目的:探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及其机制。方法:以50感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞，蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达；噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用；经膜联蛋白V-藻红蛋白(Annexin V-PE)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NCI-H460细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等因子的表达，Western blot法检测其中裂解的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)因子的表达。结果:ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达；96 h时相点生长抑制率Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显高于Ad组(27.800±4.271， t＝6.508， P<0.01)、(27.130±3.341， t＝8.121， P<0.01)、(50.767±2.671， t＝19.005， P<0.01)，差异有统计学意义；Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显优于Ad-IL-24(22.967±4.933， t＝4.655， P<0.01)、Ad-ING4(23.633±4.154， t＝5.689， P<0.01)单基因组，差异有统计学意义，并呈现抑癌增效相加作用( Q＝0.93)。FCM检测结果表明，Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组作用于NCI-H460细胞72 h的诱导细胞凋亡率明显高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(16.440±0.896， t＝18.340， P<0.01)、(14.000±1.562， t＝13.255， P<0.01)、(29.660±1.519， t＝19.522， P<0.01)和Ad组(14.450±1.058， t＝13.660， P<0.01)、(12.010±1.196， t＝1.040， P<0.01)、(27.670±1.620， t＝17.082， P<0.01)，差异有统计学意义，其中Ad-ING4-IL-24组中NCI-H460细胞的细胞凋亡率明显高于Ad-IL-24(15.660±1.773， t＝8.834， P<0.01)、Ad-ING4(13.220±1.628， t＝7.858， P<0.01)单基因组，差异有统计学意义；Ad-ING4-IL-24组可明显上调bax、Caspase-3等因子的表达，下调bcl-2、Survivin等因子的表达。 结论:Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体外对NCI-H460细胞具有抑癌增效作用，其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达，下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

目的:探讨斯钙素2(STC2)基因对肝癌细胞增殖凋亡的影响并初步分析其分子作用机制。方法:2018年4月至2019年3月，采用慢病毒介导的小干扰RNA(siRNA)技术构建STC2敲减组和对照组SMMC-7721肝癌细胞株(购自中国科学院生化与细胞研究所)，应用黄色噻唑蓝(MTT)生长曲线、细胞周期测定、克隆形成实验和膜联蛋白V-别藻蓝蛋白荧光素(Annexin V-APC)染色法检测两组细胞增殖凋亡的差异，采用荧光实时定量PCR阵列(PCR Array)技术检测92个增殖凋亡相关基因在两组细胞中的表达水平差异，并且应用荧光实时定量PCR法(RT-qPCR)验证差异表达的基因，两组比较采用 t检验。 结果:STC2敲减组SMMC-7721肝癌细胞中的STC2基因表达量明显低于对照组(0.472±0.041比1.003±0.091， t＝9.207， P<0.01)，STC2敲减组细胞的增殖速率明显低于对照组(3.090±0.045比4.190±0.052， t＝27.218， P<0.01)，其集落形成数目也明显低于对照组(96.670±4.163比161.000±3.606， t＝20.232， P<0.01)。STC2敲减组细胞的凋亡水平明显高于对照组[(17.113±0.350)%比(6.397±0.350)%， t＝37.546， P<0.01]。与对照组比较，STC2敲减组细胞处于G 0～G 1期的细胞比例稍增多[(67.183±0.945)%比(64.500±0.341)%， t＝4.625， P<0.05]，S期的细胞比例则稍减少[(29.360±0.403)%比(30.777±0.640)%， t＝3.243， P<0.05]，G 2～M期细胞比例未见明显差异[(3.457±0.558)%比(4.723±0.598)%， t＝2.684， P>0.05]。PCR Array筛选和RT-qPCR验证的结果显示，STC2敲减组细胞中凋亡蛋白酶激活因子-1(APAF1)、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白同源基因(PTEN)、腺瘤性结肠息肉病基因(APC)的表达水平明显高于对照组(APAF1：2.49±0.29比1.00±0.03， t＝8.724， P<0.05；PTEN：2.10±0.15比1.00±0.06， t＝11.888， P<0.01；APC：2.59±0.14比1.00±0.05， t＝18.113， P<0.01)。 结论:STC2基因可能通过抑制APAF1、PTEN和APC等基因的表达而发挥其调控肝癌细胞增殖凋亡的作用。

目的:探讨藻蓝蛋白改善肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管重构的机制。方法:将30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，采用随机数表法分为3组：正常对照组(对照组)、PAH模型组(PAH组)、藻蓝蛋白治疗组(治疗组)，每组10只。腹腔注射野百合碱(MCT)建立PAH模型，治疗组在造模后第15天给予藻蓝蛋白灌胃，持续14d。测量右心室收缩压(RVSP)，计算右心室肥厚指数(RVHI)。苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察肺血管，蛋白印迹法(Western blot)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、核转录因子-κB(NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、α-肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达，免疫荧光定位α-SMA和PCNA。多组比较采用单因素方差分析。结果:治疗组RVSP、RVHI低于PAH组[(24.60±3.33) mmHg比(40.49±3.76) mmHg， F＝140.998， P<0.01；(32.23±2.99)%比(43.45±3.10)%， F＝90.774， P<0.01]，肺小动脉中膜厚度及中膜面积百分比低于PAH组(0.579±0.013比0.736±0.023， F＝251.494， P<0.01；0.574±0.063比0.917±0.036， F＝84.346， P<0.05，肺血管胶原沉积低于PAH组[(9.81±0.66)%比(23.23±2.05)%， F＝294.181， P<0.01]。治疗组TGF-β1、bcl-2、α-SMA和PCNA相对表达量、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)/NF-κB低于PAH组(0.813±0.077比1.097±0.056， F＝75.485， P<0.01；0.902±0.030比1.231±0.123， F＝52.224， P<0.01；1.089±0.044比1.283±0.049， F＝85.388， P<0.01；1.218±0.008比1.673±0.139， F＝33.825， P<0.05；0.463±0.025比0.875±0.013， F＝447.19， P<0.01)；bax、Caspase-3相对表达量高于PAH组(1.188±0.072比0.738±0.048， F＝63.635， P<0.01；1.750±0.028比1.432±0.017， F＝31.684， P<0.01)。治疗组α-SMA、PCNA荧光强度低于对照组。 结论:藻蓝蛋白可通过抑制肺血管胶原沉积，减少炎性因子表达，抑制细胞增殖，促进凋亡，减轻大鼠PAH肺血管重构。

随着细菌对现有抗生素和银制剂敷料耐药性的不断增强，促进伤口愈合，尤其是糖尿病患者的伤口愈合成为医学领域中的难题。螺旋藻中的藻蓝蛋白具有生物活性和抗菌功能，但其提取却面临着一系列的挑战，限制了藻蓝蛋白的应用。基于此，该研究开发了一种氩气等离子体喷射技术，这种技术能够有效地将螺旋藻生物质转化为具有生物活性的涂层。进一步研究证实，这种涂层对多种细菌，尤其是对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌显示出了强大的抗菌活性。此外，这种涂层不仅可以通过减少巨噬细胞产生IL?6起到抗炎作用，还能促进KC迁移。总之，该研究提供的这项新技术可将螺旋藻生物质转化为生物活性涂层，为伤口治疗提供了新的策略。

目的:建立流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的表达方法，探讨NETs在脓毒症相关凝血功能障碍(SAC)患者中的临床诊断价值。方法:收集2018年5月至2019年6月苏州大学附属第二医院50例非脓毒症者和21例脓毒症患者抗凝血。脓毒症患者符合3.0定义的诊断标准，血培养鉴定出革兰氏阴性菌，D二聚体含量>0.5 mg/L，彩色多普勒超声检查显示血栓形成，即时收集外周血样。采用别藻蓝蛋白(APC)标记的白细胞分化抗原66b(CD66b)识别多型分叶核细胞(PMNs)，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体耦联PMNs膜表面MPO，Sytox orange(SO)核酸染料标记脱氧核糖核酸(DNA)，建立FCM检测全血NETosis相关标志物方法。7-氨基放线菌素D(7-AAD)染料观察溶血对细胞膜完整性的影响，进行NETosis相关标志物(SO/MPO)的特异性检测。受试者工作特征(ROC)曲线分析NETosis相关标志物和白细胞总数(WBC)在SAC患者中的灵敏度和特异性，用Mann-Witney统计量的非参数法估计ROC曲线下面积(AUC)，AUC的比较采用配对设计的两相关诊断试验差异假设检验。结果:全血分离的PMNs与FACS试剂溶血后的PMNs对7-AAD的阴性表达率比较，两者差异无统计学意义[(95.1±6.6)%比(93.5±5.7)%， t＝1.984， P>0.05]。NETosis相关标记物SO/MPO不能识别Etoposide药物诱导的PMNs凋亡(Apoptosis)。ROC曲线分析SAC患者的AUC，NETosis相关标记物取2.5%时的AUC高于WBC取8.0×10 9/L时的AUC(0.97比0.72， Z＝2.011， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:FCM检测外周全血PMNs上NETosis相关标志物具有良好的敏感性、特异性，在SAC诊断中有重要临床价值。

目的:探讨冲击波对三维培养软骨细胞增殖和抑制去分化的作用。方法:构建海藻酸盐封装的软骨细胞微球，用不同强度冲击波(分5组：空白对照组、1 bar组、2 bar组、3 bar组、5 bar组，1 bar＝100 kPa)刺激，观察平面与三维、静态与动态培养下软骨细胞形态。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和钙黄绿素(Calcein AM)-碘化丙啶(PI)活死细胞染色检测不同时间点软骨细胞增殖凋亡。PCR检测软骨相关标志物Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、蛋白聚糖(Aggrecan)表达。组织学染色观测软骨细胞形态与基质表达，组间比较采用方差分析。结果:三维培养的软骨细胞在冲击波刺激下保持圆形形态，存活良好。低能量能够刺激细胞增殖，达到3 bar或以上时，细胞死亡增多，存活率下降。静态组第14天Col-Ⅰ表达明显高于第1天(3.687±0.156， t＝14.240， P<0.01)，与动态组第14天比较(2.887±0.424， t＝3.065， P<0.05)差异有统计学意义。第7天和第14天静态组Col-Ⅱ(0.334±0.100和0.140±0.046)与动态组(0.677±0.146和0.363±0.110)比较，差异均有统计学意义( t＝3.363、3.231， P<0.05)；静态组Aggrecan在第14天下降明显(0.077±0.050)，低于动态组(0.247±0.085， t＝2.979， P<0.05)。阿尔新蓝和番红O组织学染色观察到刺激组软骨细胞密集分布和相关糖胺聚糖产物的沉积。 结论:体外冲击波刺激能够更好地维持体外三维培养软骨细胞的表型，抑制去分化。

为探究蓝藻低磷适应机制,研究鉴定了海洋聚球藻PCC 7002中可能的磷调控基因phoR(A2100),并通过生物信息学的方法对PhoR蛋白理化性质进行了分析,发现phoR基因长度为1296 bp,编码431个氨基酸,PhoR蛋白由PAS、HisKA和HATPase c三部分结构域组成,在不同蓝藻物种中序列较为保守.随后通过原核表达获得了PhoR重组蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体,检测了PhoR在聚球藻PCC 7002中缺磷诱导时的表达变化,证明PhoR蛋白在磷缺乏时大量诱导表达.为探究PhoR在聚球藻PCC 7002中的生理功能,通过缺失突变获得了Mut-pho突变株,并分析了其生理表型,发现Mut-phoR突变株在磷限制条件下出现显著的生长缺陷及光合作用的损伤,证明PhoR是聚球藻PCC 7002适应低磷环境不可缺少的.研究结果为深入认识蓝藻的低磷适应分子机制提供了科学基础.

研究以日本鳗鲡(Anguilla japonica)为研究对象,分夏秋两季,调查并讨论了放养密度对养殖鱼水质和营养品质变化的影响.夏季低密度组放养密度分别为1.51(1号塘)、1.50(2号塘)和1.49 kg/m2(3号塘),高密度组分别为2.17(4号塘)、2.14(5号塘)和2.13 kg/m2(6号塘).秋季低密度组放养密度分别为1.74(Ⅰ号塘)、1.72(Ⅱ号塘)和1.75 kg/m2(Ⅲ号塘),高密度组分别为2.36(Ⅳ号塘)、2.34(Ⅴ号塘)和2.36 kg/m2(Ⅵ号塘).两次分别从每个养殖塘采集5份水样,每个密度组养殖塘随机采集4尾日本鳗鲡.结果显示:两季高密度塘水体透明度和溶氧显著低于低密度塘(P<0.05),总氮、总磷、氨氮、亚硝酸盐、COD、叶绿素a指标显著高于低密度塘(P<0.05),硅藻门、绿藻门、蓝藻门密度均大于低密度塘一个数量级,且经统计分析,夏季高密度组的蓝藻门密度显著高于低密度组(P<0.05).此外,高密度塘水体菌群Shannon指数显著低于低密度塘,Simpson指数则相反(P<0.05).在门水平上,经统计分析,夏秋两季高密度组放线菌门均显著低于低密度组(P<0.05);而夏季高密度组变形菌门极显著高于低密度组(P<0.01);秋季拟杆菌门显著高于低密度组(P<0.05).在营养品质方面,日本鳗鲡肌肉的硬度、剪切力、咀嚼性、回复性参数及粗脂肪和粗蛋白含量均显著小于低密度塘(P<0.05);水分含量显著高于低密度塘(P<0.05).综上,高密度与低密度塘相比,水质指标、藻类组成、菌群多样性及鱼体质构、营养成分等指标中大部分参数呈现一致性负面影响,共同构成日本鳗鲡品质与养殖环境的敏感参数.此外,夏季日本鳗鲡放养密度为2.13-2.17 kg/m2水质呈现富营养化及轻度污染状态.

目的 探讨富血小板血浆(PRP)联合脂肪间充质干细胞(ADSCs)负载藻酸钙凝胶修复软骨缺损的效果.方法 取新西兰大白兔皮下脂肪分离培养ADSCs,制造兔关节软骨缺损模型,然后将ADSCs种植到负载PRP的藻酸钙凝胶上,构建组织工程软骨并移植到缺损处.实验分为3组:对照组、PRP组和PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组,每组10只.术后观察细胞形态和生长情况,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色等方法检测成软骨特性,CCK-8法检测ADSCs增殖活性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA和蛋白多糖mRNA表达.结果 在倒置相差显微镜下,ADSCs呈现典型的间充质干细胞形态,即梭形或椭圆形,细胞质丰富,核形规则.随着培养时间的延长,ADSCs逐渐呈现出良好的生长状态,细胞数量增多,细胞间连接紧密,形态规则.对照组软骨缺损区未见明显修复,染色呈浅蓝,ADSCs数量多;PRP组软骨缺损区部分修复,染色呈蓝色,ADSCs数量较对照组多;PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组软骨缺损区修复效果最好,染色呈深蓝色,ADSCs数量较PRP组多.诱导14 d后,ADSCs甲苯胺蓝异染阳性,胞浆及细胞周围出现紫红色异染.Ⅱ型胶原免疫组化染色显示,PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组ADSCs平均灰度值明显高于其他组(P<0.05);阳性细胞胞浆内可见棕黄色颗粒,细胞周围黄染.CCK-8检测显示,PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组ADSCs第2天进入指数生长,对照组第3天才开始进入指数生长状态.在观察期间内,PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组软骨诱导后ADSCs OD值显著高于其他组(P<0.05).PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于其他组(P<0.05).3组ADSCs的蛋白多糖mRNA表达随时间增加而递增,第14、21天PRP-ADSCs-藻酸钙凝胶组ADSCs的蛋白多糖mRNA表达明显高于其他组(P<0.05).结论 利用PRP、ADSCs、藻酸钙凝胶形成的复合体初步构建组织工程软骨对缺损关节软骨进行修复,可提高ADSCs增殖活性及Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达水平,使缺损的关节软骨得到明显修复.

微藻是地球上光合微生物的原始种类之一,由于其生长周期较短、生长速率较快和生产高附加值产物的潜力而被广泛开发利用.然而,在微藻放大生产的过程中极易受到高盐等非生物胁迫的不利影响,极大地限制了微藻的生产力.因此,了解微藻盐胁迫响应的分子机制将有助于耐盐藻株的快速建立.本文总结了真核微藻和原核蓝藻响应盐胁迫的各种参与蛋白及其具体作用机制,包括转运蛋白维持离子稳态、积累渗透调节物质、抗氧化防御机制、信号蛋白和脂质积累等;同时综述了已被开发利用的天然耐盐藻包括杜氏盐藻(Dunaliella salina)、盐生隐杆藻(Aphanothece halophytica)、皮克绿球藻(Picochlorum sp.)和海洋绿藻(Chlamydomonas W80)等微藻及其耐盐基因的研究进展;最后讨论了典型盐响应基因在优良藻种选育中的价值与应用前景.