病理损伤和临床医源性操作均可导致牙本质脱矿，形成脱矿牙本质基质（demineralized dentin matrix，DDM）。牙本质脱矿激活内源性基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）和半胱氨酸组织蛋白酶（cysteine cathepsin，CC）；同时DDM力学性能降低，因此在酶促降解和物理破坏下DDM易丧失结构完整性，降低DDM在牙本质-树脂粘接修复中的临床价值。采用交联剂和MMP/CC抑制剂是保护DDM结构完整性和实现其临床价值的有效策略。多种化学合成试剂和植物来源提取物能显著改善DDM力学性能，增强DDM酶解耐受性，但化学合成试剂的细胞毒性和植物提取物引起的牙齿着色可显著影响其临床适用性。在保护牙本质胶原的同时发挥抗菌性能是未来DDM保护剂研究的新方向。因此，本综述分别从胶原交联剂、胶原降解酶抑制剂和集两者功效于一体的化合物展开，探讨DDM保护的最新研究进展，并展望其在牙本质-树脂粘接中的应用前景，以期为DDM保护策略的临床应用提供参考。

现有牙本质粘接体系基于酸蚀技术使胶原纤维内外磷灰石同时丧失，造成过度脱矿，而粘接剂难以渗入纤维内部，导致混合层裸露的胶原酶解、树脂降解，严重危害树脂修复体的临床寿命。选择性胶原纤维外脱矿技术可选择性地将胶原纤维外的磷灰石脱矿，保留胶原纤维内的磷灰石晶体，从而有效避免酸蚀技术导致的粘接界面结构完整性损坏，提高牙本质粘接耐久性。本文就选择性胶原纤维外脱矿技术的作用机制及其在牙本质粘接领域应用的研究进展进行综述。

目的:探索巨噬细胞(Mφ)极化对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成牙骨质分化的影响及作用机制.方法:将THP-1 人单核细胞分别诱导为M0、M1和M2型Mφ,用RPMI 1640基础培养基或不同极化状态Mφ来源的上清液与成牙骨质诱导液等比例混合制备条件培养基(CM-Control、CM-M0、CM-M1和CM-M2)用于培养hPDLSCs,将条件培养基培养的hPDLSCs形成的细胞膜片包裹人脱矿牙本质基质(TDM)移植至裸鼠皮下进行异位牙骨质形成实验.以CM-Control组作为对照,通过HE染色实验观察类牙骨质样组织的形成;免疫荧光染色(IMF)和qRT-PCR,检测成牙骨质分化标记物骨涎蛋白(BSP)、牙骨质附着蛋白(CAP)和牙骨质蛋白-1(CEMP-1),氧化-抗氧化体系标记物超氧化物歧化酶1(SOD1)和核转录因子红系2相关因子2(NRF2)以及线粒体自噬标记物PTEN诱导假定激酶1(PINK1)和微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)的表达水平.结果:体内实验中,CM-M2组形成的类牙骨质样组织更多,CAP、CEMP-1蛋白表达量更高且伴随SOD1蛋白和PINK1、LC3蛋白表达水平升高,NRF2蛋白未见明显差异.体外实验中,CM-M2组BSP(P＜0.01)、CAP(P＜0.001)和CEMP-1(P＜0.01)的mRNA水平上升,SOD1的mRNA水平上升(P＜0.05),而NRF2的mRNA水平无统计学差异(P＞0.05),PINK1的mRNA水平上升(P＜0.05).结论:M2型Mφ可能通过上调hPDLSCs的氧化-抗氧化体系和线粒体自噬水平促进hPDLSCs的成牙骨质分化潜能.

目的 观察牙本质基质制备粒度与脱矿程度对其性能的影响.方法 选取成年家兔的上颌门牙随机分为 2 组,A组:采用稀盐酸(HCL)溶液(浓度 1 mol/L)脱矿 45 min,干燥后制备成 3 种不同粒径(400 μm以下、400-800 μm、800-1200 μm)的脱矿牙本质基质材料(Demineralized dentin matrix,DDM),进行扫描电镜及静态接触角检测;B组:采用 3 种不同浓度(1 mol/L、0.5 mol/L和 0.25 mol/L)的HCL溶液脱矿45 min,干燥后制备成粒径400 μm以下的牙本质基质材料,分别进行红外光谱检测及电子能谱仪钙元素测定.结果 扫描电镜显示粒径 400 μm以下的DDM材料呈片状,随机观察牙本质小管充分暴露.A组 3 种DDM材料的静态接触角由粒径从小到大分别为 6.0°、67.0°和 96.7°.B组红外光谱检测显示:随着HCL溶液浓度增大,DDM材料中以羟基磷灰石为代表的无机物含量随之降低(P<0.05),但胶原的含量受影响较小;钙元素测定显示:在一定范围内随着脱矿程度增加,样品钙含量呈现梯度式降低(P<0.05).结论 粒径较小的DDM材料牙本质小管暴露更充分,且具有更优的亲水性,脱矿程度的增加会降低DDM材料中无机物的含量,但对胶原含量影响较小.

目的 研究季铵盐包裹溴化银纳米复合物(AgBr/BHPVP)对牙本质基质金属蛋白酶(MMP)活性的影响.方法 采用比色试剂盒检测浓度为0.5%~1.5% AgBr/BHPVP对游离型重组人基质金属蛋白酶rhMMP-2、rhMMP-8、rhMMP-9活性的影响.将脱矿的牙本质经0.2%氯己定(CHX)或不同浓度AgBr/BHPVP处理,分别在第3、5、7天测定释放Ⅰ型胶原吡啶交联终肽(ICTP)水平和第30天时测量牙本质条干重损失量,以及使用明胶酶谱法检测对牙源性明胶酶MMP-2、MMP-9活性的影响,用以评估AgBr/BHPVP对结合型MMP活性的影响.采用单因素方差(One-Way ANOVA)分析各处理组rhMMP活性以及各处理组牙本质条干重损失量总体差异,使用重复测量方差分析各处理组在不同时间点对ICTP释放水平的影响,Tukey检验进行组间两两对比.结果 检测浓度AgBr/BHPVP对游离型MMP均具有明显的抑制作用,浓度达1.5%时对rhMMP-2、rhMMP-8、rhMMP-9活性抑制接近90%.ICTP释放量在7 d时,AgBr/BHPVP组

目的 探讨脱矿牙本质基质(DDM)诱导成骨机制的细胞理论框架和成骨方式.方法 在24只新西兰大耳白兔双侧竖脊肌区制备4个肌袋位点,随机选取3个位点为实验位点,植入DDM,另一位点为对照位点,不植入任何材料.术后1、2、3、4、8、12、16和20周处死动物,制作组织标本,应用苏木精-伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和免疫组织化学染色对间充质干细胞、成骨细胞、软骨细胞及破骨细胞进行鉴定分析.结果 HE染色显示:3周时,实验组可见软骨样基质、骨样基质和成骨样细胞.免疫组化染色显示:各时间点CD44、碱性磷酸酶(ALP)和Ⅱ型胶原表达有统计学意义(P＜0.05).结论 DDM具有良好骨诱导性和组织相容性,其诱导成骨的主要方式可能为软骨内成骨.

目的 比较37％磷酸和17％ EDTA对人牙本质的脱矿效率,并评价不同脱矿时间对人牙本质中I型胶原基质降解速率的影响.方法 制取等量人牙本质粉,分别以37％磷酸(Pi)与17％EDTA脱矿处理0 s(对照组)、10 s、15 s、30 s、60 s、120 s、72 h后离心荡洗.检测计算两种脱矿液的脱矿效率及胶原溶脱率并绘制动力学曲线.1g/L I型胶原酶溶液300 μL酶解样本沉淀,于l、7d用羟脯胺酸(HYP)试剂盒测定并绘制胶原降解变化趋势图.利用Pearson相关系数分析脱矿总量与胶原溶脱、酶解ld胶原降解量、酶解7d胶原降解量及增量之间的相关性.结果 磷酸组15 s即脱矿显著,胶原溶脱30 s明显增高(P＜0.05),胶原降解量各时间点差异无统计学意义,降解增量15 s开始降低(P＜0.05),脱矿量与胶原溶脱量及降解增量呈显著相关(r =0.864,r=-0.713,P＜0.05).EDTA组30 s明显脱矿,胶原溶脱较少,且120s内各时间点差异无统计学意义,胶原降解量30 s达峰值,随后各时间点胶原降解量明显降低(P＜0.05),降解增量60s开始降低(P＜0.05),脱矿量与胶原溶脱量呈显著相关(r =0.894,P＜0.05).结论 磷酸脱矿效率迅速、高效,胶原溶脱率较高,稳定性较好;EDTA脱矿效率缓慢、持续,胶原溶脱率较低,稳定性尚可.临床进行牙本质粘结前表面处理牙本质时,以37％磷酸酸蚀10～15 s或17％ EDTA表面处理60 ～ 90 s为较合理.

利用各种仿生手段实现脱矿牙本质再矿化并形成具有一定力学强度的有机基质-无机矿物复合物,是近年牙齿修复领域的研究热点,也为修复牙本质缺损提供新思路.牙本质仿生矿化是模拟自然界中生物组织矿化的过程,在有机大分子的调控下,诱导牙本质胶原再矿化.本文就仿生分子体外调控脱矿牙本质再矿化过程的研究进展进行综述.

目的:探讨不同粘结条件下健康成人牙本质中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平,为临床应用基质金属蛋白酶(MMPs)抑制剂提高粘结效果提供依据.方法:收集20颗成人新鲜离体磨牙,液氮冷却条件下将其研磨为牙本质粉;模拟口内条件,对牙本质分别进行自酸蚀粘结(Single Bond Universal)和全酸蚀粘结(35％磷酸凝胶+Adpter Single Bond 2)处理,以不进行任何处理的牙本质作为阴性对照组,10％磷酸溶液(自酸蚀粘结)或10％磷酸溶液+35％磷酸凝胶处理的脱矿牙本质粉(全酸蚀粘结)处理的牙本质作为阳性对照组,只进行Single Bond Universal(自酸蚀粘结)处理和35％磷酸凝胶+Adpter Single Bone 2(全酸蚀粘结)处理的牙本质作为空白对照组;在粘结过程中分别使用MMPs抑制剂氯己定(CHX)和米诺环素(MI)预处理,作为CHX预处理组和MI预处理组;采用10％次氯酸钠进行牙本质老化,作为老化组,并在老化组基础上加入CHX和MI作为CHX预处理老化组和MI预处理老化组.采用明胶酶谱法进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,孵育染色脱色后,采用凝胶图像分析系统分析条带,计算各组牙本质中MMP-2和MMP-9表达水平.结果:在自酸蚀粘结条件下,与空白对照组比较,CHX预处理组牙本质中MMP-2和MMP-9表达水平降低(P<0.05),MI预处理组牙本质中MMP-2和MMP-9表达水平降低(P<0.05);与空白老化对照组比较,CHX预处理老化组牙本质中MMP-2和MMP-9表达水平降低(P<0.05),MI预处理老化组牙本质中MMP-2和MMP-9表达水平降低(P<0.05).在全酸蚀粘结条件下,与空白对照组比较,CHX预处理组和MI预处理组牙本质中MMP-2表达水平降低(P<0.05);与空白老化对照组比较,CHX预处理老化组与MI预处理老化组牙本质中MMP-2表达水平降低(P<0.05).结论:在牙本质粘结过程中,CHX和MI能够通过降低MMP-2和MMP-9表达水平减缓酶解反应,从而增强粘结强度.

目的 研究氧化海藻酸钠(ADA)改性脱矿牙本质胶原的交联度和显微形貌,及其对牙本质基质金属蛋白酶(MMP)的抑制作用和树脂牙本质粘接强度的影响.方法 制备ADA,进行傅里叶红外线光谱分析(FTIR).采用0.5％、1％、2％、3％和4％的ADA处理脱矿牙本质粉末(DDP)1、2、30 min,5％戊二醛溶液作为阳性对照,茚三酮比色法检测胶原交联度.制备(1.0±0.1)mm厚牙本质片,35％磷酸溶液酸蚀后ADA处理1 min,保持表面干燥或湿润,场发射扫描电镜(FESEM)观察其显微形貌.Sensolyte Generic MMP assay kit试剂盒检测不同浓度ADA对MMP-9的抑制作用.制备树脂牙本质粘接样本,检测ADA预处理试件冷热循环前后的微拉伸强度.使用SPSS 22.0对交联度实验进行多因素方差分析和Tukey检验,MMP-9抑制实验进行秩和检验和Bonferroni检验,微拉伸实验进行单因素方差分析和LSD检验.结果 FTIR显示海藻酸钠氧化后生成醛基形成ADA.DDP经ADA处理后,胶原交联度随处理浓度及处理时间呈依赖性增加,不同浓度组间(F=1329.423,P<0.001)及不同时间组间(F=1142.93,P<0.001)差异均有统计学意义.35％磷酸溶液脱矿牙本质表面经处理后,除阴性对照和0.5％ADA干燥处理组胶原纤维塌陷外,其余组均保持蓬松状态.0.5％～4％ADA对MMP-9的抑制程度为93.5％～100％,不同浓度组间差异有统计学意义(F=13.786,P<0.001).ADA预处理后,2％ADA组粘接样本冷热循环前后的粘接强度最高,分别为(28.2±4.2)、(18.3±3.7)MPa,差异有统计学意义(F前=5.544,P前<0.001;F后=5.181,P后<0.001)MPa.结论 2％ADA处理脱矿牙本质可提高Ⅰ型胶原纤维的交联度,使胶原纤维网保持蓬松状态,同时能抑制MMP-9活性,提高树脂牙本质粘接即刻及老化后的微拉伸强度,有利于改善树脂牙本质的粘接耐久性.