目的:探索高糖诱导核糖核酸氧化增加对胰岛β细胞功能和活性的影响及分子机制。方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤INS-1细胞，高糖干预后同位素稀释超高效液相串联质谱(ID LC MS/MS)评估核酸氧化。利用8-氧代鸟苷-5'-三磷酸酯(8-oxoGTP)体外模拟INS-1细胞RNA氧化增加，CCK-8评估细胞增殖，流式细胞术评估细胞凋亡，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)评估胰岛素(INS)、胰-十二指肠同源盒1(PDX1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Casp3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶6(Casp6)基因信使RNA(mRNA)表达，全转录组测序分析RNA氧化影响INS-1细胞的分子机制。结果:高糖致INS-1细胞RNA氧化增加。RNA氧化增加抑制INS-1细胞增殖，降低INS和PDX1基因mRNA水平，促进凋亡相关casp3和casp6基因mRNA合成。全转录组测序分析发现，RNA氧化增加导致INS-1细胞内mRNA、长链非编码RNA(lncRNA)、微RNA(miRNA)和环状RNA(circRNA)差异表达，显著下调Mafa、Pdx1、Pax6和Mnx1转录因子，上调rno-miR-124-3p，rno-miR-133a-3p，rno-miR-3120，rno-miR-212-3p，rno-miR-7a-2-3p，促使相关lncRNAs差异表达，从而抑制胰岛素合成和分泌及β细胞增殖。结论:RNA氧化增加下调β细胞关键转录因子mRNAs水平，促使相关非编码RNA(ncRNA)特别是lncRNAs差异表达，影响β细胞胰岛素合成和分泌，抑制细胞增殖，是2型糖尿病(T2DM)β细胞功能障碍和活性降低的重要原因。

目的:针对现有技术的不足，尝试一种活性强、比例高的小鼠肠肌层细胞分离提取方法。方法:采用"降阶梯"策略构建解离液组合，逐层解离黏液层、黏膜层、固有层和黏膜下层，再使用消化液消化肌层细胞。其中，降阶梯式解离液是指胰蛋白酶浓度在黏液层、黏膜层和黏膜下层解离液中阶梯式降低；消化液是由胶原酶Ⅰ/Ⅳ、中性蛋白酶与脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)组成。实验组1、2、3的胰蛋白酶浓度(wt%)梯度分别为：0.50、0.25、0.10；0.50、0.30、0.20；1.00、0.50、0.25。两两比较采用 t检验。 结果:成功分离出肠肌层，并获得了肠肌层细胞，实验组1的肌层暴露比例为(91.00±1.87)%，细胞活性为(79.20±0.49)%。实验组1的肌层暴露比例显著高于实验组2[(91.00±1.87)%比(80.00±3.16)%， t＝2.994， P<0.05]和实验组3[(91.00±1.87)%比(83.00±2.55)%， t＝2.530， P<0.05]；同时实验组1的细胞活性也显著高于实验组2[(79.20±0.49)%比(70.20±0.37)%， t＝14.600， P<0.01]和实验组3[(79.20±0.49)%比(62.40±0.40)%， t＝26.560， P<0.01]。 结论:本方法能够提取获得活性强、比例高的肠肌层细胞。

目的:探讨2型糖尿病心肌病(T2DCM)患者血清长链非编码核糖核酸KCNQ1OT1(LncRNAKCNQ1OT1)、微小核糖核酸-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及其与左心功能的相关性.方法:选择2021年6月至2023年6月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的T2DCM患者80例作为T2DCM组,单纯2型糖尿病(T2DM)患者80例作为T2DM组,另选取同期体检健康者80例作为健康对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测并比较三组血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-181a-5p表达水平.Pearson相关性分析法分析血清LncRNAKCNQ1OT1、miR-181a-5p表达与左心功能相关指标[二尖瓣早期血流速度峰值/左侧壁二尖瓣环早期峰值速度均值(E/e')、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、Tei指数、左心室收缩末期内径(LVESD)、二尖瓣早期血流速度峰值/晚期血流速度峰值(E/A)]的相关性.结果:T2DCM组体质指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、B型脑肽钠(BNP)、肌酸激酶(CK)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbAlc)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于健康对照组(P＜0.05);T2DCM 组 BNP、CK、TC、LDL-C 高于 T2DM 组(P＜0.05)o T2DCM组血清miR-181a-5p表达水平低于T2DM组、健康对照组(P＜0.05);T2DCM组血清LncRNA KCNQ1OT1表达水平高于T2DM组、健康对照组(P＜0.05).T2DCM组LVEDD、LVESD、E/e'、Tei指数高于T2DM组、健康对照组(P＜0.05),LVEF、E/A低于T2DM组、健康对照组(P＜0.05)o T2DCM患者血清LncRNA KCNQ1OT1与LVEDD、LVESD、E/e'、Tei指数呈正相关(P＜0.05),与 E/A、LVEF、miR-181a-5p 呈负相关(P＜0.05);血清 miR-181a-5p 与 LVEDD、LVESD、E/e'、Tei 指数呈负相关(P＜0.05),与E/A、LVEF呈正相关(P＜0.05).结论:T2DCM患者血清LncRNA KCNQ1OT1表达水平升高,miR-181a-5p表达水平降低,可能参与左心功能损伤过程.

目的 探究着丝粒蛋白 F(centromere protein F,CENPF)在胰腺导管腺癌(pancreatic ductual adenocarcinoma,PDAC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 基于美国国家生物信息中心(National Center for Biotech-nology Information,NCBI)的微阵列/基因谱公共数据库(Gene Expression Omnibus,GEO),运用 GEO2R、维恩、Cyto-scape及GEPIA软件筛选出PDAC中可疑差异基因CENPF;基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)及基因组织表达数据库(The Genotype-Tissue Expression,GTEx),通过 NCBI 网络、GEPIA、Ualcan、Oncomine、TIMER软件及Kaplan-Meier在线生存分析工具,从信使核糖核酸(messenger RNA)层面分析其表达与免疫细胞浸润的关系及其可能的分子机制.同时收集2007～2021年间经福建医科大学附属第一医院病理科确诊的胰腺导管腺癌手术标本121例,从组织蛋白层面分析CENPF与PDAC临床病理特征及预后的关系.结果 CENPF基因在人类多种癌症中表达异常,在PDAC中,癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常胰腺组织(P＜0.05),并且与PDAC组织学分级(P＜0.05)、预后(P=0.0038)有关.免疫组化显示CENPF的表达与PDAC的神经侵犯(P=0.036)、TNM分期(P=0.041)、淋巴结转移(P=0.023)、分化程度(P=0.020)、总生存期有关(Log-rank=18.608,P=0.000016),CENPF 高表达(HR=2.654,95％CI=1.373～5.131,P=0.004)是PDAC患者预后差的独立危险因素.CENPF联合其他关键模块基因在PDAC中,主要富集于外泌体、细胞外基质等,并与丝氨酸内肽酶活性、金属肽链内切酶活性有关等.CENPF在胰腺导管腺癌中的作用通路主要与细胞周期、P53通路、泛素介导的蛋白水解等相关,并与P53、MDM2在PDAC中联合发挥作用.免疫浸润研究表明CENPF表达与CD4+T淋巴细胞浸润负相关、与树突细胞的浸润正相关(均P＜0.05).结论 CENPF可能参与PDAC疾病的进程,其高表达与PDAC预后不良相关,该研究有望为胰腺导管腺癌的防治提供更多科学基础.

目的:探讨苍附导痰丸治疗痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)的疗效及对外周血磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响.方法:纳入河北省沧州中西医结合医院2022年1月-2022年10月收治的86例痰湿型PCOS患者.根据随机数字表法,分为对照组(n=43,达英-35治疗)和实验组(n=43,达英-35联合苍附导痰丸治疗).观察两组中医证候积分、性激素指标、糖脂代谢指标、PI3K/AKT信号通路相关指标变化情况和不良反应发生率.结果:与对照组治疗后相比,实验组中医证候积分、甘油三酯(TG)、促卵泡生成素(FSH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、空腹胰岛素(FINS)水平和PI3K信使核糖核酸(mRNA)、AKT mRNA更低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)更高(P＜0.05).两组不良反应发生率对比未见差异(P＞0.05).结论:苍附导痰丸治疗痰湿型PCOS患者,可有效调节性激素、糖脂代谢指标,改善临床症状,可能与调节外周血PI3K/AKT信号通路有关.

背景与目的:腺泡细胞凋亡在急性胰腺炎(AP)炎症反应和病情进展中发挥重要作用,进一步了解腺泡细胞的凋亡机制及相关通路有助于为AP特异性治疗提供新思路.本研究探讨锌指蛋白基因ZMYM2转录环状核糖核酸(circZMYM2)、微小RNA-29a(miR-29a)与p53上调凋亡调节因子(PUMA)在AP中的表达及其之间的潜在关系.方法:将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J用雨蛙素诱导AP体外模型(AP组),或先通过pcDNA3.1-si-ZMYM2转染,敲低circZMYM2后再用雨蛙素诱导AP体外模型(si-circZMYM2组),以无处理的AR42J细胞作为对照组.3 h后分别用ELISA法检测细胞淀粉酶水平、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术与TUNEL法检测细胞凋亡情况、Western blot法检测细胞PUMA蛋白表达、qRT-PCR检测细胞circZMYM2与miR-29a表达.结果:与对照组比较,AP组与si-circZMYM2组淀粉酶水平均明显升高、细胞活力均明显降低、细胞凋亡率或凋亡细胞数均明显增加、PUMA蛋白表达水平均明显升高,但si-circZMYM2组以上指标的变化程度均明显低于AP组(均P<0.05).与对照组比较,circZMYM2表达水平在AP组明显升高,在si-circZMYM2组明显降低,而miR-29a表达水平在AP组明显降低,在si-circZMYM2组明显升高(均P<0.05).结论:circZMYM2在AP的腺泡细胞中表达升高,其可能通过与miR-29a内源性竞争作用,抑制miR-29a的表达,从而上调PUMA表达水平,促进腺泡细胞凋亡和AP进展.

目的 探讨摄食抑制因子-1(Nesfatin-1)、微小核糖核酸-155-5p(miR-155-5p)与2型糖尿病肾病的相关性.方法 选择2020年1月至2021年8月,本院收治的120例2型糖尿病肾病患者(观察组)、100例单纯2型糖尿病患者(无肾病对照组)和100例健康体检者(健康对照组)为研究对象.用酶联免疫吸附法、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)分别对Nesfatin-1、miR-155-5p进行检测.比较3组的Nesfatin-1、miR-155-5p差异,探析2项指标与2型糖尿病肾病的关系.结果 观察组Nesfatin-1、高密度脂蛋白胆固醇低于无肾病对照组、健康对照组,miR-155-5p、空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素抵抗、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、Cr高于无肾病对照组、健康对照组(P<0.05).Nesfatin-1、miR-155-5p与空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素抵抗、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、Cr有相关性(P<0.05).Nesfatin-1、miR-155-5p联合诊断2型糖尿病肾病的曲线下面积AUC(0.841,95％CI 0.711～0.971)高于单一指标(P<0.05).Nesfatin-1低表达、miR-155-5p高表达是糖尿病肾病的影响因素(P<0.05).结论 在2型糖尿病肾病中Nesfatin-1呈低表达,miR-155-5p呈高表达.Nesfatin-1、miR-155-5p与2型糖尿病肾病有关,若2型糖尿病患者的Nesfatin-1下降、miR-155-5p升高,反映受检者的肾病发生风险增加,肾功能可能出现损伤.

目的:探析重症急性胰腺炎微小核糖核酸-21-3p(miR-21-3p)、RUNT相关转录因子3(RUNX3)表达水平及对病情发展程度的预测价值。方法:选择2020年3月至2022年3月，什邡市人民医院收治的100例急性胰腺炎患者作为研究对象，按病情的不同，分为对照组(50例，轻症急性胰腺炎)和观察组(50例，重症急性胰腺炎)。用实时荧光定量(PCR)法进行miR-21-3p表达水平的检测，用酶联免疫分析法进行RUNX3表达水平的检测。比较两组患者的miR-21-3p、RUNX3表达水平差异，应用Logistic回归分析法探析miR-21-3p、RUNX3与重症急性胰腺炎病情恶化的关系，绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-21-3p、RUNX3在重症急性胰腺炎病情恶化预测诊断中的应用价值。结果:观察组的miR-21-3p检测值显著高于对照组，RUNX3检测值显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。存活者的miR-21-3p检测值低于死亡者，RUNX3检测值高于死亡者(P<0.05)；Logistic结果显示，miR-21-3p高表达是重症急性胰腺炎恶化(死亡)的危险因素，RUNX3高表达是重症急性胰腺炎恶化(死亡)的保护因素(P<0.05)。ROC曲线显示，miR-21-3p、RUNX3联合诊断预测重症急性胰腺炎恶化的AUC(0.835，95% CI 0.742~0.928)最大，灵敏度、特异度分别为83.33%、93.18%(P<0.05)。结论:miR-21-3p在重症急性胰腺炎病情恶化过程中呈高表达，RUNX3在重症急性胰腺炎病情恶化过程中呈低表达，两项指标联合诊断预测重症急性胰腺炎病情发展，可为患者的病情早期诊断提供一定作用。

[目的]探讨α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)/DNA酶Ⅰ(DNase Ⅰ)、β-防御素1(HBD-1)、铁蛋白(SF)在重症社区获得性肺炎(SCAP)患儿中的表达及其临床意义.[方法]选取2020年1月至2021年5月开封市儿童医院收治的98例SCAP患儿(观察组),根据肺炎严重指数(PSI)分为低危组(n=15)、中危组(n=52)、高危组(n=31),根据检测结果分为细菌性肺炎组(n=50)、支原体肺炎组(n=22)、病毒性肺炎组(n=26),同时选取同期于本院体检的62例健康儿童作为对照组.比较不同组间血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平,采用Spearman法分析α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF与疾病严重程度的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估上述指标对SCAP的诊断价值.[结果]观察组血清α1-AT/DNase Ⅰ、HBD-1、SF水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).单因素方差分析显示,不同疾病严重程度的SCAP患儿血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).中危组、高危组血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平高于低危组,且高危组高于中危组,差异有统计学意义(P＜0.05).支原体肺炎组、病毒性肺炎组α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平高于细菌性肺炎组(P＜0.05),支原体肺炎组、病毒性肺炎组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Spearman相关性分析显示,α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF 均与疾病严重程度呈正相关(rs=0.632、0.524、0.531,均 P＜0.01).ROC 曲线分析显示,α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度明显高于单项检测(P＜0.05).[结论]SCAP患儿血清中α1-AT/DNase Ⅰ、HBD-1、SF水平异常升高,且与病情程度有关,联合检测可提高SCAP诊断价值.

目的 采用高效分子排阻色谱(HPSEC)法测定涉药品不良反应(ADR)注射用曲克芦丁中多糖和蛋白类大分子的含量.方法 检测器为示差折光检测器,色谱柱为TSKgel G4000PWXL凝胶柱(300 mm × 7.8 mm,10 μm),流动相为纯化水,流速为0.5 mL/min,柱温为35℃,以不同相对分子质量右旋糖酐标准品为对照,对注射用曲克芦丁中多糖类大分子物质进行筛查;检测器为紫外检测器,色谱柱为 TSKgel G2000SWXL 凝胶柱(300 mm × 7.8 mm,10 μm),流动相为乙腈-水-三氟乙酸(45∶55∶0.05,V/V/V),流速为 0.8 mL/min,检测波长为214 nm,以生长抑素、胸腺肽α1、人胰岛素、核糖核酸酶A为对照,对注射用曲克芦丁中蛋白类大分子物质进行筛查.结果 涉ADR批次及正常批次注射用曲克芦丁中多糖类大分子物质的数据无明显差异;涉ADR批次中蛋白类大分子物质的含量高达正常批次的3倍,且制剂对应厂家的曲克芦丁原料药中蛋白类大分子物质的含量远高于同测第三方厂家曲克芦丁原料药的20倍.结论 该研究中注射用曲克芦丁发生ADR的原因为产品中蛋白类大分子物质的含量偏高.