目的 研究土茯苓多糖对秀丽隐杆线虫脂代谢的影响.方法 以秀丽隐杆线虫为模式生物,分为对照组、奥利司他组(6 μg/mL)及土茯苓多糖低、中、高剂量组(0.25、0.5、1 mg/mL).通过苏丹黑B和和油红O染色观察线虫肠道内脂质沉积情况,荧光探针法检测线虫体内ROS水平,ELISA法检测线虫MDA、TG水平及SOD活性,RT-qPCR法检测线虫fat-2、nhr-80、sbp-1 mRNA表达,检测突变型线虫TG水平.结果 与对照组比较,奥利司他组和土茯苓多糖各剂量组线虫肠道内苏丹黑B和油红O染色变浅,脂滴密度降低,线虫体内TG水平降低(P＜0.01),且土茯苓多糖呈剂量依赖性,奥利司他组和土茯苓多糖中、高剂量组线虫体内MDA水平降低(P＜0.01),SOD活性升高(P＜0.01).土茯苓多糖高剂量组线虫体内fat-2、nhr-80、sbp-1 mRNA表达降低(P＜0.05,P＜0.01),土茯苓多糖对nhr-80(BX165)突变型线虫体内 TG 水平的影响无差异(P＞0.05).结论 土茯苓多糖可通过降低 fat-2、nhr-80 mRNA表达来减少不饱和脂肪酸的形成和氧化,缓解氧化应激,减少氧化产物产生,且能升高SOD活性,降低MDA、ROS水平,并通过降低sbp-1 mRNA表达来减少脂质的生成和积累.

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)通路探讨茯苓多糖对卵巢早衰(POF)模型大鼠的作用及其分子机制.方法 取50只SD雌性大鼠腹腔注射环磷酰胺诱导复制POF模型,随机分为5组:模型组、茯苓多糖低剂量组(100 mg/kg)、茯苓多糖高剂量组(200 mg/kg)、茴香霉素组(MAPK激活剂,10mg/kg)、茯苓多糖高剂量+茴香霉素组,每组10只;另取10只SD雌性大鼠腹腔注射等剂量生理盐水作为对照组.分组处理后分别测定各组大鼠子宫指数及卵巢指数;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组大鼠血清性激素[雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)]水平;HE染色观察各组大鼠卵巢形态;酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清及卵巢组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-18(IL-18)水平;Western blotting检测各组大鼠卵巢组织MAPK/ERK通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠卵巢间质结构有一定程度的出血和纤维化损伤,卵泡发育失常,血清FSH和LH水平、血清和卵巢组织TNF-α、IL-4、IL-18水平、卵巢组织p-p38 MAPK/p38 MAPK及p-ERK1/2/ERK1/2相对表达量均升高(P＜0.05),子宫指数和卵巢指数、E2水平均降低(P＜0.05).与模型组比较,茯苓多糖低剂量组、茯苓多糖高剂量组大鼠卵巢形态损伤及卵泡发育失常均减轻,血清FSH及LH水平、血清和卵巢组织TNF-α、IL-4、IL-18水平、卵巢组织p-p38 MAPK/p38 MAPK及p-ERK1/2/ERK1/2相对表达量均降低(P＜0.05),子宫指数和卵巢指数、E2水平均升高(P＜0.05),且茯苓多糖高剂量组效果更优(P＜0.05).茴香霉素组大鼠卵巢形态损伤及卵泡发育失常加重,血清FSH及LH水平、血清和卵巢组织TNF-α、IL-4、IL-18水平、卵巢组织p-p38MAPK/p38MAPK及p-ERK1/2/ERK1/2相对表达量均升高(P＜0.05),子宫指数及卵巢指数、E2水平均降低(P＜0.05).茯苓多糖高剂量+茴香霉素组逆转茯苓多糖作用,呈相反趋势(P＜0.05).结论 茯苓多糖可通过抑制MAPK/ERK通路的激活减轻POF大鼠炎症,从而改善其卵巢功能和性激素分泌,缓解大鼠POF症状.

目的 探究茯苓酸(PA)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠和支气管上皮BEAS-2B细胞的急性肺损伤(ALI)的作用及机制.方法 通过LPS诱导幼年Sprague-Dawley(SD)大鼠建立ALI模型后用PA治疗.通过计算肺湿/干(W/D)比率分析肺水肿改变,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测促炎细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)的水平,通过炎症细胞计数和髓过氧化物酶(MPO)活性检测中性粒细胞浸润,通过CCK-8检测BEAS-2B细胞增殖,通过蛋白质免疫印迹(WB)检测了 Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达,还检测了铁死亡相关标志物的水平.结果 与对照组相比,LPS诱导ALI加重了幼鼠炎症反应和肺水肿.与LPS组对比,PA保护了幼鼠免受LPS诱导的ALI导致的肺水肿、炎症浸润和铁死亡的损害.PA抑制LPS诱导的支气管上皮BEAS-2B细胞中的铁死亡和炎症.铁积累加重LPS诱导的ALI损伤.与Fe+LPS组相比,PA能缓解Fe堆积导致的炎症.而且PA可以上调Keap1-Nrf2/HO-1通路.结论 PA通过Keap1-Nrf2/HO-1途径减弱LPS诱导的ALI铁死亡,并且是ALI有希望的新型治疗候选药物.

目的:研究3个最佳酸水解条件对茯苓佐剂多糖PCP-Ⅱ进行水解,以期获得3个不同相对分子质量的多糖片段产物[重均分子量(Mw)接近1.0 ×104,5.0 × 103和2.5 × 103],并进行理化性质测定.方法:首先进行不同三氟乙酸(TFA)浓度、不同水解温度和不同水解时间的单因素考察.采用L9(34)正交设计进行三因素和三水平的实验和综合分析,最终确定3个最合适的酸水解条件.采用Sephadex凝胶柱色谱对水解产物进行分离和纯化,获得3个相对分子质量均一多糖片段(PCP-Ⅱ-hy-1,PCP-Ⅱ-hy-2和PCP-Ⅱ-hy-3);采用薄层色谱法分析水解产物中的单糖组成变化.采用高效凝胶渗透色谱法得到多糖相对分子质量及相对分子质量分布.采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生和毛细管电泳法测定3个多糖片段的单糖组成.结果:3 种酸水解条件(0.25 mol·L-1 TFA,80 ℃,2 h,0.25 mol·L-1 TFA,80℃,3 h 和 0.25 mol·L-1 TFA,80℃,6h)可用于3种目标水解产物的制备;多糖片段PCP-Ⅱ-hy-1的Mw为9.51 × 103,单糖组成摩尔比为岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖=1.00∶1.54∶9.05;PCP-Ⅱ-hy-2的Mw为6.39 × 103,单糖组成摩尔比为岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖=1.00∶2.04∶14.36;PCP-Ⅱ-hy-3的Mw为1.80×103,单糖组成摩尔比为岩藻糖∶甘露糖∶半乳糖=1.00∶4.55∶27.59.结论:3种酸水解条件适合目标多糖片段的产生.3个多糖水解片段随着相对分子质量的减少甘露糖和半乳糖比例逐渐增大,特别是PCP-Ⅱ-hy-3主要由半乳糖组成,推测PCP-Ⅱ骨架结构可能是半乳聚糖.

痛风性肾病是痛风及高尿酸血症常见的并发症之一,最终可发展至肾衰竭,危及生命.高血尿酸水平是痛风性肾病发病的基础,在尿酸的生理代谢过程中,尿酸转运蛋白(GLUT9、URAT1、OAT4、OAT10、GLUT12、NPT1、NPT4、OAT1、OAT2及OAT3等)在促进尿酸排泄方面发挥了重要作用,同时也是目前研究降尿酸药物的关键靶点之一.笔者查阅整理近3年中医药治疗痛风性肾病的相关文献,发现中药有效成分(猫须草水提物、菊苣酸、牛膝茎叶总皂苷、木犀草素、枸杞多糖、芍药花总苷、茯苓提取物及穿心莲提取物等)及中药复方(苓泽合剂、痛风宁、健脾清热利浊汤、复方芪苓配方颗粒及排酸护肾汤)在通过调节尿酸转运蛋白降低血尿酸水平方面有其独特优势,多个中药单体及复方可显著调节GLUT9、OAT1、OAT3、URAT1、ABCG2转运蛋白,降低血尿酸水平,改善高血尿酸所引起的肾组织炎症及损伤,保护肾脏.

茯苓为菌类中药,药用价值较高,临床应用广泛,配伍率高,是众多药方的组成部分,如参苓白术散、茯苓四逆散、茯苓六君子汤等,故其素有"十方九苓"之说.且茯苓也是药食同源中药,日常生活中可以做成茯苓糕或茯苓汤食用,其做为保健品食用,能够延年益寿安神,可见茯苓的市场价值很大,具有广阔的开发前景.现代研究发现,茯苓含三萜类、多糖类、甾醇类、挥发油类等多种化学成分,其中以茯苓多糖和三萜类为主,具有利水渗湿、保肝、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节等药理作用,临床上多用于治疗肾炎、结肠炎、泌尿感染、肝炎等疾病.本文对近年来国内外有关茯苓的化学成分和药理作用研究进行整理和总结,以期为该药材进一步开发应用提供基础资料和理论参考.

探讨羧甲基茯苓多糖在缓解亚慢性应激诱发的抑郁样行为中的作用.通过连续 2 周温和不可预知应激,在造模的后 7 d,每日分别用 0.1、0.2、0.4 g/kg羧甲基茯苓多糖干预模型小鼠.采用16S rRNA高通量测序法分析小鼠肠道菌群组成,ELISA法测定血清中炎性因子水平,分别用LC-MS和GC-MS法测定粪便中神经递质和短链脂肪酸含量,并通过强迫游泳、高架十字迷宫和旷场实验测定小鼠抑郁样行为.结果表明,与模型组相比,低、中剂量的羧甲基茯苓多糖均能不同程度改善抑郁样行为,并改变肠道菌群的组成,降低革兰氏阴性菌的相对丰度(P<0.05);中剂量能够显著降低血清中IL-6(P<0.01)和IL-2(P<0.05)的水平;各剂量可通过调节Lactobacillus和Parabacteroides的丰度,显著下调异戊酸、NE、5-HT以及Ach的含量,从而减少IL-6 的过量释放.综上,羧甲基茯苓多糖可通过调节肠道菌群组成,抑制肠源性异戊酸、NE、5-HT以及Ach的释放,降低抑郁症相关的炎性因子IL-6 和IL-2的水平,从而有效阻遏亚慢性应激诱发的抑郁样行为.

目的:应用生物信息学分析技术初步探索肝细胞癌(HCC)脂代谢异常差异表达基因,并结合实验验证,探讨茯苓多糖通过角鲨烯环氧酶(SQLE)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/消皮素D(GSDMD)信号通路影响细胞焦亡的分子机制.方法:(1)利用GEO、GSEA、DAVID、STRING和GEPIA数据库筛选HCC脂代谢异常差异表达基因.(2)收集HCC患者肿瘤组织(n=9)验证SQLE基因的差异表达.(3)培养人HCC细胞系HepG2,采用CCK-8法筛选茯苓多糖浓度.(4)将HepG2细胞分为对照组和茯苓多糖(800 mg/L)组,划痕实验观察细胞迁移能力,RT-qPCR检测细胞中SQLE的mRNA表达水平.(5)进一步采用构建过表达SQLE(OE-SQLE)的HepG2细胞,再用茯苓多糖处理,分为5组:对照组、过表达阴性对照(OE-NC)组、OE-SQLE组、OE-NC+茯苓多糖组和OE-SQLE+茯苓多糖组.RT-qPCR和Western blot检测SQLE和焦亡相关因子的mRNA及蛋白表达水平;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18释放水平;流式细胞术检测细胞坏死水平.结果:生物信息学分析筛选出差异表达基因SQLE.HCC患者肿瘤标本验证SQLE的mRNA表达水平显著升高(P＜0.01).800 mg/L茯苓多糖干预48 h对HepG2细胞活力具有显著抑制作用,且可显著降低SQLE的mRNA表达水平(P＜0.01).SQLE过表达后,焦亡相关因子的mRNA和蛋白表达水平、细胞坏死水平,以及LDH、IL-1β和IL-18释放水平均显著降低(P＜0.05);茯苓多糖干预后,上述指标均显著升高(P＜0.05).结论:SQLE在HCC中异常高表达;茯苓多糖可通过SQLE激活NLRP3/GSDMD焦亡通路,从而影响HCC细胞生长.

目的 探讨茯苓多糖(Poria cocos polysaccharide,PCP)对自身免疫性炎性肌病(autoimmune inflammatory myopathy,IIM)大鼠免疫系统的影响及其可能的作用机制.方法 将造模成功的40只IIM模型大鼠随机分为模型组及PCP低、中、高剂量组,各10只,另设对照组10只.PCP低、中、高剂量组大鼠分别灌胃75、150、300mg·kg-1 PCP溶液(用蒸馏水配制),对照组及模型组给予等量蒸馏水.观察各组大鼠一般情况并记录体质量;观察各组大鼠肌电图变化;用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immu-nosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;称取各组大鼠脾脏、胸腺质量并计算脾脏指数、胸腺指数;用HE染色观察骨骼肌病理学变化;评定大鼠骨骼肌病理损伤情况;用反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)分别检测大鼠骨骼肌干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF-3)、干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF-7)mRNA和蛋白表达情况.结果 与模型组比较,PCP低剂量组、PCP中剂量组和PCP高剂量组大鼠体质量、运动单位时限、波幅、脾脏指数、胸腺指数、IRF-3与IRF-7 mRNA和蛋白表达水平升高,多项波、CK、LDH、AST和骨骼肌病理评分降低(P＜0.05).与PCP低剂量组比较,PCP中剂量组和PCP高剂量组大鼠体质量、运动单位时限、波幅、脾脏指数、胸腺指数、IRF-3与IRF-7 mRNA和蛋白表达水平升高,多项波、CK、LDH、AST和骨骼肌病理评分均降低(P＜0.05),高剂量组诸项指数水平变化比中剂量组更显著(P＜0.05).结论 PCP能够调节IIM大鼠免疫功能,改善大鼠肌损伤,可能是通过激活IRF-3、IRF-7表达发挥作用的.

茯苓素有"十药九茯苓"之称,用药历史悠久,具有利水渗湿、健脾宁心的功效,临床上常用于治疗水肿尿少、痰饮眩晕、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠等症.茯苓的主要化学成分为多糖和三萜,现代药理研究表明其具有利尿、抗肿瘤、增强免疫力、抗炎、保肝、降血脂、降血糖、镇静催眠、抗病毒、抗氧化、抗疲劳、抗凝血、预防结石等广泛的药理活性.糖脂代谢紊乱严重威胁人类健康,茯苓化学成分复杂多样,可多途径、多靶点同时调节糖和脂代谢紊乱,且茯苓作为药食同源中药,安全性高,临床上常用茯苓治疗糖脂代谢紊乱相关疾病.兹就茯苓治疗糖脂代谢紊乱的中医认知、现代药理作用研究、药效物质研究、配伍复方进行阐述,提出目前研究存在的一些问题并对未来研究方向进行展望.