钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体引起的人畜共患病，人类主要通过接触受污染的河流、湖泊或接触携带钩端螺旋体的动物而感染。该病临床种类较多，可表现为发热、乏力、全身酸痛等感染征象和多脏器功能受累的临床特征。本文报道1例以呼吸困难和咯血为主要症状的肺出血型钩端螺旋体病，误诊为肺结核，而后通过痰液宏基因组二代测序确诊，经过有效的抗感染和呼吸支持治疗，预后良好，供临床参考。

目的:对贵州省钩端螺旋体（钩体）病疫区不明原因发热病例进行钩体分离鉴定和分子分型，了解其病原学特征，为当地钩体病的防治提供病原学依据。方法:采集贵州省钩体病疫区黔东南州黎平县不明原因发热病例血液和尿液标本进行钩体分离培养，对分离的钩体疑似菌株通过致病性钩体G1/G2-PCR方法进行初步鉴定，进一步采用钩体血清群特异PCR进行分群鉴定，然后采用多位点序列分型（MLST）技术对其进行分子分型，并与国内常见血清群参考菌株进行聚类分析。结果:从35例发热病例血液中分离得到3株钩体疑似菌株，分离率为8.6%，分别命名为17BX002、17BX003和17AJX008；3株菌株经钩体特异性G1/G2-PCR鉴定为致病性钩体；钩体血清群PCR鉴定显示，17BX002株为流感伤寒群钩体，其余2株菌为阴性（排除其为黄疸出血群、赛罗群、犬型、秋季群、流感伤寒群和七日热群）；进一步的MLST显示，17BX002株为ST106型，与流感伤寒群聚类最近，而其余2株为ST96型，与巴达维亚群菌株一致。结论:高发季节贵州省疫区不明原因发热病例中存在钩体感染病例，流感伤寒群和巴达维亚群为贵州省新发现钩体菌群。

本文报道2022年1例钩端螺旋体病例，对其血清样本测定急性期与恢复期IgM与IgG抗体，进行病原学核酸检测、23S rDNA测序、同源性比对，并用R软件构建进化树。病原学特异性诊断结果显示患者第3天血清中钩端螺旋体核酸检测结果阳性，其基因型为博氏钩端螺旋体，与舟山市普陀区3号、4号、7号家鼠肾中博氏致病性钩端螺旋体序列以及上海交通大学家鼠肾中的博氏钩端螺旋体(CP012029)的23S rDNA序列100%同源。根据患者急性期血清与恢复期血清中的钩端螺旋体IgM与IgG可判断为新近感染了致病性钩端螺旋体。本研究分析该例钩端螺旋体分子生物学特征，以期为临床提供参考。

钩端螺旋体病（leptospirosis）简称钩体病，是由致病性钩端螺旋体引起的一种急性全身性感染性疾病，属于人兽共患的自然疫源性传染病。传染源主要是鼠类、犬、猪、牛和羊等动物，人通过接触被污染的水、土壤被感染 [1]。典型表现为三症状（发热、肌肉酸痛、乏力）以及三体征（结膜充血、腓肠肌酸痛、淋巴结肿大）。我国钩体病发病以南方为主，近10年大部分病例属于散发病例 [2]，导致部分医务人员特别是年轻医生对钩体病认识不足，易漏诊、误诊。本文对本院通过高通量测序确诊并救治成功的1例钩端螺旋体病进行报道，以提醒广大临床医师在接诊时注意鉴别，同时在诊断方法上提供新的思路。

目的:确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA2404基因产物为Sigma N转录因子，鉴定Sigma N信号系统参与调控的下游靶基因。方法:采用生物信息学软件并根据Sigma N调控基因启动子序列特征，预测并分析钩体基因组中LA2404基因及其调控的靶基因。采用等位交换原理构建问号钩体LA2404基因敲除株(ΔLA2404)。采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测ΔLA2404敲除株中候选靶基因mRNA水平变化。构建LA2404基因原核表达系统并提纯目的重组蛋白(rSigma N)。采用凝胶迁移试验(gel electrophoresis mobility shift assay, EMSA)验证Sigma N调控的靶基因。结果:致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株有一个Sigma N编码基因以及22个含Sigma N启动子序列的靶基因。ΔLA2404敲除株有钩体典型、活泼的运动方式，外形无明显变化。ΔLA2404敲除株中LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773基因mRNA水平显著下调( P<0.05)，其他靶基因mRNA水平无明显变化。EMSA结果显示，rSigma N可与上述靶基因启动子序列结合。 结论:LA2404基因产物为Sigma N调控基因。LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773的启动子序列能与转录因子Sigma N结合，上述7个基因表达受Sigma N通路调控。

致病性螺旋体的独特侵入、定植、播散和在宿主体内持续生存能力与其表面黏附素密切相关.螺旋体黏附素主要功能是介导其对宿主细胞外基质成分、细胞表面受体、宿主血清和细胞外液成分的黏附.螺旋体黏附素在免疫中的重要作用包括诱导保护性免疫、激活炎症反应,以及通过抗原变异和补体抵抗,导致螺旋体免疫逃逸和形成持久性感染.本文综述了梅毒螺旋体、问号钩端螺旋体和伯氏疏螺旋体的主要黏附素在致病和免疫中作用的研究进展,为深入了解螺旋体的致病机制和设计新型螺旋体疫苗提供依据.

目的 通过对铜陵市鼠形动物病原体感染情况的调查,为本地鼠媒传染病控制提供科学依据.方法 2022 年 1 月至 12 月,在安徽省铜陵市枞阳县、义安区、铜官区和郊区进行鼠类监测和标本采集,利用荧光定量PCR方法对其脾、肝、脾、肺组织中汉坦病毒、大别班达病毒、嗜吞噬细胞无形体和致病性钩端螺旋体等4种病原体进行检测、分析.结果 共捕获234 只鼠形动物,病原总检出率为4.27%,汉坦病毒和致病性钩端螺旋体检出率均为 2.14%;汉坦病毒在黄胸鼠和褐家鼠中检出率为 3.77%和 1.59%,在不同生境中,重点行业鼠形动物中汉坦病毒检出率为 6.67%,农村居民区为 2.15%;致病性钩端螺旋体在北社鼠、褐家鼠和黄胸鼠中检出率依次为 8.33%、4.76%和 0.94%,在不同生境中,农田耕地鼠形动物中致病性钩端螺旋体检出率为6.25%、农村居民区为 2.15%.结论 铜陵市鼠形动物中存在病原体感染,需加强鼠类防制及鼠媒传染病控制,以降低人群感染风险.

目的 依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022),建立Leptospira interrogans、L.borgpetersenii,L.alexanderi和L.weilii 4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株.方法 以56601、56604、56615、566554株致病性代表菌株为研究对象,利用暗视野显微镜开展形态学观察.以16SrRNA基因为靶基因进行聚合酶链式反应扩增、测序确定所属基因种.通过多位点序列分型(MLST)方法,对4株代表株进行分子分型分析,确定每株菌株7个位点等位基因号和序列型别(ST).综合暗视野显微镜形态学观察、16SrRNA基因测序和MLST分型结果系统评价4株代表菌株经不同传代次数后的分子遗传学稳定性.同时通过Illumina NovaSeq测序平台对56604、56615和56655开展全基因组测序分析,了解菌株基因组特征.结果 暗视野显微镜下,4株代表菌株均具有典型的钩端螺旋体形态.16SrRNA基因序列分析显示,56601、56604、56615 和 56655 分别隶属于 L.interrogans、L.borgpetersenii、L.alexanderi 和 L.weilii 4 种不同致病性基因种.MLST 分型结果显示4株代表株隶属于4种不同ST型.4株代表株在亲代株及在体外连续传代一定代次后,暗视野显微镜下形态不变,所属基因种和MLST基因型结果一致,证明该4株代表株具有良好的分子遗传学稳定性.基因组测序分析显示,4株代表株基因组大小为3.93～4.69 Mb之间,G+C含量为36.00％～40.87％.结论 初步建立并评价了 4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株,为钩端螺旋体病的疾病控制、临床诊断、教学科研、疫苗研发提供菌株资源.

目的 了解并确定问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株LA2582 和LA2901 基因产物金属内肽酶活性及其致病相关性.方法 采用生物信息学软件分析LA2582 和LA2901 基因结构与功能.构建LA2582 和LA2901 基因胞外区原核表达系统,Ni-NTA 亲和层析法提纯目的重组表达产物rLA2582 和rLA2901.采用分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解偶氮酪蛋白底物的活性.采用荧光分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解Dabsyl-Leu-Gly-Gly-Gly-Ala-Edans 荧光标记五肽底物的活性并测定其Km 和Kcat 值.采用SDS-PAGE 和分光光度法分别检测rLA2582 和rLA2901 水解细胞外基质(ECM)分子Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、纤维连接蛋白(FN)和刚果红标记弹性蛋白(ELN)的活性.采用实时荧光定量RT-PCR 和Western blot 法分别检测问号钩端螺旋体赖株感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后LA2582 和LA2901 基因mRNA 和蛋白质表达水平.结果 LA2582 和LA2901 基因产物均为含信号肽和HXH 基质金属蛋白酶基序的锌离子依赖M23 家族Gly-Gly 金属内肽酶.rLA2582 和rLA2901 不能水解偶氮酪蛋白,但能水解荧光五肽底物,其Km 和Kcat 值分别为126. 54μmol/ L 和4. 67/ s 、190. 25 μmol/ L 和4. 86/ s .rLA2582 和rLA2901 具有水解COL1、FN 和ELN 的活性.问号钩体赖株感染HUVEC 后,LA2582 和LA2901 基因mRNA、蛋白质表达水平均显著升高(P<0. 05).结论 问号钩体赖株LA2582 和LA2901 基因产物是具有水解ECM 分子活性的锌离子依赖M23 金属内肽酶,与问号钩体侵袭力密切相关.

目的 确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA3304基因产物DAC合成c-di-AMP的活性,LA3303基因产物CdaR增强DAC酶活.方法 采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA3304基因,并构建其原核表达系统.Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rDAC.采用高效液相色谱法(HPLC)检测rDAC环化ATP底物为c-di-AMP的活性.采用细菌双杂交法检测CdaR与DAC相互作用情况.构建细菌共表达系统,结合HPLC法检测CdaR增强DAC酶活情况.结果 所构建的问号钩体赖株LA3304基因原核表达系统在IPTG诱导下能高效表达rDAC,Ni-NTA亲和层析法提纯的rDAC经SDS-PAGE后显示为单一蛋白条带.rDAC具有体外合成ATP底物为c-di-AMP的功能.CdaR与DAC存在相互作用,CdaR可显著增强DAC酶活(P<0.05).结论LA3304基因产物DAC具有c-di-AMP合成酶活性,CdaR可增强DAC活性,并与DAC构成CdaR-DAC信号系统,共同参与调节钩体c-di-AMP合成.