目的:通过生物信息学分析转录因子E2F1/2/7/8在前列腺癌(PCa)中的生物学作用。方法:在GEPIA数据库中，以50%为界值将E2F1/2/7/8基因表达水平分为低表达组和高表达组，分析E2F1/2/7/8表达差异与PCa患者无病生存率(DFS)的关系。TCGA数据库包含497例PCa和52例正常前列腺组织，UALCAN网站分析TCGA数据库中基因转录水平及其与Gleason评分的关系。分别获取E2F1/2/7/8的相关基因，将4组相关基因取交集绘制韦恩图获得最终相关基因，进一步行GO功能分析和KEGG通路富集分析。结果:E2F1/2/7/8表达水平越低，PCa患者DFS越高(均 P<0.05)。与正常前列腺组织比较，PCa组织中E2F1/2/7表达升高(均 P<0.05)。E2F1/2/7/8表达水平越高，PCa患者的Gleason评分越高(均 P<0.05)。126个最终相关基因的GO功能分析显示，相关基因在生物学过程(BP)方面主要富集于细胞分裂、有丝分裂、姐妹染色体结合、细胞增殖以及DNA复制等，在细胞成分(CC)方面主要富集于细胞核、细胞核质、细胞质以及细胞溶质等，在分子功能(MF)方面主要富集于蛋白结合、ATP及DNA结合等；KEGG富集于细胞周期、卵母细胞减数分裂、孕酮介导的卵母细胞成熟等信号通路。 结论:转录因子家族中E2F1/2/7/8可通过调节细胞周期，发挥致癌基因作用。

目的:探讨胞质分裂蛋白调节因子1(PRC1)对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及黏附斑激酶(FAK)在其中的作用。方法:设计合成靶向抑制PRC1的小干扰RNA(siRNA)，分别转染人膀胱癌细胞系EJ和T24，两种细胞系各分为对照组(转染对照siRNA)和敲低组(转染PRC1 siRNA)，通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹法检测两组PRC1、FAK、桩蛋白(Paxillin)的mRNA和蛋白质表达水平以及FAK和Paxillin的磷酸化水平。通过细胞迁移和侵袭实验分析两组的迁移和侵袭能力。采用 t检验进行组间比较。 结果:敲低组EJ、T24细胞PRC1 mRNA表达量(0.43±0.11、0.55±0.07)低于对照组(1.00±0.19、1.00±0.20， t＝4.533、3.699， P<0.05)。敲低组FAK mRNA表达量(0.95±0.05、1.09±0.14)与对照组差异无统计学意义(1.00±0.20、1.00±0.20， t＝0.423、0.622， P>0.05)。敲低组Paxillin mRNA表达量(1.12±0.01、1.02±0.10)相较对照组差异无统计学意义(1.00±0.08、1.00±0.04， t＝2.521、0.360， P>0.05)。敲低组EJ、T24细胞FAK和Paxillin蛋白质表达量(0.90±0.02、0.99±0.02和0.93±0.01、1.10±0.02)相较对照组差异无统计学意义(0.88±0.12、0.99±0.01和0.91±0.30、1.08±0.02， t＝0.714、0.147和0.806、1.019， P>0.05)。敲低组EJ、T24细胞FAK和Paxillin蛋白质磷酸化水平(0.25±0.02、0.20±0.01和0.47±0.02、0.84±0.04)显著低于对照组(2.22±0.30、2.73±0.15和0.86±0.02、1.13±0.04， t＝11.510、28.390和20.450、8.576， P<0.01)。迁移实验中敲低组穿越的细胞数[(38.33±3.21)、(34.67±2.52)个]显著少于对照组[(114.00±7.55)、(71.33±4.04)个， t＝15.970、13.340， P<0.01)，差异有统计学意义。侵袭实验中敲低组穿越的细胞数[(24.67±3.21)、(29.00±3.00)个]显著少于对照组[(84.00±5.56)、(69.33±3.21)个， t＝15.980、15.890， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:下调PRC1的表达可通过抑制FAK的磷酸化降低膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力。

目的:探讨Dynamin 3（DNM3）在胃癌中的作用机制及预后价值。方法:采用生物信息分析、实验研究方法和回顾性队列研究方法。收集2013年1月至2018年7月福建医科大学附属协和医院收治的153例行根治性胃切除术胃癌患者的临床病理资料、新鲜胃癌及配对正常组织样本和石蜡切片，行实时荧光定量聚合酶链式反应检测、免疫印迹实验、流式细胞周期实验、免疫组织化学染色检测和预后分析。收集癌症基因组图谱（TCGA）数据库的胃腺癌（STAD）数据集进行生物信息分析。观察指标：（1）胃癌中DNM3基因在TCGA-STAD中的表达情况。（2）胃癌中DNM3的突变和拷贝数改变。（3）胃癌中DNM3的启动子甲基化水平。（4）胃癌中DNM3、p53的蛋白相对表达量。（5）胃癌中DNM3相关性和富集性分析。（6）流式细胞周期G0/G1期、S期、G2/M期的比例。（7）胃癌中免疫细胞浸润和DNM3之间的相关性。（8）免疫组织化学染色检测与临床特征之间的相关性。（9）影响胃癌患者5年总生存率的独立因素分析。正态分布的计量资料以 x± s表示，多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD法；两组间比较采用 t检验；偏态分布的计量资料以 M（ Q1， Q3）表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料以绝对数或百分比表示，组间比较采用 χ2检验或Fisher确切概率法。配对样本采用威尔科克森符号秩检验。等级资料采用秩和检验。运用Pearson相关系数或Spearman相关系数检验两组的相关性。单因素和多因素分析采用COX比例风险回归模型。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算生存率，采用Log-Rank检验进行生存情况分析。使用Benjamini-Hochberg错误发生率校正对 P值进行调整。 结果:（1）胃癌中DNM3基因在TCGA-STAD中的表达情况。TCGA-STAD数据库中DNM3基因在27个肿瘤组织和配对正常组织中的表达水平分别为0.775（0.605，1.161）和1.216（0.772，1.681），两者比较，差异有统计学意义（ Z=-2.64， P<0.05）。DNM3基因在笔者中心48对胃癌组织和配对正常组织中mRNA表达水平分别为4.370（2.870，6.040）和2.520（0.850，4.170），两者比较，差异有统计学意义（ Z=-4.39， P<0.05）。（2）胃癌中DNM3的突变和拷贝数改变。TCGA-STAD数据库中16例胃癌患者发生DNM3突变或体细胞拷贝数改变，其中6个错义突变，1个截断突变，8个拷贝数增加，1个拷贝数减少。TCGA-STAD数据库370例胃癌患者中DNM3突变前后的mRNA表达水平分别为6.13（5.40，7.08）和5.02（3.98，5.46），两者比较，差异有统计学意义（Log 2FC=-1.11， Z=-2.59， P<0.05）。（3）胃癌中DNM3的启动子甲基化水平。TCGA-STAD数据库中372例胃癌患者DNM3甲基化水平与DNM3 mRNA的检测结果显示：DNM3甲基化水平为0.198（-0.458，0.301），DNM3 mRNA表达水平为6.014（5.141，6.628），DNM3甲基化水平与DNM3 mRNA表达水平呈负相关（ r=-0.38， P<0.05）。32例患者随访结果显示：16例DNM3高甲基化组和16例DNM3低甲基化组患者3年总生存率分别为18.8%和41.3%，两者比较，差异有统计学意义（风险比=1.40， P<0.05）。免疫印迹实验结果显示：AGS细胞用0、0.5、1.0 μmol/L 5-azacytidin处理后的DNM3相对表达量分别为0.270±0.020、0.357±0.051、0.599±0.039，3组比较，差异有统计学意义（ F=57.84， P<0.05）。HGC-27细胞用0、0.5、1.0 μmol/L 5-azacytidin处理后的DNM3相对表达量分别为0.316±0.038、0.770±0.031、0.877±0.052，3组比较，差异有统计学意义（ F=156.30， P<0.05）。（4）胃癌中DNM3、p53的蛋白相对表达量。免疫印迹实验结果显示：转染DNM3质粒和对照质粒的AGS细胞中DNM3、p53的蛋白相对表达量分别为0.688±0.047、0.872±0.041和0.249±0.029、0.352±0.020；转染DNM3质粒和对照质粒的AGS细胞比较，上述蛋白相对表达量差异均有统计学意义（ t=13.77，19.74， P<0.05）。转染DNM3质粒和对照质粒的HGC-27细胞中上述蛋白相对表达量分别为0.969±0.069、1.464±0.081和0.456±0.048、0.794±0.052，差异均有统计学意义（ t=10.57，12.06， P<0.05）。（5）胃癌中DNM3相关性和富集性分析。相关性分析结果显示：DNM3与胃癌中RBMS3、CNTN4、PDE1A基因呈正相关（ r=0.52，0.52，0.50， P<0.05），与SLC25A39、PAICS、GAPDH基因呈负相关（ r=-0.41，-0.40，-0.40， P<0.05）。基因集富集分析结果显示：与核糖体和氧化磷酸化有关的基因集在DNM3低表达组中上调［富集分数（NES）=-3.30，-2.16， P<0.05］，而淋巴细胞和非淋巴细胞之间的免疫调节相互作用在DNM3高表达组中上调（NES=1.67， P<0.05）。基因本体论分析结果显示：DNM3低表达与有丝分裂姐妹染色体分离（编号：0000070）、无义介导衰变的核转录mRNA分解过程、姐妹染色体分离（编号：0000819）、核转录mRNA分解代谢过程、氧化磷酸化的调控有关（NES=-2.29，-3.10，-2.33，-2.56，-2.68， P<0.05）。京都基因与基因组百科全书分析结果显示：DNM3低表达在核糖体和氧化磷酸化中存在上调和串联（NES=-3.34，-2.21， P<0.05）。（6）流式细胞周期G0/G1期、S期、G2/M期的比例。流式细胞周期实验结果显示：转染pCMV-DNM3质粒的AGS细胞G0/G1期、S期、G2/M期的比例分别为65.1%±3.0%、17.3%±3.0%、17.6%±1.0%，转染对照质粒的AGS细胞上述指标分别为53.4%±4.0%、26.3%±2.0%、20.3%±3.0%。转染DNM3质粒与转染对照质粒的AGS细胞比较，G0/G1期、S期差异均有统计学意义（ t=4.05，4.32， P<0.05）。（7）胃癌中免疫细胞浸润和DNM3之间的相关性。免疫细胞浸润实验结果显示：DNM3 mRNA表达水平与肥大细胞，NK细胞，pDCs，B细胞，滤泡辅助T细胞，有效记忆T细胞，T细胞，中央记忆T细胞，CD8 T细胞，DC细胞，巨噬细胞，γ-δT细胞（Tgd），iDCs，嗜酸性粒细胞浸润水平呈正相关（Spearman相关系数分别为0.41，0.29，0.26，0.20，0.22，0.22，0.13，0.16，0.15，0.14，0.14，0.17，0.18，0.22， P<0.001，<0.001，<0.001，<0.001，<0.001，<0.001， P=0.015，0.002，0.004，0.005，0.005， P<0.001，<0.001，<0.001）；与Th17细胞，Th2细胞，NK CD56dim细胞浸润水平呈负相关（ r=-0.18，-0.23，-0.10， P<0.001， P=0.001和 P=0.046）。（8）免疫组织化学染色检测与临床特征之间的相关性。免疫组织化学分析结果显示：DNM3在105例胃癌组织和105例配对正常组织中的免疫组织化学染色评分分别为3（2，4）分和6（4，9）分，差异有统计学意义（ Z=-7.35， P<0.05）。70例DNM3低表达与35例DNM3高表达胃癌患者性别、肿瘤部位、N分期比较，差异均有统计学意义（ χ2 =4.29，7.67，6.86， P<0.05）。（9）影响胃癌患者5年总生存率的独立因素分析。多因素分析结果显示：病理学T分期为T3~4期和DNM3染色评分低是胃癌患者5年总生存率的独立危险因素（风险比=1.91，0.51，95%可信区间为1.06~3.43，0.26~0.98， P<0.05）。DNM3低表达组胃癌患者和高表达组胃癌患者的5年总生存率分别为44.3%和65.7%，两者比较，差异有统计学意义（ χ2=5.02， P<0.05）。 结论:DNM3是一种肿瘤抑制因子，也是胃癌预后不良的独立预测因子，它可能通过甲基化调控胃癌的细胞周期和肿瘤微环境中的免疫抑制。

细胞分裂周期相关(CDCA)基因家族是细胞增殖过程中重要的调节因子，其中细胞分裂周期相关蛋白2(CDCA2)是蛋白磷酸酶1γ(PP1γ)的靶向亚单位，参与有丝分裂中染色质重塑、细胞周期中的DNA损伤反应以及核包膜的形成。CDCA2在多种癌症中表达上调，并与恶性肿瘤的侵袭、转移及凋亡密切相关。本文主要就近年来CDCA2基因在恶性肿瘤中的作用及机制做简要综述。

目的:探讨脂联素(AD)调控滑膜细胞产生炎性因子进而诱发骨关节炎(OA)。方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测刺激细胞的最适加药浓度；通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路标志基因如促分裂原活化的蛋白激酶(MEK)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)的表达变化。蛋白质印迹法(Western blot)分析AD的刺激对ERK1/2、p38的磷酸化作用；酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定AD作用后滑膜细胞炎性因子的产量。多个样本比较采用单因素方差分析。结果:AD(1 μg/ml)可显著对滑膜细胞产生增殖抑制作用( F＝136.900、11.930， P<0.05)；荧光定量PCR结果显示，与对照组比较，AD可上调MEK及ERK基因表达(1.026±0.072、2.926±0.158， t＝21.910， P<0.05；0.960±0.194、5.433±0.532， t＝15.810， P<0.05)；Western blot结果表明，与对照组比较，AD可刺激滑膜细胞增加ERK1/2、p38的磷酸化(0.488±0.083、1.152±0.050， t＝11.860， P<0.05；0.407±0.014、1.312±0.063， t＝24.370， P<0.05)；ELISA法结果显示，AD可显著促进由趋化蛋白引起的下游炎性因子如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、基质金属蛋白酶(MMP)-3和MMP-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生[(15.077±0.884)、(69.947±2.950) pg/ml、(9.225±0.323)、(134.925±15.02) ng/ml、(93.055±6.073) pg/ml]，与对照组比较，差异有统计学意义( t＝3.239、4.838、5.312、4.366、3.292， P<0.05)，与抑制剂组比较，差异有统计学意义( t＝2.275、6.251、4.331、1.221、3.456， P<0.05)。 结论:AD可通过影响MAPK/ERK信号通路来增强滑膜细胞炎性因子的产生。

AMP活化蛋白激酶（AMPK）是一种广泛存在于真核细胞生物中且进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在调控细胞能量代谢方面，AMPK作为能量代谢激酶具有极其重要的作用。当机体处于低能量状态时，AMPK对细胞内腺嘌呤核苷酸水平的变化作出反应，与一磷酸腺苷（AMP）或二磷酸腺苷（ADP）结合后被激活。激活的AMPK可调控各种代谢过程，包括脂质、葡萄糖代谢和细胞自噬。AMPK可通过磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1（ULK1）和Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶-空泡分选蛋白34（PIK3C3-VPS34）复合物中的自噬相关蛋白直接促进细胞自噬；也可通过调节叉头框蛋白O3（FOXO3）、溶酶体功能的转录因子EB（TFEB）和溴结构域蛋白4（BRD4）等转录因子下游自噬相关基因的表达间接促进细胞自噬；还可调节线粒体自噬，诱导受损的线粒体分裂，促进自噬反应向受损线粒体转移。AMPK另一个功能是调控线粒体健康，可通过刺激线粒体生物发生参与并调控线粒体内稳态的各个方面。本综述讨论了AMPK信号通道作为细胞响应能量应激和调控线粒体的中心，对线粒体生物学和内环境稳态的重要调控作用，重点介绍了AMPK在调节细胞自噬和线粒体自噬过程中的关键作用，以及调控线粒体稳态的研究进展。

目的:研究二甲双胍干预对噪声性听力损失（NIHL）的保护作用及其差异蛋白质组学表达谱。方法:于2021年1月，将39只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、噪声暴露组、二甲双胍+噪声暴露组，每组13只。噪声暴露组和二甲双胍+噪声暴露组大鼠连续暴露在声压级120 dB（A）、中心频率8 kHz的倍频程噪声下4 h；二甲双胍+噪声暴露组大鼠从噪声暴露前3 d开始给予200 mg/kg/d二甲双胍干预，共7 d。采用听性脑干反应（ABR）测试各组大鼠右耳噪声暴露前、噪声暴露后1、4、7 d的听力阈值变化情况，采用串联质谱标签（TMT）定量蛋白组学鉴定并分析各组大鼠内耳差异表达蛋白质，并用冰冻切片进行免疫荧光染色验证。结果:在噪声暴露后1、4、7 d，噪声暴露组和二甲双胍+噪声暴露组大鼠右耳短声ABR阈值明显高于对照组，二甲双胍+噪声暴露组大鼠右耳短声ABR阈值明显低于噪声暴露组（ P<0.05）。与噪声暴露组比较，二甲双胍+噪声暴露组大鼠差异表达上调蛋白1 035个，差异表达下调蛋白1 145个；GO富集分析显示，显著差异表达蛋白主要涉及结合、分子功能调节、信号转导等功能；KEGG通路富集分析发现，差异表达蛋白显著富集的通路包括磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路、焦点黏附、糖尿病性心肌病、分裂体、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等。免疫荧光实验显示，与噪声暴露组比较，二甲双胍+噪声暴露组胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）荧光强度增加，真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1（eIF4EBP1）荧光强度减弱。 结论:噪声暴露可导致大鼠听力阈值升高，二甲双胍可通过多条通路和生物学过程改善噪声引起的听力阈值异常。

目的:探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(SGK3)在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用,初步阐明SGK3在哺乳动物卵母细胞早期发育中的调控机制.方法:利用超排卵技术获取生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,利用显微注射技术将表达质粒体外转录获得的SGK3 mRNA注射至GV期卵母细胞,分为对照组、Tris-EDTA缓冲液(TE)组和SGK3 mRNA组,采用Western blotting法检测各组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平,显微注射SGK3 mRNA后1、2、3和4 h观察并计算各组卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率,采用SGK3抗体稀释抑制实验观察各组卵母细胞形态表现,采用Western blotting法检测体外培养不同时间点卵母细胞中磷酸化SGK3(pSer48)(SGK3-pSer48)和磷酸化细胞分裂周期蛋白2(CDC2)(pTyr15)(CDC2-pTyr15)蛋白表达水平.结果:与对照组和TE组比较,SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中 SGK3蛋白表达水平升高(P＜0.01),显微注射后1和2h时GVBD率升高(P＜0.01).SGK3抗体稀释抑制实验,随着SGK3抗体浓度增加,各组小鼠卵母细胞GVBD率呈浓度依赖性降低.过表达SGK3后,与对照组比较,SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中检测不到CDC2-pTyr15蛋白表达的时间至少提前1 h.不同稀释浓度SGK3抗体作用后,与对照组比较,随着SGK3抗体浓度升高和时间的延长,小鼠卵母细胞中CDC2-pTyr15蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.01),SGK3-pSer486蛋白表达水平逐渐升高(P＜0.01).结论:过表达SGK3可以增加小鼠卵母细胞GVBD率,加快CDC2-pTyr15的脱磷酸化,而CDC2-pTyr15的脱磷酸化晚于SGK3-Ser486的磷酸化.SGK3可能作为CDC2上游调节因子参与调控小鼠卵母细胞第一次减数分裂的恢复.

背景与目的:肉碱棕榈酰转移酶1A(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)的高表达与乳腺癌患者预后较差相关,且能促进线粒体对脂肪酸的利用并最大限度地提高三磷酸腺苷(triphosphate,ATP)产量.然而,CPT1A在乳腺癌转移中的作用仍不清楚.本研究旨在探讨乳腺癌中线粒体功能障碍与CPT1A/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号转导通路共同调节乳腺癌恶性行为的机制.方法:分别使用慢病毒系统和shRNA工具在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7中过表达或敲低CPT1A,将细胞分为NC组、CPT1A组和shCPT1A组.采用transwell实验检测细胞侵袭能力.采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α)、ERK1/2和CPT1A蛋白的表达.采用线粒体红染色分析MDA-MB-231和MCF7细胞系的线粒体形态,并通过耗氧率分析线粒体呼吸能力.结果:与表达对照载体的细胞相比,CPT1A过表达导致MCF7细胞和MDA-MB-231细胞侵袭能力增强(P＜0.05),shCPT1A敲低导致细胞侵袭能力降低(P＜0.05).与NC组相比,CPT1A组MDA-MB-231和MCF7细胞中线粒体分支长度显著变短(P＜0.05),ERK1/2、PGC-1α表达显著增加(P＜0.05),shCPT1A组MDA-MB-231和MCF7细胞中线粒体分支长度显著变长(P＜0.05),ERK1/2、PGC-1α表达显著降低(P＜0.05).此外,与NC组相比,CPT1A组MDA-MB-231细胞基础和最大呼吸能力以及ATP产量显著增加(P＜0.05),而shCPT1A组MDA-MB-231细胞基础和最大呼吸能力以及ATP产量显著降低(P＜0.05).结论:CPT1A激活的ERK1/2-PGC-1α信号转导通路在线粒体分裂介导的乳腺癌细胞转移中发挥重要作用.

线粒体自噬是细胞通过自噬-溶酶体途径,在自噬相关蛋白的调控下,有选择地清除受损或功能障碍的线粒体以维持线粒体质量和细胞稳态的过程,,与多种肿瘤的发生发展密切相关.越来越多研究表明,线粒体自噬在乳腺癌进展中发挥着双重作用.①促进乳腺癌进展:线粒体自噬通过触发能量代谢重编,减少ROS蓄积和维持线粒体稳态来促进乳腺癌细胞的生存和侵袭;②抑制乳腺癌进展:线粒体自噬通过减轻炎症反应和引发线粒体损伤,诱导乳腺癌细胞死亡或凋亡.其相关机制包括①PTEN诱导的激酶1/E3泛素蛋白连接酶(PINK1/Parkin)途径;②自噬受体相关蛋白途径(包括BNIP3、BNIP3L和FUNDC1);③线粒体分裂途径.本综述总结了线粒体自噬在乳腺癌中的作用、机制以及化疗耐药的研究现状,旨在为乳腺癌的研究和治疗提供参考.