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具有促血管化能力的酸化丝蛋白海绵敷料的细胞相容性及该敷料对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响
编辑人员丨1周前
目的:分析酸化丝蛋白海绵敷料和甲醇化丝蛋白海绵敷料在促进创面愈合方面的机制。方法:采用实验研究方法。采用改良冻干法制备具有促血管化能力的酸化丝蛋白海绵敷料和不具备促血管化能力的甲醇化丝蛋白海绵敷料,行大体观察、扫描电镜观察内部形貌,X线衍射仪(XRD)、红外光谱仪观察二级结构,拉力机测定压缩模量。于2只3周龄雄性SD大鼠分离培养骨髓间充质干细胞(BMSC)并接种在上述2种丝蛋白海绵敷料上,培养1、6 d激光扫描共聚焦显微镜下计数细胞。将12只8周龄雄性SD大鼠每只造成4个全层皮肤缺损创面,分为甲醇化丝蛋白组(24个创面)和酸化丝蛋白组(24个创面),并应用对应丝蛋白海绵敷料覆盖。术后3、7、10、14 d,行大体观察并记录剩余创面面积。术后3、7、14 d,收集创面及创缘组织行苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察新生组织生长及胶原沉积情况,CD34免疫组织化学染色观察血管化情况。动物实验每组各指标各时间点样本数为6。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、独立样本 t检验、Bonferroni校正。 结果:甲醇化丝蛋白海绵敷料、酸化丝蛋白海绵敷料具有相同的成分、类似的多孔结构,孔径为300~500 μm。XRD显示,甲醇化丝蛋白海绵敷料表现出显著的结晶峰,酸化丝蛋白海绵敷料则主要由非晶结构组成。红外光谱仪显示,酸化丝蛋白海绵敷料在1 650 cm -1处出现强吸收峰,甲醇化丝蛋白海绵敷料则在1 630 cm -1处表现出强吸收峰。甲醇化丝蛋白海绵敷料的压缩模量为(23.8±1.3)kPa,明显高于酸化丝蛋白海绵敷料的(6.1±0.9)kPa, t=19.550, P<0.01。培养1 d,BMSC成功黏附在2种丝蛋白海绵敷料上,细胞未铺展开。培养6 d,BMSC铺展在2种丝蛋白海绵敷料上,其中酸化丝蛋白海绵敷料上细胞数量显著增多。术后3 d,2组创面无明显收缩;术后7 d,酸化丝蛋白组创面面积较甲醇化丝蛋白组明显缩小,创缘有新生上皮生长;术后14 d,酸化丝蛋白组创面已经基本愈合,甲醇化丝蛋白组创面干燥、收缩明显。与甲醇化丝蛋白组比较,酸化丝蛋白组术后3、7、10、14 d剩余创面面积明显缩小, t=7.782、10.620、3.707、6.830, P<0.05或 P<0.01。HE染色、Masson染色、CD34免疫组织化学染色显示:术后3 d,酸化丝蛋白组创面新生组织长入丝蛋白海绵敷料多于甲醇化丝蛋白组,前组分泌少量胶原蛋白,后组未见胶原蛋白形成,前组向敷料内游走的血管内皮细胞数量多于后组;术后7 d,酸化丝蛋白组创面新生组织覆盖敷料孔壁面积大于甲醇化丝蛋白组,前组胶原蛋白多于后组且分布均匀,前组血管数量多于术后3 d,后组新生血管散在分布;术后14 d,酸化丝蛋白组新生组织与正常皮肤组织结构相似且形成一定厚度,甲醇化丝蛋白组新生组织已基本长入敷料内,前组胶原沉积丰富,后组胶原散在分布,前组血管分布均匀且密度明显高于后组[分别为(55.7±6.0)、(34.1±1.0)个/mm 2, t=9.042, P<0.01]。 结论:具有促血管化能力的酸化丝蛋白海绵敷料细胞相容性好,可实现创面部位血管网络的快速形成,提供较为充足血供加快新生组织长入速度、胶原沉积,从而促进创面愈合、改善愈合质量,效果优于甲醇化丝蛋白海绵敷料。
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编辑人员丨1周前
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自发性脑出血动物模型选择及临床前药物试验指南(2024年版)
编辑人员丨3周前
自发性脑出血(spontaneous intracerebral hemorrhage,sICH)是最常见和致死性最高的卒中类型,其特征是脑实质的自发性出血,目前尚无有效的防治方法.现有的sICH动物模型可以概括为三大类:(1)诱导性脑出血模型,主要有自体血注入、胶原酶注射、微气球充盈、高血糖诱导的sICH血肿扩大模型;(2)自发性高血压脑出血模型,主要有易卒中性自发性高血压大鼠和易卒中性肾血管性高血压大鼠模型;(3)基因修饰模型,主要有高血压脑出血转基因模型、脑淀粉样血管病转基因模型、脑动静脉畸形病变相关基因修饰模型、脑海绵状血管畸形相关基因修饰模型及胶原蛋白相关基因修饰模型.这些模型不仅帮助我们了解sICH的发病机制、探索预防或治疗的方法,也可用于临床前药物试验,促进sICH新药研发工作.本指南系统总结了 sICH的发病机制,详细介绍了不同种属建模动物的优劣性、不同sICH动物模型的建模原理和方法、建模技术细节、模拟的病理生理机制及其临床相关性以及sICH动物模型神经行为评价技术,并比较了各种sICH模型的优缺点及其适用的研究范围,最后重点概括了sICH相关的临床前药物试验设计要点.
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编辑人员丨3周前
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胶原蛋白塞及胶质银止血明胶海绵在预防下颌阻生牙拔除后并发症中的效果分析
编辑人员丨3周前
目的:比较胶原蛋白塞及胶质银止血明胶海绵在预防下颌阻生牙拔除后短期并发症中的临床效果.方法:选择双侧下颌第三磨牙阻生分类一致且均需要拔除的22 例病人作为研究对象,采用分口设计,每位病人的左右下颌第三磨牙随机分为观察组和对照组.观察组拔牙创内填塞胶原蛋白塞,对照组拔牙创内填塞胶质银止血明胶海绵.比较 2 组术后 30 min出血情况,术后第1、3 天疼痛程度,术后第7 天张口受限及干槽症发生情况.结果:观察组术后30 min出血率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).观察组术后第1、3 天疼痛VAS评分均低于对照组(P<0.05);2 组术后第3 天疼痛VAS评分均明显低于术后第1 天(P<0.01).观察组术后第7 天张口受限发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).2 组均无干槽症发生.结论:胶原蛋白塞预防下颌阻生牙拔除后短期并发症的效果较好,值得推广.
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编辑人员丨3周前
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超声骨刀联合胶原蛋白海绵在下颌低位阻生智齿微创拔除术中的应用效果
编辑人员丨1个月前
[目的]探讨超声骨刀联合胶原蛋白海绵在下颌低位阻生智齿微创拔除术中的应用效果.[方法]选取2020年1月至2022年10月在本院口腔科拔牙门诊就诊的210例下颌低位阻生智齿患者为研究对象,按治疗方法不同分为A组(采用涡轮钻拔牙)、B组(采用超声骨刀拔牙)和C组(采用超声骨刀联合胶原蛋白海绵拔牙),每组70例.比较三组患者拔牙术后30 min拔牙窝出血量、术后3 d视觉模拟评分法(VAS)评分、干槽症和下唇麻木发生情况.[结果]C组拔牙术后30 min拔牙窝出血率为11.43%(8/70),显著低于A组的37.14%(26/70)、B组的18.57%(13/70),差异有统计学意义(x2=23.342、6.389,P<0.05);B组拔牙术后30 min拔牙窝出血率显著低于A组,差异有统计学意义(x2=6.667,P<0.05).C组患者术后72 h的VAS评分显著低于A组和B组;B组术后72 h的VAS评分显著低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);三组患者干槽症和下唇麻木的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]相对于单纯采用涡轮钻法或超声骨刀拔牙的方法,对下颌低位阻生智齿患者采用超声骨刀联合胶原蛋白海绵微创拔牙,虽不能减少术后干槽症和下唇麻木等并发症的发生率,但可以减少拔牙术后出血量,减轻术后疼痛,值得临床推广应用.
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编辑人员丨1个月前
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促红细胞生成素对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用研究
编辑人员丨2024/7/27
目的:探究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用.方法:分离并鉴定人牙髓细胞(Dental pulp cells,DPCs),将DPCs分为对照(control)组、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)组、TNF-α+EPO组;使用CCK-8法、Transwell法、碱性磷酸酶染色和茜素红染色法检测细胞增殖、迁移、成骨分化能力.将30只大鼠随机分为磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffered saline,PBS)组、氢氧化钙[Ca(OH)2]组和EPO组,对大鼠上颌第一磨牙进行牙髓暴露,分别以含PBS、Ca(OH)2和EPO的胶原蛋白海绵盖髓;术后1个月处死大鼠,micro-CT和苏木精-伊红染色观察修复性牙本质形成;免疫组化染色和Western blot检测牙本质基质蛋白-1(Dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)、Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,Runx2)、Osterix(Osx)水平.结果:与control组相比,TNF-α组DPCs增殖、迁移、成骨分化能力降低(P<0.05);与TNF-α组相比,TNF-α+EPO组DPCs增殖、迁移、成骨分化能力提高(P<0.05).与PBS组、Ca(OH)2组相比,EPO组露髓处形成连续完整的钙化桥及大量修复性牙本质,DMP-1、DSPP、Runx2、Osx水平升高(P<0.05).结论:EPO通过提高DMP-1、DSPP、Runx2、Osx水平促进牙髓损伤大鼠修复性牙本质形成.
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编辑人员丨2024/7/27
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复杂胸壁重建策略
编辑人员丨2024/7/13
[内容简介]开胸手术、肿瘤切除、外伤等造成的胸壁创面,常因运动、感染等因素难以愈合.这类创面范围大、层次深、渗血多、创伤重,又多伴有心肺功能不全、菌血症、败血症等严重并发症,因而一旦形成,就会成为巨大的临床挑战.现结合临床实例,介绍针对这些复杂情况进行胸壁重建的应对策略,以及自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)凝胶新技术与肌皮瓣转移等方法的整合应用,以期为同行提供借鉴.针对胸壁溃疡、胸骨后窦道患者,采用自体PRP凝胶注射结合胶原蛋白海绵覆盖及负压封闭的新疗法,操作简单且效果较好;针对高龄乳腺癌乳房摘除后胸壁慢性创面患者,根据患者对美学要求不高的个体情况,采用对侧乳房皮瓣转移治疗,该疗法最大限度地减少了患者痛苦,而又避免了应用其他肌皮瓣带来的损伤和功能障碍;针对乳腺癌术后放疗造成胸壁组织破溃、多根肋骨坏死的患者,采用背阔肌肌皮瓣结合骨水泥桥修复的疗法,骨水泥桥修复满足了胸廓骨性结构支撑的需求,而背阔肌肌皮瓣就近取材,不仅成活率高,也更符合审美需求;针对更为复杂的先心病术后胸壁创口 Ⅱ期手术修复后仍未愈合,且伴重度感染和人工血管裸露,又存在全身脓毒血症、真菌性败血症、肺部感染、纵膈感染、呼吸衰竭、肝功能不全等合并症的患者,在充分全身治疗和局部充分清创基础上,采用自体PRP凝胶与腹直肌肌皮瓣转移联合治疗的策略,该疗法成功地实现了胸壁结构和功能重建,挽救了患者生命.胸壁难愈性创面治疗具有复杂性和挑战性,充分考虑个性化因素并整合PRP凝胶等新技术、新方法是制定胸壁重建策略的必要考量.
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编辑人员丨2024/7/13
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地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化及其勃起功能的影响
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化及其勃起功能的影响.方法 将 60 只勃起功能正常的雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西地拉非组(5 mg·kg-1)及地龙蛋白低、中、高剂量组(45、90、180 mg·kg-1),每组 10 只.采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg·kg-1)结合高脂饲料喂养建立糖尿病大鼠模型;8 周后,颈部注射阿朴吗啡(APO,100 μg·kg-1),制备DMED大鼠模型.造模成功后,按剂量灌胃给药,每日 1 次,连续 4 周.测定各组大鼠造模前、造模第 3 天、给药 4 周后的血糖水平及体质量.采用多导生理记录仪测定大鼠阴茎海绵体内压(ICP)、颈动脉内压(MAP),计算ICP/MAP比值;免疫组织化学法检测阴茎海绵体中收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)和合成型标志物Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、骨桥蛋白(OPN)表达情况;RT-PCR法检测阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC、CollagenⅠmRNA表达水平;Western Blot法检测阴茎海绵体中α-SMA、肌间线蛋白(Desmin)、CollagenⅠ、OPN蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠在造模第 3 天和给药 4 周后的血糖值均显著升高(P<0.01),给药 4 周后的体质量显著降低(P<0.01);ICP及ICP/MAP比值显著降低(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC、Desmin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Collagen Ⅰ、OPN蛋白表达水平显著升高(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Collagen Ⅰ mRNA表达水平显著升高(P<0.01).与模型组比较,给药组大鼠的血糖值及体质量均无明显变化(P>0.05);ICP 及 ICP/MAP 比值均显著升高(P<0.01);阴茎海绵体中 α-SMA、SMMHC、Desmin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Collagen Ⅰ、OPN蛋白表达水平显著降低(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC mRNA 表达水平显著升高(P<0.01),Collagen Ⅰ mRNA 表达水平显著降低(P<0.01).结论 地龙蛋白能够改善DMED大鼠勃起功能,其机制可能与通过抑制CCSMC由"收缩型"向"合成型(增殖型)"转化有关.
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编辑人员丨2024/4/27
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重组人骨形态发生蛋白-2用于骨壁缺损拔牙位点保存的效果
编辑人员丨2024/4/13
目的:评价重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant bone morphogenetic proteinrh-2,rhBMP-2)用于骨壁缺损拔牙位点保存的临床效果.方法:2019 年 2 月~2023 年 1 月将符合条件的 142 例患者随机分组,A 组使用rhBMP-2+胶原蛋白海绵填充拔牙窝,B组使用胶原蛋白海绵,C组不使用移植物.于拔牙后 18 周、24 周开展种植手术,并编为 A1、A2;B1、B2;C1、C2 组,种植术中发现有牙槽嵴顶骨缺损的病例测量牙槽嵴缺损的最大近远中径(L)、颊舌径(W)及深度(H),计算体积(V)值(V=L×W×H);无牙槽骨顶骨缺损的病例取种植窝骨块进行组织学分析.结果:A1、A2 组牙槽嵴顶骨缺损的发生频率分别为:0.32、0.14;B1、B2 组分别为:0.75、0.43;C1、C2 组分别为:0.72、0.37.A1 B1 组间、A2 B2 组间、A1 C1 组间及 A2 C2 组间 V 值差异有统计学意义(P<0.05).A1 B1 组间及 A1 C1 组间新生骨占比差异有统计学意义(P<0.05).结论:rhBMP-2 用于骨壁缺损的拔牙位点保存可缩短成骨时间(18 周),减少不良愈合的发生,为后期种植手术的开展创造更有利的骨条件.
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编辑人员丨2024/4/13
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干细胞工程化双面异性静电纺丝膜促进硬脊膜修复的体外实验
编辑人员丨2024/1/6
背景:目前临床上采用自体组织或明胶海绵等材料对硬脊膜进行修补,但都存在不同程度的缺陷,因此亟需一种可以促进硬脊膜修复的生物材料.目的:利用定向静电纺丝及胶原自组装技术构建双面异性静电纺丝膜,并将其负载骨髓间充质干细胞构建人工硬脊膜,探讨该人工硬脊膜的各项理化性能以及生物特性.方法:采用静电纺丝技术及胶原自组装技术制备有序聚乳酸静电纺丝纤维的双面(一面为胶原蛋白,另一面为聚乳酸)异性静电纺丝膜(胶原组)、无序的聚乳酸静电纺丝膜(无序纤维组)、有序定向的聚乳酸静电纺丝膜(有序纤维组),通过扫描电镜、力学拉伸、水接触角测试、降解实验等来表征静电纺丝膜的理化性能.将胶原组(在胶原蛋白面接种骨髓间充质干细胞,即得到干细胞工程化静电纺丝膜)、无序纤维组、有序纤维组静电纺丝膜分别与骨髓间充质干细胞共培养,采用CCK-8法和活/死染色评估静电纺丝膜的生物相容性,整合素β1免疫荧光染色评估静电纺丝膜的黏附特性.将干细胞工程化静电纺丝膜及胶原组静电纺丝膜分别与骨髓巨噬细胞共培养,通过诱导型一氧化氮合酶(M1型)、CD206(M2型)免疫荧光染色及qRT-PCR检测炎症相关基因的表达来评估免疫调控性能.结果与结论:①定向静电纺丝纤维膜可模拟天然硬脊膜的纵向排列结构,胶原蛋白加入后,纤维膜的亲水性提高约2倍,力学性能提升了1.2倍;②与骨髓间充质干细胞共培养时,CCK-8和活/死染色显示,胶原组静电纺丝膜的细胞生物活性明显高于无序纤维组、有序纤维组;免疫荧光染色显示,胶原组整合素β1表达约为无序纤维组、有序纤维组的2.6倍,且细胞铺展形态良好;③与骨髓巨噬细胞共培养时,免疫荧光染色显示,干细胞工程化静电纺丝膜组M1型巨噬细胞荧光强度低于胶原组(P<0.01),M2型巨噬细胞荧光强度高于胶原组(P<0.01);qRT-PCR检测显示,干细胞工程化静电纺丝膜组促炎性基因肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β mRNA表达低于胶原组(P<0.001),抑炎性基因白细胞介素10和转化生长因子β mRNA表达高于胶原组(P<0.001);④结果表明,干细胞工程化的两面异性人工硬脊膜可模拟正常硬脊膜的定向结构,内表面利于细胞生长黏附,外表面避免组织粘连,同时通过间充质干细胞旁分泌组分促进巨噬细胞向M2亚型极化,调控局部的炎症微环境.
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编辑人员丨2024/1/6
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不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后附着龈的厚度和组织学变化
编辑人员丨2024/1/6
背景:上皮下结缔组织移植被认为是软组织增量术的金标准,然而,自体移植需要开辟第二术区,延长手术时间,增加患者的疼痛感,这也使得软组织替代物成为研究热点.目的:比较不同软组织替代物在比格犬尖牙唇侧区域移植后移植区附着龈厚度和组织学变化.方法:在3只比格犬尖牙唇侧附着龈区域,分别用双层同种异体脱细胞真皮基质膜(allograft acellular dermal matrix,AADM)、牛源性脱细胞真皮基质(bovine acellular dermal matrix,BADM)联合浓缩生长因子膜以及BADM联合胶原蛋白海绵进行附着龈增厚.分别在术前和术后1,2,3,4个月测量附着龈厚度,术后4个月进行组织学观察.结果与结论:①术后第1-4个月,双层AADM组附着龈厚度及附着龈厚度增量均值高于其他2组(均P<0.05);②术后1个月3组附着龈厚度显著增加,而后呈下降趋势;术后3个月,BADM联合胶原蛋白海绵组与BADM联合浓缩生长因子组移植区附着龈厚度变化较术前差异无显著性意义(P>0.05);术后4个月,双层AADM组附着龈厚度均值较术前仍显著增加(P<0.05);第1-4个月双层AADM组附着龈厚度值最高,其次为BADM联合胶原蛋白海绵组,BADM联合浓缩生长因子组最低;③双层AADM组真皮基质与宿主牙龈组织良好的结合在一起,并可见新生纤维结缔组织和成纤维细胞长入基质内,另外两组移植物已经完全吸收,增量区域改建成与周围宿主组织一致的结构;④结果说明,AADM在牙龈增厚方面优于BADM联合浓缩生长因子膜和BADM联合胶原蛋白海绵.
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编辑人员丨2024/1/6
