目的:通过 99Tc m-联肼尼克酰胺-3聚乙二醇-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽二聚体(3PRGD 2)显像在体观察类风湿关节炎(RA)大鼠蒙药森登-4汤治疗前后放射性分布变化，并探究其治疗机制。 方法:取200只雌性SD大鼠(6~7周龄)，分为胶原诱导性关节炎(CIA)组(176只)和空白对照组(24只)。将CIA模型大鼠通过简单随机抽样法分为森登-4汤治疗组(24只)、依那西普治疗组(24只)和阴性对照组(24只)。造模及治疗前后均行 99Tc m-3PRGD 2显像，分析各组病变关节与纵隔的靶/非靶(T/NT)放射性比值，分析相应血清学、病理及免疫组织化学指标。采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验分析数据。相关性分析采用Pearson或Spearman相关分析。 结果:CIA组成功造模95只，成模率为54%(95/176)。治疗后，阴性对照组、森登-4汤治疗组、依那西普治疗组T/NT比值差异有统计学意义(0.766±0.144、0.260±0.094和0.238±0.099； F＝163.00， P<0.001)，而2个药物治疗组间差异无统计学意义( P>0.05)。药物治疗后，血清血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、整合素α vβ 3表达水平均显著低于阴性对照组( F值：49.43~92.36，均 P<0.001)；关节病理滑膜细胞增生指数也明显低于阴性对照组( H＝34.25， P<0.001)；滑膜组织中VEGF、TNF-α、整合素α vβ 3、CD31、CD34表达水平也显著低于阴性对照组( H值：13.51~26.84，均 P<0.001)，而2组药物治疗组间上述指标差异均无统计学意义(均 P>0.05)。治疗后，森登-4汤治疗组( r值：0.56~0.59， rs值：0.49~0.69)、依那西普治疗组( r值：0.50~0.55， rs值：0.46~0.70)和阴性对照组( r值：0.55~0.80， rs值：0.58~0.86)的T/NT比值与上述各指标均呈正相关( P<0.001或 P<0.05)。 结论:通过 99Tc m-3PRGD 2显像与分子病理验证，蒙药森登-4汤可通过下调VEGF等血管因子抑制新生血管形成，延缓病情进展、改善临床症状。

目的:探讨 99Tc m－联肼尼克酰胺－3聚乙二醇－精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸环肽二聚体(3PRGD 2)对类风湿关节炎(RA)早期诊断的可行性。 方法:取60只雌性Wistar大鼠，分为空白对照组10只(注射生理盐水0.3 ml/只)、胶原诱导性关节炎(CIA)组50只(注射Ⅱ型胶原乳剂0.3 ml/只)。2组均在造模前及造模后25和45 d行 99Tc m－3PRGD 2平面显像，测量并分析造模成功的CIA组大鼠在造模前后病变关节与纵隔的靶/非靶比值(T/NT)变化情况，并与同期空白对照组进行比较；另行病理学检测。采用重复测量方差分析和两独立样本 t检验分析数据。 结果:CIA组32只大鼠造模成功，显像示病变关节有明显的滑膜炎及滑膜增厚特征，并有血管翳形成。32只CIA组大鼠造模前及造模后25和45 d病变关节部位T/NT分别为0.158±0.023、0.402±0.144和0.705±0.163( F＝286.924, P<0.01)。造模后25和45 d时CIA组大鼠病变关节部位T/NT与空白对照组相应结果(0.160±0.028和0.158±0.032)比较差异均有统计学意义( t值：－10.484和－20.917，均 P<0.01)。免疫组织化学检查示CIA组大鼠病变关节滑膜组织血管内皮生长因子、α vβ 3、肿瘤坏死因子－α呈阳性表达。 结论:99Tc m－3PRGD 2对大鼠RA模型关节滑膜新生血管显像的灵敏度高，有望用于RA的早期诊断。

探讨二妙散通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)-Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)途径改善类风湿关节炎大鼠炎症的免疫学机制.56只雌性Wistar大鼠随机分为正常(HG)组、胶原诱导性关节炎模型(CM)组、迷走神经切断(VA)组、假手术(SH)组、二妙散治疗模型(EM)组、二妙散治疗迷走神经切断(EV)组、二妙散治疗假手术(ES)组,每组8只.除HG组外,其他组均构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功后进行颈部单侧迷走神经切断术及假手术(仅分离迷走神经),术后7 d开始给药治疗,持续治疗35 d.记录大鼠体质量及关节情况,观察大鼠脾脏病理学变化,ELISA检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,qRT-PCR、Western blot和免疫组化检测脾脏中α7nAchR-JAK2/STAT3通路核心基因mRNA及蛋白表达.结果显示,CM组对比HG组、VA组对比CM组和SH组,大鼠体质量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),关节炎评分显著升高(P＜0.05,P＜0.01),踝关节明显肿胀伴畸形,脾脏淋巴小结显著增大,血清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著增加(P＜0.05,P＜0.01),脾脏中JAK2、STAT3 mRNA水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01),磷酸化 JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化 STAT3(p-STAT3)/STAT3 水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3细胞数增加(P＜0.05,P＜0.01).EM组对比CM组、ES组对比SH组,大鼠体质量显著升高(P＜0.01),关节炎评分显著下降(P＜0.05,P＜0.01),踝关节肿胀度明显减轻,脾脏淋巴小结体积减小,炎症减轻,血清中IL-6、IL-1β、TNF-α 含量显著下降(P＜0.05,P＜0.01),脾脏 JAK2、STAT3 mRNA 表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 细胞数量显著减少(P＜0.05,P＜0.01),α7nAChR mRNA及蛋白表达显著上升(P＜0.01).EV组对比VA组,大鼠体质量上升及关节炎评分无明显差异,脾脏淋巴小结数量减少不显著,体积仍较大,炎症无明显改善,血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量表达不显著,脾脏中α7nAChR、JAK2、STAT3 mRNA无明显差异,脾脏中p-JAK2/JAK2、α7nAChR蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),p-STAT3/STAT3蛋白表达不显著,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3细胞数量无明显差异.以上实验结果显示,单侧迷走神经切断促进磷酸化的JAK2和STAT3表达增加,加剧炎症状态,二妙散通过迷走神经激活α7nAChR介导的JAK2/STAT3途径改善CIA大鼠炎症,提示α7nAchR-JAK2/STAT3途径可能是治疗类风湿关节炎的潜在靶标.

为研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将 50 只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量 0.5、1、2 倍组(含雷公藤甲素3.75、7.5、15 μg·kg-1·d-1),每组 10 只,首次免疫后当日开始灌胃给药,每天 1 次,给药 42 d.分别于第 21、42 天取材,计算子宫和卵巢脏器指数;显微镜下观察子宫和卵巢组织病理形态学变化;ELISA法检测卵巢组织匀浆中雌二醇(estradiol,E2)及细胞色素P450A1(aromatase,CYP19A1)水平;免疫组织化学法检测卵巢组织中通路相关蛋白转化生长因子 β3(transforming growth factor β3,TGFβ3)、细胞信号传导分子 3(mothers against decapentaplegic homolog 3,Smad3)及肾上腺核受体 1(steroido-genic factor-1,SF-1)表达水平.并在体外建立中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞系,经TP给药(30、60、120 nmol·L-1)24 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TGFβ3、Smad3 及SF-1蛋白表达,并通过免疫荧光检测SF-1因子入核情况.结果表明,与模型组比较,TP各给药组在给药21、42 d子宫腺体数、总卵泡数、成熟卵泡数、黄体数均有降低趋势,但差异并无统计学意义,仅 2 倍TP在给药 42 d时可显著增加闭锁卵泡数;TP 3.75 μg·kg-1·d-1在给药 21 d 即可显著降低 E2 水平,但对雌激素合成限速酶 CYP19A1 无显著影响,但可显著降低卵巢组织TGFβ3、Smad3 因子表达,且无论给药 21 d还是 42 d,TP 7.5、15 μg·kg-1·d-1均显著降低SF-1 因子表达.TP可显著促进体外卵巢细胞凋亡,给药 24 h后,凋亡主要集中在凋亡晚期;且 60 nmol·L-1 TP即可显著降低TGFβ3、Smad3 及SF-1 蛋白表达,并呈剂量依赖性.综上所述,2 倍以下临床等效剂量的TP灌胃 21、42 d并未引起CIA大鼠子宫、卵巢组织明显的生殖损伤,仅在 2 倍临床等效剂量给药 42 d时,闭锁卵泡数发生显著变化.TP通过抑制TGFβ3/Smad3/SF-1 通路表达发挥体内生殖靶器官及体外卵巢细胞生殖毒性作用.

目的 探讨青藤碱配伍芍药苷抗胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)药效作用及其机制.方法 将 60只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)、青藤碱组(50 mg/kg)、芍药苷组(120 mg/kg)和青藤碱(50 mg/kg)配伍芍药苷(120 mg/kg)组(青芍配伍组),每组 10只.除正常组外,其余大鼠尾根部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原/非完全弗氏佐剂乳剂建立CIA模型.正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,用药组灌胃相应药物,连续 30 d.造模后,每 3天检测大鼠后足肿胀容积、关节炎指数评分及体质量;治疗结束后,CT检测大鼠关节骨破坏情况;HE染色观察踝关节病理变化;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot法检测关节骨组织基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达水平.结果 与正常组相比,模型组大鼠足肿胀容积、关节炎指数评分明显增加(P<0.01),体质量降低(P<0.01),足趾各关节骨侵蚀严重,关节腔隙狭窄甚至消失,血清TNF-α、IL-1β及关节骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达均增高(P<0.01).与模型组比较,甲氨蝶呤组、青藤碱组、芍药苷组和青芍配伍组大鼠足肿胀容积及关节炎指数评分均降低(P<0.01),体质量增加(P<0.01),骨破坏程度均明显减轻,血清TNF-α、IL-1β水平及关节骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1 蛋白表达均降低(P<0.01).与青藤碱组或芍药苷组比较,青芍配伍组大鼠足肿胀容积及关节炎指数评分降低(P<0.01),体质量增加(P<0.01),骨破坏程度减轻,TNF-α、IL-1β水平及关节骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1 蛋白表达降低(P<0.01).结论 青藤碱配伍芍药苷对CIA具有较强的治疗作用,在一定程度上比单用青藤碱或芍药苷的抗关节炎效果明显.其机制可能与抑制TNF-α、IL-1β表达,降低关节骨组织MMP-2、MMP-9 表达,同时促进TIMP-1 表达有关.

目的 探讨局部应用傅山风湿外治方对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠炎性细胞因子和Notch2表达的影响.方法 雌性Wistar大鼠36只,随机分为正常组10只,造模组26只,成功构建CIA模型20只,随机平均分配为模型组、傅山风湿外治方组各10只.第14天开始,傅山风湿外治方组将0.4 mL药膏均匀涂抹于大鼠踝关节.正常组和模型组给予等体积生理盐水局部涂抹.每天更新2次,连续42天.每周观察大鼠关节肿胀情况进行关节炎指数评分.干预结束后,取大鼠腹主动脉血、踝关节、脾脏和肝肾组织.HE染色评估关节炎严重程度及踝关节和肝肾组织病理变化;ELISA检测血清炎性细胞因子表达;qRT-PCR和Western blot检测踝关节滑膜和脾脏Notch2、Delta-like配体蛋白 1(Delta-like ligand protein-1,DLL1)和核因子-κBp65(Nuclear factor-κBp65,NF-κBp65)mRNA和蛋白表达,并利用免疫组织化学法检测其在踝关节的阳性表达;检测各组大鼠血清肝肾功能水平变化.结果 与正常组相比,模型组关节炎指数评分升高(P<0.01),关节损伤增加,病理学评分升高(P<0.01),血清炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-17和IFN-γ水平升高(P<0.01),大鼠踝关节和脾脏Notch2、DLL1和NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达升高(P<0.01),踝关节阳性表达增多(P<0.01);与模型组相比,傅山风湿外治方组关节炎指数评分下降(P<0.05,P<0.01),关节损伤减轻,病理学评分降低(P<0.01),血清炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-17和IFN-γ水平下降(P<0.01),大鼠踝关节和脾脏中Notch2、DLL1和NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达降低(P<0.01),踝关节阳性表达减少(P<0.01),肝肾组织均未见明显的病理损伤,血清天冬氨酸转氨酶(Aspartate transaminase,AST)、丙氨酸转氨酶(Alanine transaminase,ALT)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(Creatinine,Cr)水平无显著变化(P>0.05).结论 傅山风湿外治方可缓解CIA大鼠的关节炎症状,减轻关节损伤,且对肝肾无毒副作用,其作用机制可能与降低炎性细胞因子,下调Nocth2通路有关.

目的 探讨松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)通路及自噬相关基因的影响.方法 选择5周龄SPF级Wistar雌性大鼠54只,造模成功后分为空白组、模型组、羟氯喹(HCQ)组,松萝提取物低(2 mg/kg)、中(6 mg/kg)、高(54 mg/kg)剂量组,每组9只.空白组、模型组予生理盐水灌胃,其余各组进行相应药物干预.ELISA检测血清中IL-6、HMGB1水平,RT-PCR检测Beclin1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Ⅲ型磷酸肌醇3激酶(PI3K C3)mRNA表达,Western blot检测HMGB1、RAGE、Beclin1、Bcl-2、PI3K C3蛋白表达.结果 与空白组比较,松萝提取物低、中、高剂量组、模型组、HCQ组血清IL-6、HMGB1水平升高,滑膜组织HMGB1、RAGE蛋白表达和Bcl-2、PI3K C3 mR-NA及蛋白表达升高,Beclin1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,HCQ组和松萝提取物中、高剂量组血清HMGB1、IL-6水平升高,滑膜组织HMGB1、RAGE蛋白表达和Bcl-2、PI3K C3 mRNA及蛋白表达降低,Beclin1 mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与HCQ组比较,松萝提取物中、高剂量组上述指标无明显变化(P>0.05).结论 松萝提取物可能通过调控自噬水平,降低炎症反应.

目的 研究艾拉莫德对胶原诱导性关节炎大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响及其可能作用机制.方法 选取50只Wistar雌性大鼠,用Ⅱ型胶原诱导法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组,每组各10只,另设对照组10只.艾拉莫德低、中和高剂量组大鼠分别灌胃3、6、12 mg·kg-1·d-1艾拉莫德混悬液(生理盐水配制);甲氨蝶呤组灌胃1 mg·kg-1甲氨蝶呤混悬液,每周1次;对照组及模型组给予等量生理盐水,连续4周.观察大鼠足跖肿胀度;以酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-10水平;以流式细胞术检测大鼠外周血中Th17/Treg细胞比例;以实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠踝关节滑膜中维A酸相关孤独受体γt(RORγt)、叉头转录因子3(Foxp3)mRNA的表达情况.结果 对照组、模型组、甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组治疗4周的足跖肿胀度分别为0、(36.81±3.32)％、(5.81±0.60)％、(9.35±0.89)％、(6.57±0.64)％和(3.36±0.30)％;血清IL-17 水平分别为(58.47±2.33)、(176.57±9.50)、(83.27±3.87)、(153.82±8.09)、(88.44±4.64)和(64.20±3.49)pg·mL-1;血清 IL-10 水平分别为(102.35±9.45)、(39.35±3.18)、(78.55±7.85)、(72.55±6.92)、(107.27±9.31)和(124.63±13.36)pg·mL-1;外周血中 Th17 亚群比例分别为(1.34±0.31)％、(5.43±0.59)％、(3.03±0.34)％、(4.35±0.40)％、(3.14±0.30)％和(1.66±0.23)％;外周血中Treg亚群比例分别为(12.53±0.47)％、(8.76±0.23)％、(11.82±0.34)％、(10.56±0.30)％、(11.77±0.39)％和(12.87±0.47)％.上述指标,模型组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).艾拉莫德高剂量组与艾拉莫德低、中剂量组及甲氨蝶呤组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 艾拉莫德通过调控Th17/Treg平衡,减轻炎症反应发挥对CIA大鼠踝关节保护作用,其机制可能与调节其特异性转录因子RORγt、Foxp3表达有关.

目的 研究芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)寒证大鼠γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)表达的影响,并探讨其可能的机制.方法 110只雌性Wistar大鼠被随机分为7组:正常组、模型组、甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)对照组、雷公藤多甙对照组和芍甘附子汤加味组(大、中、小剂量).正常组常规饲养,其余各组在复制CIA寒证大鼠模型后分别MTX、雷公藤多甙片及芍甘附子汤加味(大、中、小剂量)灌胃,干预4周,每周评价各组大鼠体重、足肿胀排水体积等情况.4周后,用 ELISA 法检测大鼠外周血IFN-γ和IL-17A表达水平;RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜IFN-γ mRNA和IL-17A mRNA表达情况.结果 给药基线期各给药组大鼠较正常组体重均有减轻(P<0.05),双足排水体积均显著升高(P<0.05),给药后各组大鼠肿胀持续减轻;同时期各给药组大鼠组间双足排水体积比较差异无统计学意义(P>0.05).各组大鼠外周血IFN-γ水平较正常组及模型组均有显著升高(P<0.05),对照组大鼠及治疗组组间比较无统计学意义(P>0.05);各组大鼠外周血 IL-17A 较正常组显著升高(P<0.05),各给药组大鼠与模型组比较,大剂量组与中剂量组较模型组相比有显著差异(P<0.05),小剂量组与模型组比较无统计学意义(P>0.05).治疗组大鼠滑膜IFN-γ/IL-17A mRNA较模型组降低,但无统计学差异(P>0.05).结论 RA为多种免疫细胞及细胞因子共同参与发病,芍甘附子汤加味在一定程度上可下调IFN-γ、IL-17A表达.

目的 评价胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠18 F-NaF micro-PET/CT和μCT评分与组织病理学的相关性.方法 选取70只健康雌性SD大鼠,随机取其中20只为对照组,50只为模型组,分别在造模成功后10天行micro-PET/CT显像,测定PET显像最小标准化摄取值(SUVmin)、最大标准化摄取值(SUVmax)及平均标准化摄取值(SUVmean)值;随后进行μCT扫描并评分,通过组织病理学评分评估类风湿性关节炎严重程度.对SUVmin、SUVmaxx及SUVmean值、μCT评分与组织病理学评分进行Pearson相关分析.结果 18F-NaF PET/CT的SUVmin、SUVmax、SUVmean、μCT评分与组织病理学评分均呈正相关(r＝0.920、0.943、0.923、0.768,P均＜0.001).结论 18F-NaF Micro-PET/CT能可靠地定量评价大鼠CIA模型骨侵蚀和骨畸形,优于μCT检查.