目的:使用新冠肺炎确诊病例血液样本对荧光免疫层析法、胶体金法和微量病毒中和抗体试验等血清学方法进行评价，比较3种试验方法检测结果的差异，为临床治疗和流行病学调查提供技术手段。方法:采用新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)IgG/IgM抗体联检试剂(荧光免疫层析法)和2019-nCoV抗体检测试剂盒(胶体金法)及由广东省疾病预防控制中心实验室分离的2019-nCoV病毒株建立的微量病毒中和抗体试验对临床确诊患者血液样本进行检测。结果:本研究收集广东省第二人民医院2019-nCoV临床确诊患者血液样本113份，患者年龄中位数为47.50(32.00，57.00)岁，性别比2.77∶1；患者微量病毒中和抗体试验最高滴度1∶1 024；以微量病毒中和抗体试验结果作为金标准时，胶体金法检测灵敏度高于免疫层析法(94.74% vs 82.46%)，两者 Kappa值分别为85.84%和75.24%，阴性和阳性预测值分别为94.44%、91.53%和83.87%、92.16%。 结论:在检测2019-nCoV的血清学方法中，以微量病毒中和抗体试验为金标准时，相比荧光免疫层析法，胶体金法灵敏度和 Kappa值更高，更适宜于2019-nCoV病例的快速检测。

侧流免疫层析技术（LFIA）是一种快速检测技术，是将抗原抗体反应从试管或者实验器皿中移动到试纸条上进行，利用试纸条的层析作用使待测溶液向指定方向移动进而完成整个抗原抗体特异性反应，通过肉眼观察试剂条特定位置的颜色变化即可作出定性判断。因其具有快速、简便、特异性强、经济、无需专业人员的优点，现已广泛应用于医学检测、食品质量监测、环境监测、农业和畜牧业等领域。目前，阻碍LFIA技术发展的一大重要瓶颈就是钩效应的影响。本文旨在归纳总结目前应对钩效应的方法、手段及最新研究进展，以期为研究者在设计试纸条、对适宜纳米颗粒的选择及实现LFIA定量检测提供有力的技术参考。

选择2018年3月至2020年5月在湖北医药学院附属东风医院手术治疗的251例甲状腺癌患者，按照是否在术中采用胶体金免疫层析法快速测定细针穿刺洗脱液中的甲状旁腺激素（PTH）分为实验组和对照组，结果表明，实验组与对照组甲状旁腺误切率分别为0和5.2%（ P=0.016）；251例患者术后血钙和PTH均低于术前（ P=0.000），实验组与对照组术后血钙和PTH差异均无统计学意义（均 P>0.05）；在甲状腺全切除术的患者中，实验组与对照组术后暂时性甲状旁腺功能减退发生率分别为13.0%和15.5%（ χ2=0.159， P=0.69），永久性甲状旁腺功能减退发生率分别为0和2.8%（ P=0.32）。在甲状腺癌术中采用胶体金免疫层析法快速测定细针穿刺洗脱液中的PTH可以更好地识别甲状旁腺，减少甲状旁腺误切，但仅仅依靠此技术尚不能完全避免术后甲状旁腺功能减退及低钙血症的发生。

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的基因分型和耐药性,并评估头孢他啶/阿维巴坦(CZA)与其他抗菌药物联合使用对CRKP治疗效果的影响,为临床提供更有效的治疗策略.方法 分析2023年10-12月成都市第三人民医院住院患者标本中分离的CRKP菌株.采用Atofms100全自动微生物质谱检测仪和MicroScan-96细菌鉴定及药敏分析仪对菌株进行鉴定和药敏分析,用胶体金免疫层析技术对菌株进行耐碳青霉烯酶基因分型.采用纸片扩散法检测CZA与氨曲南(ATM)、美罗培南(MEM)联合应用的药敏反应.结果 共分离出CRKP 210株,其中产丝氨酸碳青霉烯酶126株(占比60.0％),产金属β-内酰胺酶81株(占比38.6％).CRKP对多数β-内酰胺类和碳青霉烯类抗生素表现出高耐药率,而对多粘菌素B、替加环素和CZA表现出较高敏感性.携带不同耐药基因类型的CRKP在药物敏感性上有所分化.CZA与ATM、MEM的联合药敏试验显示,对于产金属β-内酰胺酶和产丝氨酸碳青霉烯酶CRKP菌株,CZA与ATM展现出良好的协同作用,协同率分别为100.0％(81/81)和99.2％(125/126);对于产丝氨酸碳青霉烯酶CRKP,CZA与MEM也显示出协同作用,协同率为99.2％(125/126).结论 CRKP分离率高,耐药性强.不同基因亚型的CRKP抗菌药物敏感性有所差异.CZA与ATM、MEM的联合使用为治疗不同基因分型CRKP感染提供了有效策略.建议在临床治疗中,根据CRKP的产酶类型选择合适的联合用药方案.

目的 探讨在脑脊液(cerebro-spinal fluid,CSF)样本中,隐球菌荚膜抗原胶体金免疫层析法、墨汁染色法、真菌培养法以及病原宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)技术诊断HIV感染合并隐球菌脑膜炎(HIV-cryptococcal meningitis,HIV-CM)疾病的价值.方法 收集并分析2020年12月—2022年12月武汉大学中南医院感染科收治的171例考虑中枢神经系统感染行腰椎穿刺进行隐球菌检测的HIV/AIDS住院患者的一般及临床资料,并比较4种检测方法对HIV-CM的检测阳性率、敏感度和特异度.结果 171例研究对象中最终诊断为HIV-CM的患者共35例.HIV-CM患者以神经系统受累,伴发热、头晕、头痛为主要表现.171例脑脊液样本中,隐球菌荚膜抗原胶体金免疫层析法检测阳性率为18.9％,墨汁染色法检测阳性率为15.4％,真菌培养法检测阳性率为10.7％,mNGS技术检测阳性率为23.3％.隐球菌荚膜抗原胶体金免疫层析法、墨汁染色法、真菌培养法、mNGS技术检测敏感度分别为97.0％、75.8％、52.9％和100％,特异度分别为100％、99.3％、100％和100％.4种检测方法脑脊液样本送检至报告的平均时间分别为0.5 d、0.5～1 d、5 d和2 d.10例HIV-CM患者mNGS检测结果显示同时有3种及以上病原菌多重感染的患者有7例.结论 脑脊液样本的墨汁染色检测可为早期筛查获得病原学诊断依据,真菌培养法是诊断金标准且培养菌落可用于后续药物敏感性试验,隐球菌抗原胶体金免疫层析法和mNGS技术的检测敏感度和特异度都高,报告周期短,且mNGS技术可用于HIV合并多重感染患者的早期病原学诊断.因此,建议尽量联合多方法同时检测,为HIV-CM的临床诊断提供更准确更快速的临床证据,为患者争取更大获益.

目的 以棘球蚴囊液纯化抗原特异性单克隆抗体为基础建立一种快速、简便诊断棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价.方法 纯化棘球蚴囊液抗原,并以此免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价.筛选基于棘球蚴囊液纯化抗原制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体,并将其吸附于交联垫;将另一筛选到的单克隆抗体划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析试条.用该试条检测手术确诊的细粒棘球蚴病(87例)、多房棘球蚴病(40例)、囊尾蚴病(25例)、日本血吸虫病(10例)、弓形虫病(5例)、并殖吸虫病(5例)、华支睾吸虫病(5例)患者血清,以及60例健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性.结果 以棘球蚴囊液纯化抗原为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了11株能高效分泌效价在1:25600～1:102400特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG1或IgG2a.筛选到的单克隆抗体F3B6作为标记抗体,单克隆抗体C4H6作为包被抗体制成免疫层析试条,用该试条检测127份棘球蚴病患者血清的敏感性为88.12％(112/127),其中试条检测囊型包虫病患者血清的敏感性为88.51％(77/87),检测泡型包虫病患者血清的敏感性为87.50％(35/40),试条法检测两型包虫病患者血清敏感性之间差异无统计学意义(χ2=0.03,P=0.86).与25份囊尾蚴病患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,60份健康者血清也均为阴性,总特异性为100.00％.结论 成功制备了棘球蚴囊液纯化抗原的单克隆抗体,以此单抗为基础研制出的快速诊断棘球蚴病胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高.

目的 探讨碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)感染患者及同病房患者与环境分离CRKP的同源性、耐药机制及传播特征.方法 收集中山市中医院2017-2022年全院CRKP菌株,从2020年1月开始对CRKP感染患者的同病房患者筛查直肠拭子,对CRKP感染患者周围环境采样,筛查CRKP;使用胶体金法检测碳青霉烯酶基因,运用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)进行同源性分析.结果 共收集CRKP菌株39株,其中患者菌株36株,筛查同病房患者直肠拭子61例,检出CRKP菌株2株,采集环境标本680份,1名CRKP患者的卫生间水槽下水口检出CRKP;39株CRKP中产KPC酶9株(23.08％),产NDM酶21株(53.85％),9株未检出常见的5种碳青霉烯酶;PFGE分析发现39株CRKP分为18个克隆型,6年内医院内发生过3次CRKP克隆传播.结论 加强CRKP感染患者房间水槽的消毒,可阻止CRKP通过水槽引起传播;医院内各时段流行的CRKP基因型可能不同,明确其类型对指导治疗决策有重要意义.医院内流行是CRKP检出率上升的原因,同源性分析结果可为确定主动筛查的目标患者提供依据.

目的:探讨胶体金免疫层析定性检测试剂质量控制技术关键要求,为生产企业、检验机构质量控制及评价提供参考,有效地促进该类体外诊断试剂质量水平的提高.方法:结合胶体金免疫层析定性检测试剂质量标准要求及分类管理,对该类试剂质量的关键性能要素进行剖析,提出相应建议,提高试剂质量.结果 与结论:质量控制与评价是贯穿产品全流程的核心要素,膜条宽度、液体移行速度、阴性符合率、阳性符合率、检出限、重复性是胶体金免疫层析定性检测试剂质量控制及评价的关键性能指标,对于试剂的质量至关重要.相关生产研发企业要合理设计性能要求,完善质量管理体系;检验机构要根据产品性能要点做好质量评价;监管部门要根据行业需要和监管需要,加快标准制修订工作,加强上市后监管;从生产、检验及监管各环节对这些关键性能指标进行控制,提高试剂的质量标准,从而满足临床和监管的需求.

目的:制备抗依托咪酯(ET)抗体,应用于胶体金方法学的ET快速检测试剂.方法:通过化学方法在ET分子苯环上引入氨基并连接上载体蛋白,合成ET人工抗原,经质谱和紫外光谱鉴定后,免疫Balb/C小鼠.采用杂交瘤技术得到高特异性ET杂交瘤细胞株.经Protein G过柱纯化,选择灵敏度合适的抗体应用于ET胶体金试剂上,通过药物交叉干扰实验及临床试验对其进行敏感性与特异性鉴定.结果:ET人工抗原合成成功,其免疫所得10F9细胞株抗体适用于ET胶体金免疫层析试剂.检定尿液和烟油ET最低检出限均为500 ng/mL,检测12种烟油添加物及48种常用药物未有交叉反应,临床试验得出其敏感性为100％,特异性为99.5％.结论:成功制备抗依托咪酯单克隆抗体(mAb)并应用于胶体金免疫层析试剂上.

目的 为实现快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2),干预和防止病毒的传播,研制一种基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条.方法 通过设计基于ORF1ab和N基因靶序列内的正反两个依赖原间隔邻近基序(PAM)位点crRNAs,将恒温扩增技术与CRISPR-Cas12a检测相结合,并结合侧向层析试纸条技术,实现对SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因同时扩增与双重CRISPR的可视化检测.结果 检测试纸条可在37 ℃条件下20 min内取得结果,具有较好的灵敏度、特异度及热稳定性.对SARS-CoV-2假病毒的检测灵敏度为250 copy/mL,检测16种其他呼吸道病原体均无交叉反应,在37 ℃条件下存放8 d仍然具有较好检测效果.临床研究显示,检测SARS-CoV-2总符合率为95.00％(57/60).结论 基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条提高检测效率和准确度的同时降低了成本,可用于SARS-CoV-2的现场快速检测.