目的:探讨Roux-en-Y胃旁路术(RYGB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏胆汁酸信号及糖异生的影响。方法:将16只健康雄性Sprague-Dawley大鼠通过高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM，随机数字表法分为假手术组( n＝8)和手术组( n＝8)。手术组行RYGB术，假手术组在与手术组相同位置行胃肠横断并原位吻合。术前及术后第1、2、4、6、8周测各组摄食量和空腹血糖；术前、术后2、8周行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素敏感试验(ITT)；术后8周留取空腹血清检测总胆汁酸水平，留取肝脏组织用反转录聚合酶链反应检测法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA表达水平，应用SPSS 20.0软件进行统计分析，组间比较采用 t检验。 结果:手术组术后第4、6、8周摄食量[(18±2)、(19±3)、(20±4) g/d]显著低于假手术组[(24±3)、(28±4)、(26±3) g/d]，手术组术后第2、4、6、8周空腹血糖[(6.9±0.9)、(6.0±1.1)、(6.4±0.8)、(6.8±0.7) mmol/L]显著低于假手术组[(12.9±1.4)、(10.8±0.8)、(9.4±1.1)、(9.0±1.0) mmol/L]，差异有统计学意义( t＝4.707、5.091、3.394、9.209、9.982、6.239、5.098， P<0.05)；术后2周，手术组OGTT、ITT曲线下面积[(898±118)、(428±85) mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1 508±108)、(788±98) mmol/(L·min)]，术后8周，手术组OGTT、ITT曲线下面积[(975±102)、(455±76) mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1 575±96)、(775±86) mmol/(L·min)]，差异有统计学意义( t＝10.790、7.849、12.120、7.886， P<0.05)；术后8周，手术组大鼠血清总胆汁酸[(105.17±14.81) μmol/L]显著高于假手术组[(68.87±10.81) μmol/L]，差异有统计学意义( t＝5.600， P<0.05)；手术组与假手术组比较，肝脏FXR和SHP mRNA的表达显著上调(1.67±0.31比1.17±0.11、2.37±0.21比1.33±0.18)，PEPCK和G6Pase mRNA的表达显著下调(0.77±0.12比1.15±0.14、0.87±0.08比1.05±0.10)，差异有统计学意义( t＝4.299、10.640、5.829、3.976， P<0.05)。 结论:RYGB术改善T2DM大鼠糖代谢的作用机制可能与术后肝脏胆汁酸信号上调进而抑制糖异生有关。

目的:评价电针对急性术后痛大鼠背根神经节(DRG)程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/程序性细胞死亡受体(PD-1)/含Src-同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)信号通路的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠39只，体质量220~250 g，6~8周龄，采用随机数字表法分为3组( n＝13)：对照组(C组)、腹部手术组(S组)和腹部手术+电针组(S+EA组)。S组和S+EA组在异氟烷麻醉下行腹部手术。S+EA组于术毕即刻和术后2 h时，选取双侧足三里和三阴交穴进行电针刺激30 min，频率为10 Hz连续波，电流为1 mA。每组取7只大鼠，分别于造模前1 d(T 0)和造模后3、5、7、9、11、24 h时(T 1~6)，依次测定机械缩足反应阈(MWT)、机械缩腹反应阈(ACT)、热缩足潜伏期(TWL)和冷缩足潜伏期(CWL)。于造模后5 h每组处死6只大鼠，取出T 12~L 4 DRG，分别采用Western blot法检测IL-6、PD-L1、PD-1和SHP-1的表达，采用免疫荧光法观察PD-L1在各类神经元的表达情况。 结果:3组不同时点TWL和CWL比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，S组T 1~5时MWT降低，T 1~6时ACT降低，DRG IL-6表达上调，PD-L1、PD-1和SHP-1表达下调( P<0.05)；与S组比较，S+EA组T 1，2时MWT和ACT升高，DRG IL-6表达下调，PD-L1、PD-1和SHP-1表达上调( P<0.05)。免疫荧光结果显示，PD-L1在小直径神经元(CGRP +神经元和IB4 +神经元)和大直径神经元(NF200 +神经元)上均存在表达，且主要表达在CGRP +神经元和IB4 +神经元上。3组间PD-L1在DRG各类神经元的表达比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:电针减轻大鼠急性术后痛的机制可能与激活PD-L1/PD-1/SHP-1信号通路有关。

目的:构建并鉴定气道上皮细胞条件性Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）基因敲除小鼠，观察慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）患者气道上皮SHP-1表达情况及SHP-1表达缺陷对肺气肿小鼠表型的影响。方法:检测慢阻肺患者肺组织中气道上皮SHP-1的表达情况。采用CRISPR/Cas9技术构建SHP-1 flox/flox转基因小鼠，并将其与气道上皮细胞Clara蛋白10-环化重组酶与雌激素受体融合转基因小鼠（CC10-CreER +/+）进行交配，腹腔注射他莫昔芬后，获得气道上皮SHP-1基因敲除小鼠（SHP-1 flox/floxCC10-CreER +/-，SHP-1 Δ/Δ）。提取小鼠鼠尾和肺组织DNA，经PCR扩增后判别小鼠的基因型；通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法验证气道上皮细胞SHP-1基因的敲除效果。使用弹性蛋白酶构建肺气肿小鼠模型，评估各组小鼠肺气肿严重程度。 结果:慢阻肺患者气道上皮SHP-1表达显著下调。基因型鉴定证实SHP-1 Δ/Δ小鼠表达CC10-CreER及SHP-1-flox。他莫昔芬诱导后，我们从DNA、RNA及蛋白水平证明SHP-1 Δ/Δ小鼠气道上皮细胞中SHP-1蛋白表达缺失，表明气道上皮细胞特异性SHP-1基因敲除小鼠构建成功。肺气肿动物模型中，SHP-1 Δ/Δ小鼠与对照组相比，肺气肿表型更为严重，表现为肺组织肺泡结构紊乱，肺泡壁破裂融合形成肺大疱。 结论:本研究成功建立并鉴定气道上皮细胞SHP-1基因敲除小鼠模型，为深入阐明SHP-1在慢阻肺进程中的作用及其机制提供了新的实验工具。

程序性死亡受体1(PD-1)是近年来发现的一种重要的负性共刺激分子，诱导性表达于T、B细胞表面，在调控细胞免疫应答及免疫耐受等过程中起着重要的作用。PD-1与程序性死亡-配体1(PD-L1)结合后通过募集磷酸化的SHP2减弱下游如PI3K/Akt和ERK等信号通路的传导，进而抑制T细胞的增生和细胞因子的产生，抑制免疫应答，参与大量炎症性疾病的发生和发展。PD-1在眼科领域的研究尚处于起步阶段，除参与眼科炎症性疾病如葡萄膜炎、交感性眼炎、变态反应性结膜炎等疾病的发病以外，也参与角膜移植排斥反应、视神经损伤、视神经脊髓炎、糖尿病视网膜病变、甲状腺相关眼病及黑色素瘤等疾病，因而阻断PD-1及其配体PD-L1之间的相互作用有可能成为治疗眼部肿瘤、炎症、免疫性、退变性疾病的潜在的靶点。本文就PD-1及其配体PD-L1在眼部疾病发病中作用的最新研究进展作一综述。

目的:探讨低氧肺癌细胞来源的外泌体微小RNA(miR)-1278对巨噬细胞M2极化的调节作用及其机制。方法:收集正常条件和缺氧肺癌细胞的培养上清液，差速离心法分离外泌体，透射电子显微镜观察并计数，实时定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-1278的表达水平。运用收集的外泌体(各10 μg)处理CD14+单核细胞(主要是巨噬细胞)，诱导细胞M2型分化，流式细胞术评估分化效果。miR-1278 mimic、miR-1278 inhibitor以及各自的阴性对照转染CD14+单核细胞，检测M2型巨噬细胞比例，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)、趋化因子CC配体18(CCL-18)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的分泌量。预测、筛选和验证miR-1278的靶基因，研究miR-1278对靶基因及其下游通路的调节作用。常氧和低氧CL1-5细胞外泌体分别与通路抑制剂WP1066或miR-1278 inhibitor处理CD14+单核细胞，检测M2型巨噬细胞比例，并研究巨噬细胞条件培养基对肺癌细胞迁移和内皮细胞血管形成的作用。采用Student′s t检验分析两组间差异，多组间数据差异采用方差分析进行比较。 结果:与常氧肺癌细胞比较，低氧肺癌细胞分泌的外泌体数量显著增加(0.8~1.5倍， P<0.05)。过表达和抑制miR-1278的水平分别促进常氧(12.06%比38.21%， P<0.05)和抑制低氧(30.55%比9.53%， P<0.05)巨噬细胞的M2极化，伴随IL-10、CCL-18和VEGF-A分泌量的变化。miR-1278靶向抑制磷酸酶SHP-1的表达(约70%， P<0.05)，进而促进信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路的活性。WP1066(STAT3抑制剂)处理可以抑制低氧肺癌细胞外泌体诱导的M2极化，WP1066和miR-1278 inhibitor均可抑制低氧肺癌外泌体诱生的巨噬细胞条件培养基对肿瘤细胞迁移和内皮细胞血管形成的诱导作用。 结论:低氧肺癌来源的外泌体携带的miR-1278通过靶向抑制SHP-1的表达，激活STAT3通路，从而诱导巨噬细胞的M2极化，有助于构建免疫抑制微环境，进而促进肿瘤迁移和血管形成。

目的:探讨长期节食状态下大鼠体内胆汁酸的变化及其机制。方法:20只健康雄性Wistar大鼠分为对照组和节食组，每组10只。对照组大鼠正常量饮食，节食组大鼠给予正常饮食量的50%饲养，12周后麻醉，采集各组大鼠血清、胆汁、肝脏和回肠组织样本，分离腹部脂肪称重，并计算腹部脂肪/体重比。计算胆汁流速。采用试剂盒和高效液相色谱串联质谱法测定各样本中总胆汁酸（TBA）及β-鼠胆酸（β-MCA）、牛磺β-鼠胆酸（Tβ-MCA）、胆酸（CA）、牛磺胆酸（TCA）、甘氨胆酸（GCA）、鹅去氧胆酸（CDCA）、甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）、去氧胆酸（DCA）、牛磺去氧胆酸（TDCA）、甘氨去氧胆酸（GDCA）、石胆酸（LCA）、甘氨石胆酸（GLCA）、牛磺猪去氧胆酸（THDCA）、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、甘氨熊去氧胆酸（GUDCA）的浓度，采用实时荧光定量聚合酶链反应测定肝脏和回肠组织法尼醇X受体（Fxr）“肠-肝轴”通路上胆汁酸相关核受体、代谢酶和转运体小异二聚体伴侣（ Shp） 、成纤维细胞生长因子15（ Fgf15） 、胆固醇7α-羟化酶（ Cyp7a1）、甾醇12α-羟化酶（ Cyp8b1） 、胆酸盐输出泵（ Bsep） 、多药耐药相关蛋白2（ Mrp2） 、Na +依赖性胆酸盐转运体（ Asbt）等的mRNA表达量。组间比较采用 t检验。 结果:与对照组相比，节食组大鼠体重与腹部脂肪/体重比均显著降低（ P<0.01）；血清TBA水平以及胆汁流速和胆汁酸经胆汁排泄量显著升高（ P<0.05）；肝组织中β-MCA、CA、GCA、CDCA、GCDCA、DCA、GDCA、LCA、GLCA、TUDCA和GUDCA的浓度显著升高（ P<0.05），而TCA、TDCA和THDCA的浓度显著降低（ P<0.05）；回肠组织中Tβ-MCA、TCA、DCA和TDCA浓度均显著降低（ P<0.05）；肝脏中次级胆汁酸和非结合型胆汁酸浓度明显增高（ P<0.05），回肠中结合型胆汁酸浓度显著降低（ P<0.05）。与对照组比较，节食组大鼠回肠和肝脏部位 Fgf15基因表达量均显著降低，回肠 Asbt基因表达量显著上调，肝脏中 Shp和 Cyp7a1的mRNA表达水平均显著上调，而 Cyp8b1的mRNA表达量显著降低（均 P<0.05）。 结论:节食大鼠饮食结构的改变促使体内胆汁酸呈现明显的特征性变化，究其机制可能与Fxr“肠-肝轴”的适应性调控有关。

目的:探讨腺病毒介导的短发夹RNA (shRNA)下调含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2（SHP2）对体外培养的人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法:将携带靶向SHP2的shRNA并表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP分别转染体外培养的LX-2细胞；实时荧光定量PCR检测LX-2细胞的SHP2 mRNA表达；用 Western blot检测LX-2细胞的SHP2、Bax及Bcl-2蛋白表达；TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测LX-2细胞凋亡。实验分组：（1）对照组：以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞；（2）Ad-GFP组：转染空病毒Ad-GFP；（3）Ad-shRNA/SHP2组：转染重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2。多组间均数比较用单因素方差分析，组间比较采用LSD检验。 结果:靶向SHP2的shRNA显著下调LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA表达( P < 0.05)；TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示，与对照组LX-2细胞凋亡率(3.077%±0.731%，9.438%±0.804%)及Ad-GFP组(3.250%±0.851%，8.893%±1.982%)比较，Ad-shRNA/SHP2组LX-2细胞凋亡率(12.755%±1.606%，19.340%±2.505%)明显升高( P < 0.05)，而对照组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义( P > 0.05)。 Western blot检测各组LX-2细胞的Bax及Bcl-2蛋白表达结果显示，与对照组及Ad-GFP组LX-2细胞的Bax蛋白表达(1.989±0.147，1.999±0.162)比较，Ad-shRNA/SHP2组LX-2细胞Bax蛋白表达(2.493±0.203)显著升高（ P < 0.05），而对照组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义( P > 0.05)；与对照组及Ad-GFP组LX-2细胞的Bcl-2蛋白表达(1.707±0.146，1.521±0.142)比较，Ad-shRNA/SHP2组LX-2细胞Bcl-2蛋白表达(1.042±0.148)明显降低( P < 0.05)，而对照组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义( P > 0.05)。 结论:SHP2表达下调通过降低Bcl-2/Bax诱导体外人肝星状细胞LX-2凋亡。

泄放生态流量是修复小水电坝下减水河段生态系统的重要手段.大型底栖动物对环境变化敏感,是水生生态系统修复效果的重要指示生物类群.2021年,在重庆市巴南区一品河、五布河上共选择8座典型小水电,调查减水河段前端浅滩(评估点)的流量、河流生境、水质、底栖动物,并与近自然河段浅滩(参照点)对比,以评价生态流量泄放后减水河段的生态修复效果,探究影响底栖动物群落恢复的生态机制.结果显示:只有1座小水电的泄放量完全达到设计值.未达标泄放量的达成度平均值为41.0％.评估点河道湿润率平均值为47.6％.评估点和参照点的水质并无明显差异.底栖动物密度、大多数评估点的水生昆虫生物量和丰富度指数均显著低于参照点,平均值分别为参照点的25.8％、24.5％、43.2％.Shannon-Wiener多样性指数、Pielou指数与参照点无显著差异.评估点底栖动物以EPT昆虫(蜉蝣目、襀翅目、毛翅目昆虫)为优势,功能摄食类群以收集者和刮食者为优势,与参照点一致,但评估点各功能摄食类群密度普遍显著低于参照点.评估点底栖动物密度、丰富度、EPT昆虫密度与河道湿润率呈显著线性正相关.研究表明:泄放生态流量后,小水电近坝浅滩生境水质、底栖动物群落多样性、群落结构、功能摄食类群等与参照点无显著差异.底栖动物密度、水生昆虫生物量和丰富度、EPT昆虫密度等指标的恢复效果并不显著.减水河段的生态修复效果整体尚未达到预期.泄放量不足是阻碍底栖动物群落恢复的重要原因.

由PTPN11基因编码的含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-con-taining protein tyrosine phosphatase,SHP2)是细胞关键调节因子蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phospha-tase,PTP)家族的一员,在多种恶性肿瘤中高表达.一方面,SHP2通过介导RAS-MAPK,PI3K-AKT和JAK-STAT等信号通路调节肿瘤细胞的生理功能.另一方面,在肿瘤微环境中,SHP2与免疫抑制受体[如程序性死亡受体 1(programmed death-1,PD-1)、细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)等]结合,调节免疫细胞的功能,造成免疫微环境的抑制性.因此,SHP2在肿瘤中具有调节肿瘤细胞和免疫微环境的双重功能,提示其为极具价值的肿瘤治疗靶点.近年来,大量具有成药潜力的SHP2抑制剂进入临床试验,为肿瘤靶向治疗提供新的可能.目前SHP2抑制剂的研究已经取得一定成果,但仍存在较多耐药性、非特异性和毒性等问题.因此,需进一步研究SHP2抑制剂的成药性和靶向策略.本文对S HP2参与信号通路的调控机制和其在肿瘤和免疫微环境中的作用进行总结,并对S H P2抑制剂及其临床研究进展进行综述.

目的:探究SHP-2如何调控STAT3-PI3K-AKT信号通路对CNE-1细胞中的活化状态及其对肿瘤生物学行为的影响,并进一步探讨其相关分子机制.方法:采用Western blot检测CNE-1细胞中SHP-2、STAT3、PI3K的表达水平.设CNE-1组为空白组;将空白慢病毒转染至CNE-1细胞后作为NC-SHP-2组;将si-SHP-2病毒转染到CNE-1细胞后作为si-SHP-2组,检测并比较各组SHP-2、STAT3、p-STAT3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的表达水平;平板克隆检测细胞增殖活性;CCK-8检测各组细胞活性;细胞划痕检测各组细胞迁移;Transwell检测各组细胞侵袭;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3和Bcl-2)的表达水平.结果:SHP-2、STAT3、PI3K在CNE-1细胞中均为高表达.与NC-SHP-2组比较,si-SHP-2组细胞中的p-STAT3,p-PI3K和p-AKT表达显著下调(P<0.05),细胞相对数量、增殖速率、迁移和侵袭速率均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05).与NC-SHP-2组比较,si-SHP-2组细胞Bax和Caspase-3的表达水平升高;Bcl-2表达水平降低(P<0.05).结论:SHP-2在CNE-1细胞中高表达,SHP-2与STAT3-PI3K-AKT通路的激活密切相关,沉默CNE-1细胞中SHP-2的表达能有效降低鼻咽癌的发展.