大的全球健康挑战问题，是重症监护病房患者死亡的主要原因[1]。肺是脓毒症病理过程中最易受累的器官之一，脓毒症相关急性肺损伤(acute lung injury, ALI)约占肺损伤总数的40%，严重影响患者预后[2,3]。脓毒症相关ALI主要由炎症和氧化应激介导，病理学表现为急性炎症、内皮屏障完整性破坏和肺泡上皮损伤。近年来，以铁死亡为焦点的研究更全面、深入的理解脓毒症ALI的发病机制、探索潜在的治疗靶点。铁死亡是新近发现的一种程序性细胞死亡形式，2012年首次提出，2018年正式将铁死亡定义为程序性细胞死亡(programmed cell death, PCD)模式中的一种[4,5]。铁死亡有别于凋亡、坏死性凋亡、自噬及焦亡等传统的PCD模式，其本质是细胞自身还原能力不足，导致铁依赖的脂质过氧化水平增高，高尔基体、内质网和溶酶体等胞内脂膜成分过氧化，最终导致细胞死亡[4,6,7]；形态学上表现为细胞核完整，线粒体嵴减少，线粒体膜的双侧膜密度改变，线粒体外膜破裂[4]。多项研究证实脓毒症可导致肺组织铁死亡明显增加，与ALI的发生密切相关。

基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体信号通路探讨白芍总苷胶囊(total glucosides of White Paeony Capsules,TGP)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型小鼠的改善作用及分子机制.在小鼠原代骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)上建立NLRP3 炎症小体活化模型,通过蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、免疫荧光染色、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和流式细胞术探究其分子机制.将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、TGP 组、模型组(LPS组)、LPS+TGP 低剂量组、LPS+TGP高剂量组、LPS+MCC950 组、LPS+MCC950+TGP 组,每组 8 只,建立小鼠 ALI模型.最后,收集肺泡灌洗液(bron-choalveolar lavage fluid,BALF)以及肺组织.测定各组小鼠肺指数及肺重湿干比,通过苏木精-伊红(HE)染色技术分析肺部组织的病理学变化,使用流式细胞术检测各组BALF中中性粒细胞数量,采用ELISA法测定BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量,实时荧光定量PCR(quantitative real-time,RT-qPCR)法测定肺组织中IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的基因表达.结果表明TGP通过抑制上游线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen spe-cies,mtROS)的产生以及随后的凋亡相关斑点(apoptosis-associated speck,ASC)的寡聚化,显著阻断了NLRP3 炎症小体的激活.此外,在小鼠ALI模型中,与空白组相比,模型组肺组织出现肺泡结构破裂,肺泡间隔增厚,肺指数及肺重湿干比明显增高,中性粒细胞数量显著增加,炎性因子水平明显升高;与模型组相比,TGP和MCC950 各组的肺组织病理形态明显改善,肺指数和肺重湿干比明显减低,中性粒细胞数量显著减少,炎性因子水平显著下调;值得注意的是,与MCC950 组相比,MCC950+TGP组效果无明显差异.综上,该研究揭示了白芍总苷胶囊可能是通过抑制NLRP3 炎症小体的激活从而改善小鼠ALI,也提供了一种安全有效的防治ALI/ARDS的候选药物.

目的 研究氢对大鼠矽肺模型早期炎症的干预作用和机制.方法 将无特定病原体级Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、汉防己甲素组、氢气组和联合干预组,每组10只.采用一次性气管非暴露法,后4组大鼠均一次性予1.00 mL质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅混悬液;对照组大鼠予等体积0.9%氯化钠溶液.染尘24 h后,汉防己甲素组大鼠每日予30 mg/kg体质量的汉防己甲素灌胃;氢气组大鼠每日持续性吸入体积分数为66.6%的氢气 4 h;联合干预组大鼠同时予上述2组大鼠的干预;对照组和模型组大鼠均予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃.干预14 d后处死各组大鼠,测定肺脏器系数,进行肺组织病理学检查;以比色法检测血清中丙二醛水平;以酶联免疫吸附实验法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)水平;以蛋白质印迹法检测肺组织中核酸结合寡聚结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、核转录因子-κB(NF-κB)p65、NF-κB磷酸化p65(NF-κB p-p65)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)相对表达水平;以免疫组织化学法检测肺组织中NLRP3和NF-κB p65蛋白相对表达水平.结果 肺组织病理学检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠有明显的肺泡破裂融合,间质淋巴细胞和巨噬细胞浸润,肺泡壁增厚,胶原纤维沉积,纤维组织轻度增生;3个干预组大鼠肺组织病理改变程度均较模型组减轻,且与汉防己甲素组和氢气组比较,联合干预组大鼠的肺泡结构更完整,肺泡壁更薄,胶原纤维更少.汉防己甲素组、氢气组和联合干预组大鼠肺脏器系数和肺组织Szapiel评分均低于模型组(P值均<0.05).与对照组比较,模型组大鼠血清丙二醛水平和肺组织中TNF-α、IL-1β水平,以及肺组织中NLRP3、NF-κB p65、NF-κB p-p65、Caspase1和ASC蛋白的相对表达水平均升高(P值均<0.05);3个干预组大鼠上述指标均低于模型组(P值均<0.05);除血清中丙二醛水平和肺组织中NF-κB p-p65外,联合干预组大鼠上述指标均低于汉防己甲素组和氢气组(P值均<0.05).结论 氢可通过NF-κB/NLRP3信号通路干预矽肺早期炎症.