目的:探讨重组人突触融合蛋白4(STX4)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞INS-1损伤影响。方法:胰岛β细胞INS-1分成Control组(空白对照)、LPS组(LPS处理)、LPS+NC组(转染阴性对照载体，LPS处理)、LPS+STX4组(转染pcDNA-STX4，LPS处理)，RT-qPCR和Western blot检测STX4 mRNA和蛋白质表达，流式细胞术检测凋亡，DCFHDA法检测活性氧簇(ROS)水平、黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平、比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平、钼酸铵比色法检测过氧化氢酶(CAT)水平、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平，ELISA法检测细胞分泌的白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和葡萄糖条件下胰岛素分泌水平，Western blot法检测Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质表达。用NF-κB信号通路激活剂处理上调STX4后的胰岛β细胞INS-1，给予LPS刺激，同样利用上述方法测定细胞凋亡、ROS、SOD、GSH-Px、CAT、MDA水平和分泌的IL-1β、TNF-α、胰岛素水平以及Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p65蛋白质水平。结果:与Control组比，LPS组胰岛β细胞中STX4 mRNA和蛋白质表达均减少，细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平均升高，SOD、GSH-Px、CAT水平均降低，细胞分泌的IL-1β、TNF-α水平均升高，细胞分泌的胰岛素水平降低，Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质表达水平也升高。NF-κB信号通路激活剂处理逆转上调STX4对LPS条件下胰岛β细胞凋亡、ROS、SOD、GSH-Px、CAT、MDA水平和分泌的IL-1β、TNF-α、胰岛素水平以及Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质水平影响。结论:上调STX4抑制LPS诱导的胰岛β细胞氧化损伤、细胞凋亡和炎症因子释放，机制与降低NF-κB信号通路激活水平有关。

目的:探讨组织激肽释放酶12(KLK12)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:收集2014年2月至2018年10月间中国科学技术大学附属第一医院胆胰外科行根治性手术切除且病理确诊的95例胰腺癌及其对应的癌旁正常组织，采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织KLK12的表达，分析其与胰腺癌临床病理特征的相关性。采用蛋白质免疫印迹法和荧光定量PCR法检测胰腺癌细胞株SW1990、PANC1及正常胰腺腺泡细胞株HPDE6-C7的KLK12蛋白和mRNA表达。通过质粒转染构建上调及下调KLK12表达的胰腺癌细胞株，以未转染的及转染携带阴性对照质粒的胰腺癌细胞作为空白对照组和阴性对照组，运用CCK8法和Transwell小室检测各组细胞增殖、侵袭及迁移能力。结果:胰腺癌组织KLK12的阳性表达率显著高于癌旁组织(70.5%比29.5%， P<0.001)，其表达与肿瘤分化程度低、TNM分期晚和淋巴结转移显著相关( P值均<0.05)。SW1990、PANC1细胞的KLK12蛋白及mRNA表达量均显著高于HPDE6-C7细胞(0.34±0.01、0.28±0.01比0.21±0.01，3.31±0.10、2.91±0.09比1.41±0.20， P值均<0.01)。下调KLKL12表达，培养72 h时，SW1990细胞增殖的 A450值(0.94±0.02比1.16±0.05)、穿膜细胞数[(373.7±14.8)个比(726.0±11.8)个/高倍视野]、迁移细胞数[(696.0±13.1)个比(841.3±15.4)个/高倍视野]均显著下降；PANC1细胞的 A450值(0.96±0.03比1.21±0.03)、穿膜细胞数[(556.3±13.6)个比(646.0±15.1)个/高倍视野]、迁移细胞数[(449.0±16.5)个比(595.7±8.6)个/高倍视野]也均显著下降。而上调KLK12表达，培养72 h时，SW1990细胞增殖的 A450值(1.32±0.03比1.11±0.03)、穿膜细胞数[(556.3±22.2)比(402.7±10.5)个/高倍视野]、迁移细胞数[(639.3±16.5)比(433.0±11.8)个/高倍视野]均显著增加；PANC1细胞增殖的 A450值(1.26±0.04比1.08±0.03)、穿膜细胞数[(571.0±17.4)个比(426.7±23.3)个/高倍视野]、迁移细胞数[(740.3±13.0)个比(442.7±10.3)个/高倍视野]均显著增加( P值均<0.05)。 结论:KLK12在胰腺癌组织呈高表达；KLK12在胰腺癌细胞株的表达上调可促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

目的:探讨25-羟基维生素D 3聚乳酸微球对妊娠期糖尿病大鼠心肌损伤的影响以及对核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3（NLRP3）/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）和消皮素D（GSDMD）信号轴的调节作用。 方法:采用W/O型乳化-溶剂挥发法制备25-羟基维生素D 3聚乳酸微球，扫描电镜下观察所得微球的形态，激光粒度分析仪检测微球的直径，并计算其累积释放率。妊娠大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素建立妊娠期糖尿病大鼠模型，随机分为模型组、对照组、微球组，每组10只，另取10只孕鼠作为假手术组。微球组大鼠沿左心室边缘取4点共注射微球悬液100 μl，对照组用同样方法注射等量空白微球，假手术组和模型组同样方法注射等量生理盐水。孕21 d取材进行后续实验。检测大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS），并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；全自动生化分析仪检测血清肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测心肌组织中白细胞介素（IL）-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛水平，蛋白印迹法检测NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达量。 结果:扫描电镜下微球呈比较规则的球形，大小较为一致，表面较为致密，无裂缝。微球直径为（13.48±2.04）μm，且粒径分布集中均一。微球前5天释放缓慢，然后累积释药率大幅度上升，第28天累积释药率达80%以上，后趋于稳定。与假手术组比较，模型组大鼠FBG、HOMA-IR、cTnI、CK-MB、IL-1β、TNF-α、丙二醛水平以及NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达均升高，FINS、SOD和GSH-Px活性均降低（均 P<0.05）；与模型组和对照组比较，微球组大鼠FBG、HOMA-IR、cTnI、CK-MB、IL-1β、TNF-α、丙二醛水平以及NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达均降低，FINS、SOD和GSH-Px活性均升高（均 P<0.05）。 结论:25-羟基维生素D 3聚乳酸微球可降低妊娠期糖尿病大鼠血糖水平以及胰岛素抵抗，降低心肌组织炎症反应和氧化应激损伤，减轻心肌损伤，可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴发挥作用。

目的:探讨他克莫司(TAC)诱导大鼠使用胰激肽原酶(PK)之后的肾脏损伤治疗效果，分析胰激肽原酶的药用机理。方法:选取48只雄性Sprague-Dawledy大鼠作为样本，随机将大鼠分为VH组、VH+PK组、TAC组、TAC+PK组，每组各12只。VH组大鼠进行皮下橄榄油1 mL·(kg·d) －1、腹腔生理盐水2 mL·(kg·d) －1注射；VH+PK组大鼠进行皮下橄榄油1 mL·(kg·d) －1和腹腔PK为7.2 U·(kg·d) －1注射；TAC组进行皮下TAC 1.5 mg·(kg·d) －1和腹腔生理盐水2 mL·(kg·d) －1注射；TAC+PK组进行皮下TAC 1.5 mg·(kg·d) －1和腹腔PK 7.2 U·(kg·d) －1注射，每组大鼠的给药周期为4周，在给药结束后采集大鼠尿液样本，检测尿蛋白水平(UPRO)；在大鼠颈部右侧静脉部位采集血液样本，检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、TAC水平；使用电子显微镜观察肾组织的超微结构改变，运用蛋白免疫印迹法对组织细胞内的自噬相关因子轻链蛋白3B(LC3B)、P62、Beclin的变化进行分析。 结果:与VH组比较，TAC组大鼠的饮水量增加，尿量提高，而体重明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。TAC+PK组大鼠的体重大于TAC组( P<0.05)。TAC组大鼠的Scr、BUN、UPRO大于VH组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。TAC+PK治疗组的Scr、BUN和UPRO均较TAC组明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。VH+PK组大鼠在电子显微镜下的各项变化和VH组无差异，而TAC组不仅出现了肾小管基膜增厚，还伴有肾小管萎缩，肾小管间质炎性细胞增多以及肾间质胶原纤维明显增生，同时出现了上皮细胞空泡变形，大量自噬体形成。相较于VH组，TAC组大鼠组织细胞中的LC3B-Ⅱ表达下降，而P62和Beclin表达显著增强(均 P<0.05)；TAC+PK组大鼠的LC3B-Ⅱ表达大于TAC组，而P62、Beclin表达低于TAC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:自噬可参与免疫抑制剂诱导肾损伤的发生发展，TAC诱导肾脏损伤大鼠在采用PK给药治疗后的肾脏损伤程度有所下降，其原因可能源于PK对肾脏细胞自噬功能的调节作用。

目的 基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导慢性炎症探讨西北燥证型糖尿病(外燥内湿证)的降糖机制研究.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(对照组)、2型糖尿病模型组(T2DM组)、西北燥证+T2DM大鼠组(西北燥证组)、单纯内湿型T2DM大鼠组(内湿型组),每组6只.采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-16(IL-16)、糖化血红蛋白(GHbA1c)、胰岛素(INS)含量的表达情况,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),开展葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验,生化检测肝功能和血脂四项,生化检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、肝/肌糖原表达情况,HE和PAS检测组织病理变化,实时荧光定量PCR检测干扰素调节因子5(IRF-5)、人核因子-κB亚基P65(NF-κB p65)的mRNA表达变化,蛋白质印迹法(Western blot)检测IRF-5、NF-κB p65、髓样分化初级应答基因88(MyD88)的蛋白表达.结果 研究发现西北燥证组的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平、葡萄糖耐量、胰岛素释放、HOMA-IR、TNF-α、IL-1β、IL-16、MDA、血脂、肝功异常水平较T2DM组显著升高(P<0.05);西北燥证组的SOD、GSH-PX、肝糖原、脏/体比较T2DM组显著降低(P<0.05);西北燥证组的IRF-5、NF-κB p65 mRNA表达水平,TLR4、MyD88、NF-κB p65的蛋白表达水平较T2DM组显著升高(P<0.05).结论 通过观察TLR4/MyD88/NF-κB通路介导的肝脏及脂肪组织慢性炎症的变化情况,发现此种炎症的变化可能与促进糖尿病及胰岛素抵抗的发生发展呈正相关性.

目的 检测多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者血清中人内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)和人组织激肽释放酶7(human kallikrein related petidase,KLK7)表达水平,比较PCOS患者与非PCOS患者血清中两者的表达差异,并分析两者与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)之间的相关性.方法 选取2021 年4 月至2022 年8 月就诊于山西医科大学第二医院且符合2003 年鹿特丹诊断标准的 18～35 岁PCOS患者94 例纳入PCOS组,将年龄相匹配的健康体检女性和(或)由于男方因素和(或)女方单纯因输卵管原因导致不孕的31 例患者纳入NC组.根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为IR组和NIR组,PCOS患者分为PCOS伴IR组(PCOS+IR组)和PCOS不伴IR组(PCOS+NIR组).比较各组间vaspin、KLK7 的表达水平,并分析两者与HOMA-IR之间的关系.结果 ① PCOS组中vaspin、KLK7、HOMA-IR、FINS水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05).② 与NIR组比较,IR组中FBG、PBG、FINS、HOMA-IR、vaspin、KLK7 水平升高,差异有统计学意义(P<0.05).③PCOS+IR组中FBG、PBG、FINS、HOMA-IR、vaspin、KLK7 显著高于PCOS+NIR组,差异有统计学意义(P<0.05).④ Vaspin与PBG、FINS、HOMA-IR、TG、LDL-C、KLK7 呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.05);KLK7 与LH、T、PBG、FINS、HOMA-IR、vaspin呈正相关,且与HDL-C呈负相关(P<0.05).⑤ 矫正其他变量之后行二元Logistic回归分析得出KLK7、LH是PCOS的独立危险因素(PKLK7=0.01、PLH=0.003).⑥ 通过ROC曲线分析,KLK7 和LH在诊断PCOS方面有一定的价值,二者联合具有更高的诊断价值.结论 PCOS患者血清中vaspin、KLK7 不同程度升高,且vaspin、KLK7 与HOMA-IR呈正相关,提示vaspin、KLK7 高表达参与了PCOS中IR发生发展;升高的vaspin与KLK7 具有相关性;KLK7 还可能具有预测PCOS的价值,联合LH预测价值更高.

组织激肽释放酶(tissue kallikrein-related peptidase,KLK)家族是丝氨酸蛋白酶家族中一种具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶性质的蛋白水解酶亚群,有15个家族蛋白,分别为KLK1～KLK15.近年来,越来越多的研究表明,KLK家族可通过切割病毒和细菌关键蛋白、激活多种宿主受体、调控激肽系统等方式参与机体的多种生理活动,影响着病毒、细菌和真菌中多种病原微生物感染的进程,作用机制复杂且广泛.本文通过对近年来KLK家族蛋白在微生物感染中的作用和机制进行综述,以更好地探究KLK在微生物感染中的重要作用,特别是为其在结核分枝杆菌感染中的研究提供思路,也为KLK家族蛋白作为抗结核治疗靶点提供理论基础.

短链脂肪酸(SCFA)作为肠道菌群的重要代谢产物,广泛参与机体免疫反应,以及糖、脂代谢调节等重要生理过程,并且作为中间介质影响2型糖尿病(T2DM)的发展.为更系统、全面地了解运动对肠道菌群SCFA的影响及其改善T2DM的可能机制,本文通过检索总结分析相关文献,就不同运动方式对T2DM机体肠道菌群或SCFA的影响效果,以及运动促进SCFA进而调节糖代谢的可能机制进行系统梳理与分析.结果发现:(1)运动可通过改变肠道菌群构成比,增加产SCFA菌群促进SCFA产生,其中涉及的运动干预呈现多元化,包括有氧运动、抗阻运动、有氧联合抗阻运动和高强度间歇运动等,证实了运动在辅助治疗T2DM方面具有潜在应用价值.(2)运动增进SCFA释放由此改善T2DM的机制可能涉及多条分子信号通路,SCFA能激活腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路抑制肝脏糖异生,另一方面,SCFA与G蛋白偶联受体(GPCR)(GPR41/GPR43)结合促进胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和肠道肽YY(PYY)释放,同时通过抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性增加胰岛素受体底物1(IRS1)表达,激活下游的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路,加速肌肉和脂肪对糖的摄取与利用.关于运动对产SCFA菌群与SCFA的具体影响效果,以及运动促进SCFA释放并以此调控糖代谢的作用机制有待后续研究进一步明确.

目的 探讨达立通颗粒联合米曲菌胰酶片治疗功能性消化不良的临床疗效.方法 选取 2021 年3 月—2023 年3月在荆州市中医医院收治的 82 例功能性消化不良患者,根据用药方案不同分为对照组和治疗组,每组各 41 例.对照组口服达立通颗粒,6 g/次,3 次/d;治疗组在对照组基础上口服米曲菌胰酶片,1 片/次,3 次/d.两组均经 14 d治疗.观察两组的临床疗效,比较临床症状改善时间、相关量表评分、胃肠功能指标、胃肠激素指标、血清细胞因子.结果 治疗后,治疗组的总有效率是 97.56%,远高于对照组的 80.49%(P＜0.05).治疗后,治疗组上腹痛、早饱感、恶心、腹胀等症状改善时间上均显著短于对照组(P＜0.05).治疗后,两组胃肠功能分级评定表(GSRS)评分、SID评分均较治疗前显著降低,而生存质量测定量表(WHOQOL-100)评分、NDI评分均显著升高(P＜0.05);且治疗后各量表评分均以治疗组改善更为显著(P＜0.05).治疗后,两组胃运动指数、收缩频率、收缩幅度均较同组治疗前显著提高(P＜0.05);且治疗后,治疗组胃肠功能指标改善优于对照组(P＜0.05).治疗后,两组血清C反应蛋白(CRP)、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、白细胞介素-6(IL-6)水平均较同组治疗前显著降低,而神经肽S受体 1(NPSR1)、降钙素基因相关肽(CGRP)显著升高(P＜0.05);治疗后,治疗组血清学指标水平改善优于对照组(P＜0.05).治疗后,两组胃动素(MTL)、P物质(SP)、胃泌素-17(G-17)、胃泌素(GAS)水平均较治疗前显著升高,而一氧化氮(NO)水平显著降低(P＜0.05);治疗后,治疗组胃肠激素指标改善优于对照组(P＜0.05).结论 米曲菌胰酶片联合达立通颗粒治疗功能性消化不良可有效改善临床症状,降低机体炎症反应,促进胃肠动力,促进患者生活质量提高,有良好的临床应用价值.

目的:探讨黄连-肉桂不同配比对慢性心力衰竭大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的干预机制.方法:将60只大鼠分为空白组、模型组、黄连组、肉桂组、黄连-肉桂组.心脏超声测量左室射血分数(LVEF)、左室内径缩短率(LVFS).酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清N端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平,判断造模成功与否.给药4周后,HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,ELISA检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)表达.Western blotting法检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达.结果:模型组大鼠心肌细胞广泛排列紊乱,细胞轮廓不清晰,间隙增大,可见部分细胞空泡变性.模型组大鼠NT-proBNP、ACTH、CORT、CRH表达高于空白组,LVEF、LVFS、GLUT4低于空白组(均P＜0.01).黄连组、肉桂组、黄连-肉桂组的NT-proBNP低于模型组(均P＜0.01).黄连-肉桂组的ACTH、CORT表达低于模型组,GLUT4蛋白表达高于模型组(均P＜0.01).结论:黄连-肉桂配伍可改善心衰大鼠症状,降低血清NT-proBNP水平,其保护心功能的机制可能与调控下丘脑-垂体-肾上腺轴及胰岛素抵抗相关,黄连-肉桂最佳配比为10∶1.