目的:观察穴位贴敷对支气管哮喘（bronchial asthma，BA）小鼠皮肤、肺组织中瞬时受体电位阳离子通道香草酸亚家族成员1（TRP cation channel subfamily V member 1，TRPV1）表达及血清中IFN-γ、IL-4水平的影响，探讨穴位贴敷治疗哮喘的机制。方法:将75只BALB/c小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、穴位贴敷组、假贴敷组、地塞米松组，每组15只。采用屋尘螨滴鼻法制备BA小鼠模型。造模结束后，取小鼠双侧“肺俞”“心俞”“膈俞”进行穴位贴敷，穴位贴敷组贴敷药物为芥子、延胡索、细辛、甘遂药物组方，假贴敷组给予凡士林贴敷，1次/d，共贴敷14次；地塞米松组灌胃10 g/kg地塞米松，1次/d，连续干预14 d。运用EMKA-WBP肺功能检测系统检测小鼠气道阻力；天狼星红染色法、HE染色法观察小鼠肺组织病理形态改变，免疫组化法检测肺组织、皮肤组织中TRPV1表达，ELASA法检测肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4水平。结果:在浓度为12.5、25.0、50.0 mg/ml的氯化乙酰甲胆碱溶液激发后，与模型组比较，穴位贴敷组、地塞米松组小鼠气道高阻力Penh值下降（ P<0.05）；肺组织HE染色和天狼猩红染色显示气管内炎性浸润和胶原纤维增生情况改善（ P<0.05）；与模型组比较，穴位贴敷组、地塞米松组肺组织TRPV1［（0.28±0.06）、（0.28±0.05）比（0.31±0.08）］表达降低（ P<0.05）；肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4水平降低（ P<0.05）。 结论:穴位贴敷可通过诱发皮肤反应治疗哮喘，其作用机制可能与激活肺组织、皮肤组织中TRPV1，降低IFN-γ、IL-4水平有关。

目的 建立同步检测畲药树参中紫丁香苷、绿原酸、芥子醛葡萄糖苷、松柏醇、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量的高效液相色谱一测多评(HPLC-QAMS)方法,并采用多元统计分析及加权优劣解距离(technique for order preference by similarity to ideal so-lution method,TOPSIS)法对其品质进行综合评价.方法 以Waters Xbridge C18色谱柱;乙腈-0.05％甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长260 nm.以山柰酚-3-O-芸香糖苷为参照物,建立内参物与其他8个待测成分的相对校正因子(relative correction factor,RCF),进行RCF耐用 性考察及色谱峰定位,同时与外标 法实测结果进行对比,验证HPLC-QAMS法准确性和可靠性.运用主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(orthogo-nal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)等多元统计分析以及 W-TOPSIS 法对 9 个成分 HPLC-QAMS法含量结果的相关性进行分析,挖掘影响畲药树参产品质量的主要潜在标志物,建立畲药树参综合质量优劣评价方法.结果 9 种成分分别在 3.27～81.75μg/mL、9.85～246.25 μg/mL、0.43～0.75 μg/mL、0.31～7.75 μg/mL、1.58～39.50μg/mL、0.59～14.75 μg/mL、1.26～31.50 μg/mL、4.55～113.75 μg/mL 和 1.98～49.50 μg/mL 范围内线性关系良好,平均加样回收率96.82％～100.07％(RSD＜2.0％);HPLC-QAMS和外标法(ESM)含量测定结果差异无统计学意义(P＞0.05),HPLC-QAMS法可用于畲药树参多组分定量控制;多元统计分析结果显示,前2个主成分累计方差贡献率89.589％,绿原酸、紫丁香苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸是影响畲药树参产品质量的主要潜在标志物;加权TOPSIS法结果显示浙江地区所得畲药树参质量最优,其次为江西、安徽、湖南和湖北产树参,云南和贵州产树参位于排名后4位.结论 所建立的HPLC-QAMS多组分定量控制方法,操作便捷、结果准确;多元统计分析联合加权TOPSIS法全面客观,可用于畲药树参品质的综合评价.

目的:探讨由氟化聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)衍生物构成的纳米胶束的构建、表征及其在跨血-脑屏障(blood-brain barrier,BBB)进行基因递送中的作用.方法:使用PEI和七氟丁酸酐(heptafluorobutyric anhydride,HFAA)通过化学反应合成PEI-HFAA,随后通过酰胺反应连接芥子酸(sinapicacid,SA)得到产物PEI-HFAA-SA(简称SPF),最终在SPF外包裹聚山梨酯80(polysorbate 80,PS80)得到最终产物PEI-HFAA-SA@PS80(简称SPFT).通过傅里叶变换红外吸收光谱、核磁共振氟谱和核磁共振氢谱等对SPFT的分子键和元素组成进行分析,并通过动态光散射实验、琼脂糖凝胶阻滞实验和扫描电镜观察对其水合直径、质粒吸附及保护能力、载体质粒复合体的稳定性和形貌进行进一步表征.探究SPFT在小鼠神经胶质瘤细胞Neuro 2a中的基因转染效率和细胞毒性,通过尾静脉注射携带绿色荧光蛋白表达质粒的SPFT至C57BL/6J小鼠中,观察其在脑组织中的分布情况以及BBB内细胞的基因转染效果.结果:以SA和HFAA修饰以及PS80包裹的方法合成了 SFPT.检测结果显示,SPFT水动力粒径100～200 nm,并且对质粒有一定的携带和保护作用.SPFT携带质粒在体外表现出良好的转染能力和生物相容性.体内实验显示,尾静脉注射后的SPFT在小鼠大脑中有聚集现象,能够携带质粒穿越BBB并进行基因递送.结论:SPFT具有一定生物相容性和良好的穿越BBB及基因递送能力,为脑部疾病的治疗药物递送提供了新的思路.

目的 优化银星养脑方醇提工艺.方法 基于单因素实验,以乙醇浓度、提取时间、提取溶剂倍数为影响因素,采用Box-Behnken响应面法,以阿魏酸、3,6'-二芥子酰基蔗糖、金松双黄酮、异银杏素的转移率和浸膏得率为评价指标,结合G1-熵权法计算综合评分,优选银星养脑方最佳醇提工艺.结果 建立了工艺评价函数模型,模型预测最佳提取工艺为6倍量60％的乙醇提取1.4 h,提取2次.结论 该提取方法稳定可行,可为银星养脑方的批量生产提供参考.

目的:优化芥子微波和恒温鼓风烘烤炮制工艺.方法:建立白芥子苷含量测定方法;按照析因设计试验法,通过CRITIC法计算外观性状、芥子碱硫氰酸盐和白芥子苷3个指标的权重系数,以综合评分为指标,考察微波火力、恒温鼓风烘烤温度、加热时间对炮制品的影响,选出2种炮制工艺的最佳炮制品;通过噻唑蓝(MTT)比色法考察最佳炮制品与传统文火清炒炮制品对HaCaT细胞活力的影响.结果:芥子微波大火加热2 min、150℃恒温鼓风烘烤30 min得到的炒芥子综合评分最高,芥子碱硫氰酸盐含量符合2020年版《中华人民共和国药典》要求;与传统炮制品比较,白芥子苷含量更高,在800μg/mL浓度时对HaCaT细胞均无明显毒性.结论:微波、恒温鼓风烘烤芥子炮制工艺合理、可行、易操作,可为炒芥子的规范化生产提供参考依据.

目的 同时测定三子养亲汤中3,6'-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、阿魏酸、芥子酸、咖啡酸、木犀草素、原告依春、芹菜素、异鼠李素、原儿茶醛的含量,并考察其对胰脂肪酶的抑制作用.方法 高效液相色谱-串联三重四级杆质谱(HPLC-QQQ-MS/MS)分析采用Halo-C18色谱柱(2.1 mm× 100 mm,2.7 μm);流动相水(含0.05％甲酸)-乙腈(含0.05％甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温25 ℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式.采用分子对接进行模拟,对硝基苯酚法评价抑制作用.结果 11种成分在各自范围内线性关系良好(R2＞0.992 0),平均加样回收率85.79％～117.52％,RSD 0.78％～3.73％.3,6'-二芥子酰基蔗糖、咖啡酸、芥子酸和原儿茶醛与胰脂肪酶具有良好的亲和力,三子养亲汤、咖啡酸、芥子酸、原儿茶醛IC50值分别为41.16 mg/mL、4.006 mmol/L、6.798 mmol/L、10.48 mmol/L.结论 该方法稳定可靠,可为具有胰脂肪酶活性抑制作用的三子养亲汤质量控制提供理论基础.

芥子碱是一种广泛存在于十字花科植物中的季铵盐型生物碱,具有多种生物活性.芥子碱可通过抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭,逆转肿瘤细胞多药耐药发挥抗肿瘤作用;通过抑制RAAS的活化及改善血管内皮功能障碍发挥心血管保护作用;通过松弛支气管平滑肌、降低炎症因子水平治疗呼吸系统疾病.鉴于芥子碱在肿瘤、心血管系统疾病及呼吸系统疾病治疗中的良好的效果,其具有被开发为多种疾病治疗药物的潜力.

[目的]利用化学激发子提高植物抗虫性从而抑制害虫,是目前正在开发的一种新型的害虫绿色防治技术.本研究旨在解析一种化学激发子——多效唑(paclobutrazol,PBZ)提高水稻Oryza savita对稻飞虱抗性的机理,以期为其在害虫防控中的应用打下基础.[方法]用不同浓度PBZ以根吸的方法处理秀水110品种水稻24 h后接入褐飞虱Nilaparvata lugens和白背飞虱Sogatella furcifera初孵若虫,测定接虫后不同时间若虫存活率;用含有5和10 mg/L PBZ或者防御化合物[咖啡酰腐胺、刺苞菊苷和樱桃苷(1和10 mg/L)及芥子酰胍丁胺(0.1和1 mg/L)]的稻飞虱人工饲料饲喂以及用5和20 mg/L PBZ溶液喷施褐飞虱若虫后,测定褐飞虱若虫存活率;5 mg/L PBZ根吸处理水稻、褐飞虱若虫为害和5 mg/L PBZ根吸处理水稻再接褐飞虱若虫后,测定水稻体内水杨酸(salicylic acid,SA)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)和乙烯(ethylene,ET)以及防御化合物芥子酰胍丁胺、咖啡酰腐胺、刺苞菊苷和樱桃苷的含量.[结果]与对照(根吸不含PBZ的营养液的水稻)相比,5 mg/L PBZ根吸处理水稻,接虫后3 d时褐飞虱若虫存活率降低33.3％;当 PBZ浓度达到20 mg/L时,接虫后4 d时褐飞虱若虫全部死亡,但PBZ本身对褐飞虱若虫没有直接的毒杀作用.与对照组相比,5 mg/L PBZ根吸处理24 h后不接褐飞虱为害放置24 h时水稻植株体内SA含量显著上升,5 mg/L PBZ根吸处理水稻24 h再接褐飞虱若虫为害72 h时H2O2含量显著上升,5 mg/L PBZ根吸处理24 h后不接褐飞虱为害放置48-96 h、褐飞虱为害24-72 h及5 mg/L PBZ根吸处理水稻24 h再接褐飞虱若虫为害48-96 hET释放量均显著下降,5 mg/L PBZ根吸处理诱导了水稻植株中咖啡酰腐胺和芥子酰胍丁胺2种酚胺类化合物以及刺苞菊苷和樱桃苷2种黄酮类化合物含量的显著上升.在褐飞虱人工饲料中添加1或10 mg/L的咖啡酰腐胺、芥子酰胍丁胺、刺苞菊苷或樱桃苷,可有效降低褐飞虱若虫存活率.[结论]PBZ是一种有效的化学激发子,可以通过激活水稻的SA和H2O2通路、抑制ET通路,诱导水稻相关防御化合物的合成,提高水稻对褐飞虱的抗性.

肉桂醇脱氢酶(CAD)作为植物次生代谢尤其是木质素生物合成过程的关键酶,在调控植物生长发育和抵御生物/非生物胁迫等过程中发挥关键作用.蒙古冰草(即沙芦草(Agropyron mongolicum))耐旱耐寒,在我国北方荒漠草原区域广泛分布.为探讨CAD基因在蒙古冰草木质素合成和非生物胁迫抗性中的作用,从蒙古冰草全长转录组数据中筛选并克隆到1个CAD基因,序列长度1 083 bp,命名为AmCAD.该基因编码361个氨基酸残基,同源序列比对发现蛋白质序列保守区域含有2个Zn2+结合基序和NADP(H)辅因子结合基序,属于典型的CAD蛋白,且三维结构与AtCAD5相似.AmCAD在茎秆中高表达,对AmCAD重组蛋白的酶学性质分析表明,该蛋白对不同肉桂醛类底物均具有很强的催化能力,其中对松柏醛和芥子醛的底物亲和力更强.用不同浓度甘露醇模拟干旱胁迫,蒙古冰草AmCAD基因表达受到显著诱导.研究结果表明,AmCAD在蒙古冰草木质素合成和干旱胁迫抗性中发挥重要作用,可为提高蒙古冰草品质和抗逆性分子育种提供有价值的基因资源.

目的:建立强心合剂HPLC指纹图谱并进行多成分含量测定,考察制备过程提取、浓缩、离心、灭菌工艺对强心合剂质量的影响.方法:以强心合剂的提取液、浓缩液、离心液、合剂(灭菌后)为供试品,采用HPLC法建立强心合剂制备过程4个不同工艺阶段的指纹图谱,并进行相似度评价与色谱峰指认,测定方中槲皮素-3-O-β-D葡萄糖7-O-β-D龙胆双糖苷、芥子碱硫氰酸盐、芥子酸、大车前苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、车前草苷D 6个成分的含量.结果:10批强心合剂制备过程中不同工艺阶段的图谱与对照指纹图谱相比,相似度均大于0.90,表明生产工艺较稳定,提取液中标定18个共有峰,而浓缩、离心、灭菌后增至21个;含量测定结果显示制备过程不同工艺阶段对强心合剂质量均有不同程度的影响,其中浓缩过程影响最大.结论:该研究针对不同制备过程对强心合剂质量的影响进行探讨分析,可为中药制备过程中整体质量评价的共性技术提供数据依据和理论参考.