目的 基于网络药理学方法和动物实验探讨桔梗白散治疗肺腺癌的作用靶点及机制.方法 借助TCMSP数据库及GeneCards、PharmGKB、DrugBank、TTD、OMIM数据库检索桔梗白散有效成分相关靶点及肺腺癌相关靶点,获取二者交集靶点,运用Cytoscape3.8.0软件构建交集靶点蛋白相互作用(PPI)网络和中药活性成分-靶点网络,筛选关键成分及核心靶点.对交集靶点进行GO和KEGG富集分析.运用PyMOL、AutoDockTools1.5.6软件对关键成分与核心靶点进行分子对接.建立肺癌小鼠模型,将小鼠随机分为空白组、模型组、顺铂组、桔梗白散联合顺铂组及桔梗白散低、中、高剂量组,给药组分别予相应药物干预14 d,计算抑瘤率,HE染色观察肿瘤组织形态,RT-qPCR及Western blot检测肿瘤组织PI3K、PTEN、Akt、mTOR基因及蛋白表达.结果 网络药理学方法筛选出桔梗白散治疗肺腺癌的TP53、CASP3、BCL2L1、AKT1等核心靶点,富集的关键通路有PI3K-Akt信号通路等.桔梗白散能有效抑制模型小鼠肿瘤生长;与模型组比较,桔梗白散中、高剂量组PI3K、Akt、mTOR mRNA表达降低,PTEN mRNA表达升高,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01).结论 桔梗白散治疗肺腺癌具有多层次、多靶点的特点,可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进肿瘤细胞凋亡与自噬,从而发挥抑制肿瘤细胞生长的作用.

目的:探讨自噬相关长链非编码RNA(LncRNA)在肺腺癌(LUAD)中的预后作用，并构建LUAD自噬相关LncRNA预后风险模型。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)获取LUAD转录组数据和临床资料，从HADb网站下载自噬基因列表，采取Pearson相关性分析法筛选与自噬基因相关的LncRNA，采用单因素Cox回归分析和Kaplan-Meier法筛选具有预后意义的LncRNA，而后应用多因素Cox回归分析筛选出具有预后价值的自噬相关LncRNA，并构建预后风险模型。使用多因素Cox回归系数计算LUAD患者的风险评分，分为低风险组、高风险组，对比两组患者的生存差异，采用受试者工作特征曲线评价模型的灵敏性和特异性。结果:共筛选LUAD自噬相关LncRNA 257个(相关系数|R|>0.5， P<0.001)，通过单因素Cox回归分析筛选出14个自噬相关LncRNA对LUAD患者具有预后价值( P<0.05)，多因素Cox回归分析筛选出7个具有预后价值的自噬相关LncRNA，其中，UGDH-AS1、AC090559.1、HCG18、AC026355.1和LINC00996与LUAD患者的总生存期呈负相关，而ABALON和AC099850.3与LUAD患者总生存期呈正相关；另构建LUAD预后风险模型，低风险组与高风险组间患者生存期差异有统计学意义( P<0.01)，预测模型受试者工作特征曲线下面积(AUC)>0.7( P<0.05)，预后模型的风险评分是LUAD的独立预测因子，风险评分与肿瘤分期、T分期、淋巴结转移显著相关( P<0.05)。 结论:基于7个自噬相关LncRNA构建的预后风险模型可能有效预测LUAD患者预后，有助于LUAD患者的精准化治疗。

目的:基于生物信息学分析的自噬相关基因构建肺鳞状细胞癌（SqCLC）预后模型并验证。方法:从癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载268例SqCLC患者的表达谱数据和临床信息，从基因型组织表达（GTEx）数据库下载336名健康人正常肺组织的数据集；从人类自噬数据库（HADb）及分子特征数据库（MSigDB）6.2中的GO_AUTOPHAGY基因组中获得自噬相关基因组。应用R 4.0.3软件分析TCGA数据库中SqCLC组织与GTEx数据库中正常肺组织间差异表达基因。使用R 4.0.3软件筛选TCGA数据库SqCLC组织和正常肺组织间差异表达的自噬相关基因（简称：差异表达自噬基因）。应用Cox比例风险模型分析TCGA数据库SqCLC患者差异表达自噬基因与预后的关系，构建预后模型。依据预后模型风险评分中位数将TCGA数据库SqCLC患者分为高风险组和低风险组，采用Kaplan-Meier法比较两组总生存；绘制应用预后模型预测的TCGA数据库268例患者3、5、10年总生存率的时间相关受试者工作特征（ROC）曲线。采用Cox回归分析TCGA数据库SqCLC患者总生存的独立影响因素，建立预后指数公式，根据一致性指数和受限平均生存（RMS）曲线，比较单独预后模型风险评分的预后指数与风险评分联合独立影响因素的预后指数预测TCGA数据库患者生存效果；采用R 4.0.3软件构建预测患者3、5、10年总生存率的列线图。结果:筛选出6个预后相关差异表达自噬基因，并构建预后模型为：风险评分＝PEX14×0.337+CASPASE-8×（-0.280）+TM9SF1×0.292+UBB×0.472+P4HB×0.163+CTSA×0.173。TCGA数据库中高风险组总生存较低风险组差（ P<0.001）。时间依赖性ROC曲线分析显示，预后模型风险评分预测TCGA数据库中268例患者3、5、10年总生存率的曲线下面积（AUC）分别为0.715、0.715、0.831。多因素Cox回归分析显示，年龄、分期和预后模型风险评分为TCGA数据库SqCLC患者总生存的独立影响因素，预后指数＝0.998 ×风险评分+0.725 ×分期+ 0.559 ×年龄。RMS曲线显示，相对于预后模型风险评分预测总生存，3个独立预后影响因素相结合的预后指数预测总生存效果更佳（一致性指数：0.68比0.65， P＝0.045）。采用年龄、分期和预后模型风险评分构建了预测SqCLC患者生存的列线图，其校正曲线接近理想曲线。 结论:成功建立了基于6个特征性差异表达自噬相关基因的SqCLC预后模型，内部验证显示该模型结合其他临床病理因素可对SqCLC患者生存的预测提供一定帮助。

目的:观察孕期邻苯二甲酸二丁酯(DBP)暴露对后代肾脏的毒理作用，并探讨其机制。方法:将6只孕鼠在孕期14~18 d分别随机予以850 mg/(kg·d)的DBP处理3只孕鼠为染毒组，另外3只孕鼠予以等剂量的玉米油处理为对照组。在产后第1天分别随机收集各组6只子代鼠的肾脏组织，采用免疫组织化学(IHC)染色检测肾脏自噬水平，蛋白质印迹法(Western blot)及定量分析验证自噬相关基因Beclin-1在肾脏中的表达。用Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肾脏组织中Hedgehog信号通路上的相关标志物的表达水平。在体外实验中，分别予以Hedgehog信号通路的抑制剂索尼德吉Sonidegib及激动剂重组音刺猬蛋白(SHH)处理NRK52E肾小管上皮细胞，采用Western blot分析各组的自噬水平。组间比较采用独立 t检验。 结果:IHC提示染毒组Beclin-1的表达高于对照组(2.37±0.12比1.00±0.10， t＝15.190， P<0.05)，蛋白印记及其定量分析显示染毒组Beclin-1蛋白表达量高于对照组(1.20±0.104比1.00±0.01， t＝3.317， P<0.01)。同时，Western blot及其定量分析表明，暴露组Hedgehog信号通路标记物Gli1和Ptch1表达低于对照组(1.00±0.15比0.43±0.09， t＝5.644， P<0.01；1.00±0.01比0.35±0.10， t＝11.20， P<0.01)。RT-qPCR也提示暴露组Gli1和Ptch1表达低于对照组(1.00±0.18比0.51±0.10， t＝4.122， P<0.01；1.00±0.10比0.62±0.08， t＝5.140， P<0.01)。体外研究证实当加入Hedgehog抑制剂Sonidegib后，实验组的NRK52E细胞自噬指数(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)高于对照组(0.49±0.11比1.25±0.05， t＝10.890， P<0.01)，而当加入其激动剂SHH后，实验组的自噬指数低于对照组(0.49±0.11比0.36±0.09， t＝11.260， P<0.01)。 结论:孕期DBP暴露通过抑制Hedgehog信号引起后代肾脏发生自噬，从而可能引起肾脏相关疾病。

目的:探讨褪黑素在小鼠放射性肠损伤作用中的全基因体表达图谱变化。方法:对C57BL/6J雄性小鼠按10 mg/kg体重进行腹腔注射褪黑素，1次/d，连续5 d，然后，对小鼠腹部进行14 Gy γ射线照射。照射后3 d收集小鼠小肠组织，进行DNA微阵列检测，对小肠组织差异基因进行基因本体论(GO)注释及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果:与对照组相比，照射前给药组小鼠差异基因中上调基因584个，下调基因538个。照射组和照射前给药组小鼠取交集的差异基因中，照射前给药组特有的上调基因324个，下调基因246个。这些差异基因的GO注释分析显示，照射前给药组排名前15的显著富集的生物过程主要包括自噬体组装(GO：0000045)、自噬体组织(GO：1905037)和急性炎症反应调节(GO：0002673)。其中，ATG12、ATG16L2和AMBRA1基因参与自噬体组装和自噬体组织，C3、CPN1、CD55、CFP、CNR1、C1QA、C2和CREB3L3基因参与急性炎症反应调节。这些差异基因参与的KEGG通路分析显示，照射前给药组排名前15的显著富集的通路主要包括O-聚糖生物合成(hsa00512)、鞘糖脂生物合成(hsa00603)、细胞外基质-受体互作(hsa04512)和不饱和脂肪酸生物合成(hsa01040)。qRT-PCR验证显示，照射前给药组参与自噬生物过程中的ATG12和ATG16L2基因的表达量较照射组显著增加( t＝2.40、4.35, P<0.05)。 结论:与自噬和急性炎症反应相关生物过程中的差异基因，以及参与不饱和脂肪酸生物合成的通路，可能参与褪黑素在辐射诱导的放射性肠损伤中的作用。

目的:探讨噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（HLH）的病因，并分析感染及非感染因素诱发的HLH患者的临床特征、治疗方案及结局。方法:回顾性分析2006年1月1日至2021年12月4日于北京大学第一医院住院期间诊断或怀疑HLH的97例年龄≥14岁患者的临床资料，进一步筛选后纳入HLH患者80例。分析患者一般情况及病因构成，对比感染组、肿瘤组、自身免疫性疾病组患者的实验室检查、治疗及结局。结果:纳入的80例HLH患者年龄［ M（ Q1， Q3）］为53.5（32.0，64.0）岁，男女比例1∶1。继发于感染、肿瘤、自身免疫性疾病、混合因素者分别为23.8%（19/80）、37.5%（30/80）、15.0%（12/80）、10.0%（8/80），其中EB病毒感染（15例）和血液系统肿瘤（28例）分别为感染和非感染相关HLH中占比最高的病因。感染组患者外周血二系或三系减低的占比高于自身免疫性疾病组［68.4%（13/19）比33.3%（4/12）， P=0.002］。血清铁蛋白（SF）≥500 μg/L和≥1 500 μg/L的患者分别占93.1%（54/58）和72.4%（42/58）；其中29例患者治疗后SF较治疗前明显降低，分别为1 049（362，1 769）μg/L以及2 010（1 231，7 323）μg/L（ P<0.001）。噬血现象可见于68.75%（55/80）的患者，HLH相关基因突变见于5例患者。三组患者中13.1%（8/61）死亡，47.5%（29/61）好转，9.8%（6/61）复发。 结论:HLH无特异性症状且病情进展迅速，主要病因为感染、肿瘤性疾病、自身免疫性疾病等，早期进行病因治疗及特异性治疗或可缓解病情。

目的:探讨脊髓损伤后大鼠线粒体自噬变化及靶向Nix对脊髓损伤的影响。方法:30只SD大鼠按照数字表格法分为对照组、脊髓损伤组和Nix下调组，每组10只。Nix下调组小鼠在术前24 d脊髓中注射Nix短发卡RNA(shRNA)腺相关病毒，对照组和脊髓损伤组相同位置注射等体积对照腺相关病毒。脊髓损伤组和Nix下调组大鼠采用动脉瘤夹压迫型损伤法制备脊髓损伤模型，对照组不做处理。两组建模14 d后采用染色法分析脊髓部位变性神经元的数量；采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评分表分析3组大鼠损伤后运功功能变化；采用蛋白质免疫印迹分析3组大鼠线粒体外膜蛋白TOM20、线粒体内膜蛋白Tim23、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因诱导激酶(PINK1)、Parkin表达水平。采用透射电子显微镜分析3组大鼠3组大鼠脊髓细胞自噬体数量；采用流式细胞术分析3组小鼠脊髓细胞线粒体膜电位；组间比较采用单因素方差分析。结果:Nix下调组大鼠骨髓组织Nix蛋白表达水平(0.89±0.31)明显低于脊髓损伤组(1.79±0.11)，差异有统计学意义( t＝15.320， P<0.05)。Nix下调组大鼠骨髓组织TOM20和Tim23蛋白表达水平(0.80±0.07、0.69±0.06)明显高于脊髓损伤组(0.53±0.12、0.39±0.09)，差异有统计学意义( t＝6.029、8.270， P<0.05)。Nix下调组大鼠骨髓组织PINK1和Parkin蛋白表达水平(1.04±0.11、0.83±0.07)明显低于对照组(1.48±0.15、1.24±0.13)，差异有统计学意义( t＝7.565，9.019， P<0.05)。Nix下调组大鼠骨髓组织死亡神经元数量[(6.70±1.34)个]明显低于脊髓损伤组[(17.9±5.26)个]，差异有统计学意义( t＝6.527， P<0.05)。Nix下调组大鼠骨髓细胞自噬数量[(14.00±2.58)个]明显高于脊髓损伤组[(29.70±3.56)个]，差异有统计学意义( t＝11.290， P<0.05)。Nix下调组大鼠骨髓细胞线粒体膜电位荧光强度(179.54±12.02)明显高于脊髓损伤组(108.14±12.89)，差异有统计学意义( t＝12.810， P<0.05)。Nix下调组大鼠BBB评分[(12.50±2.80)分]明显高于脊髓损伤组[(5.80±1.48)分]，差异有统计学意义( t＝6.960， P<0.05)。 结论:脊髓损伤后线粒体自噬水平显著增加，下调Nix可抑制抑制线粒体自噬，降低线粒体损伤，保护脊髓神经元，进而改善大鼠神经功能。

目的:总结非艾滋病儿童播散性马尔尼菲蓝状菌病(TSM)的临床特点、治疗转归及基因分析，提高早期诊治水平，改善预后。方法:回顾分析2015年4月至2020年12月广西壮族自治区妇幼保健院重症医学科收治的6例非艾滋病TSM患儿的临床资料及1例基因检测结果。结果:患儿男女各3例，年龄4月龄~12.5岁，广西人。分别以发热、肛瘘、烦躁、面部焦痂样皮损、气促为首发症状，4例有肝脏及脾脏肿大。全部病例血IgM降低(0.01~1.20 g/L)及C-反应蛋白增高(30.33~>200 mg/L)，5例有不同程度真菌葡聚糖及血沉增高、自然杀伤淋巴细胞降低。例6基因测序：2号染色体 STAT1基因1个与家族性念珠菌病7型相关基因变异，同时还检测到不排除致病可能的多个基因变异。6例患儿肺部影像学均存在无特征性异常表现。血培养出马尔尼菲蓝状菌，2例同时骨髓培养及病原体二代测序阳性，仅例3住院期间血培养报告阳性，余5例均签字出院后报告阳性。住院至确诊时间5~14 d，病程24~39 d血培养报告阳性。早期误诊：2例肺结核，余4例分别误诊为自身免疫性脑炎、化脓性脑膜脑炎、恙虫病、噬血细胞综合征。治疗效果：2例有免疫功能缺陷患儿予抗真菌治疗病情稳定，自动出院后失访；另4例均治疗效果差签字放弃治疗后死亡。 结论:TSM可发生在非艾滋病儿童，临床表现多样，肺部均受累，可累及中枢神经系统、皮肤及骨髓，病情可迅速加重，危重状态治疗效果差，存在免疫缺陷的TSM患儿病情进展较轻缓且治疗效果较好；病原学培养时间长、阳性率低，需尽早和反复送检，病原体二代测序可提高检测速度及阳性率。

目的:探讨原发性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(pHLH)患儿的临床特点及其家系的基因突变特征。方法:选择2016年11月至2017年1月于郑州大学第一附属医院儿内科确诊的3例pHLH患儿为先证者，并且以先证者及其16例家系成员为研究对象。对先证者进行血常规、凝血功能、血清铁蛋白、自然杀伤(NK)细胞、可溶性CD25，以及骨髓细胞形态学检查。对先证者及家系成员进行HLH相关基因突变检查。根据HLH-94方案和HLH-2004方案对先证者进行治疗。回顾性分析3例先证者的病史和相关检查结果、诊断、治疗及转归。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。结果:①患儿1，女性，4个月，因"发热7 d，发现血小板减少6 d"于2016年11月4日至本院就诊，临床表现为发热，肝、脾大。血常规结果示三系明显降低。骨髓检查示镜下可见噬血细胞现象。NK细胞活性降低，血清铁蛋白值增高，可溶性CD25水平增高。头颅MRI示桥脑右后份、左侧桥小脑结合臂、双侧基底节区、左侧丘脑、双侧额顶枕叶多发异常信号，脑实质发育欠饱满，双侧额颞部蛛网膜下腔增宽。脑脊液检查结果示：总蛋白、白蛋白值均增高。HLH相关基因检测及家系分析结果示：患儿1的RAB27A基因第5外显子c.272delA(p.Asp91ValfsTer11)(杂合)，第3外显子c.121delA(p.Thr41GlnfsTer44)(杂合)，分别来源于其父母，为双重杂合突变。患儿1确诊为Griscelli综合征(GS)-2相关HLH合并中枢神经系统病变。按照HLH-2004方案规律治疗1 ＋个月后，病情未缓解，经患儿监护人放弃治疗后出院。②患儿2，男性，8岁，因"发热27 d"于2016年11月14日至本院就诊。临床表现为发热，肝、脾和颈部淋巴结大。血常规结果示三系明显降低。纤维蛋白原值降低，NK细胞活性降低，血清铁蛋白值增高，可溶性CD25水平增高。EB病毒(EBV)-DNA为1.42×10 6 copies/mL。颈部淋巴结活检病理及免疫组化结果符合霍奇金淋巴瘤(HL)(混合细胞型)诊断。HLH相关基因突变及家系分析结果示：患儿2的PRF1基因第2外显子c.65delC(p.Pro22ArgfsX29)(杂合)和错义突变c.503G>A(p.Ser168Asn)(杂合)，分别来源于其父母，为双重杂合突变。患儿2确诊为家族性pHLH(FHL)、HL(混合细胞型)、EBV感染。患儿2接受HLH-94方案治疗后，病情获得初步控制，此后采用HL方案化疗，病程2 ＋个月时，病情加重后死亡。③患儿3，男性，13岁，因"当地医院初诊确诊HLH，间断发热4 ＋个月"于2017年1月5日至本院就诊。临床表现为发热，肝、脾大。生化检测结果示甘油三酯水平增高，纤维蛋白原值降低。骨髓检查结果示偶见噬血细胞现象。NK细胞活性降低，血清铁蛋白值增高，CD107a脱颗粒功能降低。颈部淋巴结活检病理结果示淋巴结反应性增生。HLH相关基因突变家系分析结果示：患儿3的PRF1基因第2外显子c.503G>A(p.Ser168Asn)(杂合)，来源于其父亲。患儿3确诊为FHL。患儿3于外院治疗效果不佳，于本院接受HLH-2004方案治疗27 d，病情控制后出院，建议行造血干细胞移植(HSCT)。此后，患儿未再返院复查，总病程7个月时FHL复发后死亡。 结论:对初诊淋巴结大伴EBV感染的pHLH患儿，应及早行淋巴结活检。对淋巴结大伴NK细胞活性和CD107a脱颗粒功能检测结果异常者，应进行HLH相关基因突变检测，以尽早确诊及治疗，提高pHLH患儿生存率。在此基础上，对pHLH患儿进行家系相关基因突变分析，可为遗传咨询提供依据。

目的:探讨海藻糖对小鼠放射性肠损伤的防护作用及分子机制。方法:采用简单随机抽样法将8周龄的雄性C57 BL/6 J小鼠分为4组：对照组（不给予任何处理）、海藻糖组（饮用2 g/100 ml海藻糖水）、照射组（以13 Gy剂量对小鼠腹部照射）、海藻糖＋照射组（饮用2 g/100 ml海藻糖水＋以13 Gy剂量对小鼠腹部照射），每组6只。经13 Gy照射和2 g/100 ml海藻糖饮水处理后，每天记录小鼠体重，14 d后处死小鼠并采集小鼠的血液、小肠和结肠，测量结肠长度。采用苏木精-伊红（HE）染色法和过碘酸-雪夫（PAS ）染色法评估小鼠肠道损伤程度；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清和小肠组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）的水平；小鼠小肠上皮MODE-K细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、细胞凋亡检测实验、活性氧测定实验和DNA损伤检测实验分别检测细胞活力、细胞克隆形成能力、细胞凋亡率、活性氧水平和DNA双链断裂数量；实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法和Western blot法分别检测自噬相关基因mRNA和蛋白水平的表达情况。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:动物实验结果显示，与照射组比较，海藻糖＋照射组可显著缓解电离辐射（IR）后小鼠体重的下降，并可促进其恢复（ t=4.064 ， P<0.05 ），且小鼠结肠缩短程度较轻，2组间的差异有统计学意义（ t=4.044 ， P<0.05 ）。HE和PAS染色法评估结果显示，海藻糖可缓解IR后小鼠小肠黏膜损伤，与照射组比较，海藻糖＋照射组小鼠绒毛较长、隐窝较深、杯状细胞数量较多，2组间的差异有统计学意义（ t=4.373、8.414、6.515，均 P<0.05 ）。ELISA检测结果显示，与照射组比较，海藻糖＋照射组可显著降低IR后小鼠血清及小肠组织中TNF-α和IL-6的水平，且差异均有统计学意义（ t= 4.475、8.686、3.993、6.007，均 P<0.05）。细胞增殖和克隆实验结果显示，与照射组比较，海藻糖＋照射组可促进IR后小鼠小肠上皮MODE-K细胞活性和克隆形成能力[（0.885±0.127）对（0.644±0.151）、（97.330±5.937）对（64.000±7.324）]，且差异均有统计学意义（ t=2.566、4.411，均 P<0.05 ）；细胞凋亡检测实验结果显示，与照射组比较，海藻糖＋照射组可抑制IR后小鼠小肠MODE-K细胞凋亡率[（15.270±0.647）%对（9.334±0.854）%]，且差异有统计学意义（ t=8.315 ， P<0.05 ）；活性氧测定实验和DNA损伤检测实验结果显示，与照射组比较，海藻糖＋照射组可降低IR后小鼠细胞内ROS水平和DNA双链断裂数量（ t=8.884、4.802，均 P<0.05 ）。qRT-PCR法和Western blot法检测结果显示，与照射组比较，海藻糖＋照射组小鼠小肠组织和MODE-K细胞中自噬相关基因TFEB、MAP1LC3B的表达水平显著增加[（208.210±26.143）对（8.986±5.362）、（13.970±4.587）对（5.815±1.873）] ，且差异均有统计学意义（ t=8.875 ，8.461，均 P<0.05 ）。 结论:海藻糖通过调控转录因子EB介导的自噬反应激活缓解小鼠放射性肠损伤。