目的:观察糖尿病模型小鼠睑板腺形态和功能及睑板腺组织中炎性因子和脂类代谢因子的表达变化。方法:采用随机数字表法将清洁级8周龄雄性C57BL/6小鼠50只分为正常对照组20只和糖尿病模型组30只。采用腹腔内注射10 mg/ml链脲佐菌素法制备糖尿病模型，鼠尾静脉血糖≥16.7 mmol/L视为造模成功，每周监测血糖，对比2个组小鼠体质量，每4周2个组任意选取10只小鼠行角膜荧光素钠染色评估角膜上皮完整性，于造模后8周和16周每组任意选取5只小鼠取睑板腺组织，行苏木精－伊红染色观察组织形态学变化；造模后16周每组任意选取5只小鼠对睑板腺组织行油红O染色对比观察睑酯分布情况；造模后16周，采用实时荧光定量PCR法检测睑板腺组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、色素上皮衍生因子(PEDF)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂类分化相关蛋白(ADFP)mRNA的相对表达量。结果:糖尿病模型组小鼠成模率为100%，饲养过程中存活率为83.3%(25/30)。糖尿病模型组小鼠造模后8周和16周体质量均较同期正常对照组明显降低，血糖较同期正常对照组升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。糖尿病模型组不同时间点角膜荧光素钠染色评分值比较差异有统计学意义( F＝27.155， P<0.05)。造模后16周糖尿病模型组睑板腺导管管壁变薄，管腔扩大，腺泡膨胀，睑板腺大部分腺泡内油红O着染。造模后16周，糖尿病模型组睑板腺组织中TNF-α和PPARγ mRNA相对表达量分别为3.33±0.91和1.55±0.25，明显高于正常对照组的1.00±0.16和1.00±0.27，PEDF mRNA相对表达量为0.42±0.08，明显低于正常对照组的1.00±0.34，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；2个组间ADFP mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义( t＝0.943， P＝0.38)。 结论:TNF-α、PEDF和PPARγ可能参与糖尿病诱导睑板腺功能障碍的发生。

新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)是老年人群主要的致盲眼病之一，早发现、早治疗尤为重要。目前，nAMD的治疗主要为抗血管内皮生长因子(VEGF)和激光治疗等对症疗法，这并不能解决nAMD持续性活动的问题，反复治疗增加患者的经济负担，也增加了眼压升高、炎症反应等并发症的发生。近年来，基因疗法的广泛应用为nAMD的治疗带来了更多可能。它以病毒为载体，将目的基因cDNA与载体组合，利用病毒感染宿主细胞的特点，实现了目的基因在宿主细胞内的表达。在动物实验成功的基础上，国内外学者相继开展Ⅰ期、Ⅱ期临床试验，其靶点有色素上皮衍生因子、RNA干扰、可溶性VEGF受体-1、内皮抑素和血管抑素、抗人VEGF抗体片段、可溶性CD59、阿柏西普、补体因子Ⅰ等，取得了一定的成效，但也暴露出一些问题。本文就基因疗法治疗nAMD的机制、临床试验研究进展及存在的问题进行综述，并提出未来基因疗法的前景展望。

内源性色素上皮衍生因子（PEDF）因其所具有的抗血管生成作用、抗炎作用和神经保护、神经营养作用展示出作为治疗糖尿病视网膜病变（DR）药物靶点的巨大潜力。PEDF通过与细胞膜表面的受体蛋白结合，调控多种信号通路从而发挥其生物学作用。低密度脂蛋白受体相关蛋白6发挥抑制DR氧化应激反应、炎症反应和新生血管的作用，脂肪三酰甘油脂肪酶、层粘连蛋白受体、丛状蛋白结构域（PLXDC）1、PLXDC2和F1-腺嘌呤核苷三磷酸合酶均具有促进内皮细胞凋亡的作用，其中PLXDC1还具有神经保护作用。通过明确PEDF所作用的受体，探究受体与PEDF的亲和能力、疾病过程中各受体表达水平的差异，以及PEDF与特定受体结合后所发挥的特定功能，能针对受体高亲和性的活性结构域开发融合蛋白类药物，对DR的发病机制进行更清晰的理解，以PEDF或PEDF受体为靶点，夯实DR新治疗药物与治疗方法研发的理论依据。

目的 探讨康柏西普联合血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)受体抑制剂对CoC12诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞增殖、迁移以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA及蛋白表达的影响.方法 体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞,用不同浓度CoCl2诱导培养,细胞增殖与CCK-8法检测ARPE-19细胞增殖活性,筛选最佳CoCl2浓度用于构建缺氧模型;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、不同浓度康柏西普组,CCK-8法检测不同浓度康柏西普对缺氧损伤后ARPE-19细胞增殖的影响,筛选最佳康柏西普浓度;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、不同浓度PDGF受体抑制剂组,CCK-8法检测不同浓度PDGF受体抑制剂对缺氧损伤后ARPE-19细胞增殖的影响,筛选最佳PDGF受体抑制剂浓度;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、20 mg·L-1康柏西普组、20 μmol·L-1PDGF受体抑制剂组、康柏西普联合PDGF受体抑制剂组(最佳药物浓度组合);CCK-8法检测缺氧损伤后各组ARPE-19细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞的迁移情况,ELISA法检测细胞上清液中VEGF蛋白浓度,应用实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF mRNA的表达水平.结果 CCK-8筛选结果显示,100 μmol·L-1 CoCl2处理组ARPE-19细胞的吸光度值最大(1.063±0.031),设立为缺氧细胞模型浓度.CCK-8筛选结果显示,20 mg·L-1康柏西普组细胞增殖率为(94.58±3.80)％、20μmol· L-1PDGF受体抑制剂组细胞增殖率为(96.72±5.44)％,效果均较其他相应组好,选取该浓度进行后续实验.析因分析发现缺氧损伤后各药物处理组(康柏西普、PDGF受体抑制剂、康柏西普联合PDGF受体抑制剂)与缺氧组比较,细胞增殖活性下降,细胞迁移数降低,VEGF蛋白浓度亦下降,其中康柏西普联合PDGF受体抑制剂组下降最明显,康柏西普组及两药联合处理组ARPE-19细胞VEGF mRNA表达较缺氧组降低.结论 缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞增殖、迁移,VEGF蛋白相对表达量增加,VEGF mRNA表达上调;康柏西普联合PDGF受体抑制剂对缺氧损伤后ARPE-19细胞的增殖、迁移及VEGF蛋白、VEGFmRNA的表达有抑制作用,作用效果优于单独应用康柏西普.

色素上皮衍生因子(PEDF)是具有多种生物学活性的内源性糖蛋白,包括抑制新生血管生成、营养和保护神经元等.最近的研究表明PEDF能够通过抑制血管内皮生长因子(VEGF)的活性来抑制眼部血管的增生和肿瘤血管的生成,同时PEDF还能通过多种信号通路抑制神经退行性病变的发生.文章就PEDF的多种生物学活性以及发挥作用的相关信号通路做一综述,另外结合PEDF的受体深入探讨了其发挥生物学活性的可能机制.

目的 探讨内皮细胞表达的整合素αvβ3在基质细胞衍生因子-1(stromal derived factor-1,SDF-1)/趋势化因子受体4(chemokine receptor4,CXCR4)调控脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)生成过程中的作用.方法 (1)体内动物实验:采用激光诱导C57BL/6J小鼠CNV模型,实验分为4组:单纯CNV组(对照组)、CNV后立即玻璃体内注射SDF-1组(SDF-1组)、CNV后立即玻璃体内注射SDF-1+ CXCR4抑制剂AMD3100组(SDF-1+ AMD3100组)和CNV后立即玻璃体内注射SDF-1+ αvβ3抑制剂SB273005组(SDF-1+ SB273005组).实时定量PCR观察小鼠激光诱发CNV后1d、3d、5d、7d、10 d、14 d CXCR4和αvβ3的表达;免疫荧光染色观察4组处理后CNV局部及内皮细胞上αvβ3的表达;OCT观察4组处理后CNV中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层隆起高度.(2)体外细胞实验:Westem blot检测正常对照组、Si-CXCR4敲减组和Si-NC模拟敲减组RF/6A细胞中CXCR4蛋白的表达,同时检测对照组、SDF-1组、SDF-1+ AMD3100组、SDF-1+ Si-NC组和SDF-1+ Si-CXCR4组中整合素αvβ3蛋白的表达.Transwell检测正常对照组、SDF-1组、SDF-1+AMD3100组和SDF-1+SB273005组的细胞迁移能力.结果 (1)体内动物实验:实时定量PCR显示随着CNV诱导后时间的增加,CXCR4 mRNA和整合素亚基β3 mRNA表达开始增加,CXCR4 mRNA在CNV后3d表达量最高(4.263±0.464),β3 mRNA在CNV后7d表达量最高(3.678±0.364),随后开始下降.免疫荧光结果显示:SDF-1组β3荧光强度显著增加,β3/CD31比率也明显增加,显著高于CNV对照组(P＜0.01);而SDF-1+ AMD3100组和SDF-1+ SB273005组β3荧光强度和β3/CD31比率显著减弱(P＜0.05).OCT显示SDF-1组RPE层的隆起明显升高(135.503±10.301) μm,显著高于CNV对照组(94.443±12.156) μm(P ＜0.05);而SDF-1+AMD3100组和SDF-1+ SB273005组RPE隆起的高度显著降低(95.283±20.062) μm和(99.807±10.403) μm(P＜0.05).(2)体外细胞实验:SDF-1组和SDF-1+ Si-NC组整合素亚基β3蛋白的表达均升高(1.301±0.043)、(1.273±0.077),显著高于对照组(0.244±0.069)(P＜0.01);SDF-1+ Si-CXCR4组和SDF-1+ AMD3100组整合素亚基β3蛋白的水平显著下降(0.322±0.042)、(0.336±0.077)(P＜0.01).Transwell检测显示SDF-1组细胞迁移量增多显著高于对照组,而SDF-1+AMD3100组和SDF-1+ SB273005组迁移细胞的数量明显减少.结论 整合素αvβ3在内皮细胞中通过介导SDF-1/CXCR4信号转导,促进CNV的发生发展.

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖及相关因子表达的影响.方法 体外培养人RPE细胞,设阴性对照组,40 mg·L-1、80 mg·L-1、160 mg· L-1 EGCG3个浓度药物处理组.利用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21和P27 mRNA的表达,Western blot检测色素上皮衍生因子受体(pigment epithelium derived factor recep-tor,PDGFR-α)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和IκB蛋白的表达情况.结果 MTT实验结果显示,40 mg·L-1、80 mg·L-1、160 mg·L-1 EGCG药物处理组随着作用时间的延长,对人RPE细胞的增殖抑制作用也逐渐增强;随着药物浓度的增加,EGCG的增殖抑制作用也增强(均为P＜0.05).160 mg·L-1的EGCG在72 h的细胞增殖抑制率达到81.11％.随着EGCG浓度的增加,培养的人RPE细胞中G1期和G2期细胞比例减少,S期细胞比例增加,80 mg·L-1、160 mg·L-1EGCG药物处理组S期细胞比例与阴性对照组相比增加极显著(均为P＜0.05).EGCG对细胞周期的影响作用具有明显的剂量依赖性.与阴性对照组相比,80 mg·L-1、160 mg·L-EGCG药物处理组细胞内的P21和P27 mRNA表达均有不同程度的升高(均为P＜0.05);40 mg·L-1 EGCG药物处理组与阴性对照组相比,P27 mRNA表达也增高(P=0.015),而P21 mRNA表达增高不明显(P=0.824).P21和P27 mRNA表达量与EGCG浓度呈明显量效依赖关系(均为P＜0.05).Western blot结果显示,40 mg·L-1、80mg· L-1、160 mg·L-1 EGCG作用人RPE细胞后,NF-κB蛋白表达随着浓度的增加而减少,各药物处理组与阴性对照组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).80 mg·L-1、160 mg·L-1 EGCG亦能够抑制人RPE细胞IκB蛋白和PDGFR-α蛋白表达,与相应阴性对照组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).EGCG对人RPE细胞内PDGFR-α、NF-κB和IκB的蛋白表达抑制作用呈明显的浓度依赖性(均为P ＜0.05).结论 EGCG可以有效地抑制人RPE细胞的增殖,其机制可能与EGCG将人RPE细胞阻滞于S期,上调P21及P27 mRNA表达,下调PDGFR-α、NF-κB和IκB蛋白表达有关.

目的:探究白藜芦醇(RSV)对缺血缺氧诱导的新生大鼠脑神经元凋亡及基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)通路的作用和机制.方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,给予氧糖剥夺(OGD)模拟新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)模型.首先将细胞随机分成4组:对照(control)组、HIE组、HIE+RSV低剂量(10μmol/L)组和HIE+RSV高剂量(50μmol/L)组.OGD处理2 h后加入相应剂量的RSV继续培养24 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白及SDF-1和CXCR4的蛋白表达水平,real-time PCR检测SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平.然后使用CXCR4抑制剂AMD3100与RSV共同处理OGO损伤的细胞24 h,检测SDF-1/CXCR4通路阻断后RSV对细胞凋亡和凋亡相关蛋白表达水平的影响.结果:RSV能够抑制OGD诱导的神经元凋亡,下调活化的caspase-3和细胞色素C的水平,上调Bcl-2/Bax比值(P<0.05).与对照组相比,OGD导致SDF-1和CXCR4表达增加;与模型组相比,RSV能够上调SDF-1和CXCR4的表达(P<0.05);使用AMD3100阻断SDF-1/CXCR4通路减弱了RSV抑制OGD诱导的细胞凋亡的作用.结论:RSV可抑制缺血缺氧诱导的新生大鼠神经元凋亡,其机制可能是通过上调SDF-1/CXCR4通路发挥作用的.

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)及受体在皮脂腺细胞系SZ95细胞的表达.方法 采用RT-PCR法检测SZ95细胞中PEDF及受体的mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测PEDF及受体蛋白的表达,同时免疫荧光法定位其在SZ95细胞中的表达情况.使用不同浓度双氢睾酮(DHT)作为刺激因子作用于SZ95细胞,实时定量PCR (qPCR)和免疫印迹法检测PEDF mRNA和蛋白水平变化.结果 RT-PCR发现PEDF及受体在SZ95细胞中均有表达,蛋白免疫印迹发现PEDF及受体蛋白质相对分子质量分别为50KD和55KD.PEDF主要表达在细胞浆内,PEDF受体主要表达在胞膜上.10μmol/L和100μmol/L DHT作用48h后,SZ95细胞PEDFmRNA和蛋白水平明显降低.结论 在mRNA及蛋白质水平,SZ95细胞均表达PEDF及受体,雄激素可降低SZ95细胞PEDF表达.

背景:系统性红斑狼疮合并股骨头坏死是由于长期大剂量应用皮质类固醇糖皮质激素造成股骨头活性成分死亡的病理过程,但其早期诊治缺乏特异的生物标志物.目的:应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)筛选系统性红斑狼疮合并激素性股骨头坏死的血清标志物.方法:分别收集系统性红斑狼疮合并激素性股骨头坏死患者血清8例(实验组)、系统性红斑狼疮使用激素后无股骨头坏死的患者血清(对照组)10例,采用iTRAQ联合二维液相色谱-串联质谱技术(2D-LC-MS/MS)对差异蛋白质进行筛选与鉴定.结果与结论:①共鉴定出10种差异蛋白质,与对照组相比有统计学差异,其中实验组中铜篮蛋白、免疫球蛋白IgG、免疫球蛋白κ链、补体C2等4种蛋白表达上调;内皮细胞蛋白C受体、人源性激肽释放酶结合蛋白、色素上皮衍生因子、四连接素、胰岛素样生长因子2、甲状腺素运载蛋白等6种蛋白表达下调;②KEGG通路分析提示以上10个蛋白与Wnt信号通路、补体与凝血级联反应、系统性红斑狼疮这3条信号通路密切相关;③结果说明,通过蛋白质组学技术成功得到了可靠的激素性股骨头坏死血清差异蛋白质,为激素性股骨头坏死的诊断及其发病机制提供了理论依据.