目的:观察感染骨组织表面培养在检测骨髓炎致病菌中的应用。方法:前瞻性筛选2021年12月至2023年1月期间南方医科大学南方医院骨科-创伤骨科收治的诊断为骨髓炎的患者，对其感染的骨组织进行骨组织表面培养（BSC）和一般组织培养（GSC）。将患者术中取到的失活感染骨组织平铺在已固化琼脂的无菌培养皿上，表面浇筑尚未凝固的胰蛋白胨大豆琼脂，置于37 ℃恒温含5%CO 2的孵箱培养完成BSC；同时对患者术中用5套独立的器械取疑似感染的5个部位感染骨组织送检验科进行GSC，比较两种培养方式的培养时间、菌种和细菌阳性率。 结果:共纳入73例患者，男59例，女14例；年龄49.0（31.0，58.5）岁；BSC的培养时间1（1，1）d显著短于GSC的3（2,3）d，BSC的细菌阳性率78.1%（57/73）显著高于GSC的61.6%（45/73），差异均有统计学意义（ P<0.05）。GSC培养出的细菌种类与BSC培养的细菌种类一致。 结论:在骨髓炎致病菌检测中，对骨髓炎患者的感染骨组织标本进行BSC，时间短、阳性率高，可作为GSC的一种辅助方法。

目的:明确黄芩斑枯病病原菌多主棒孢Corynespora cassiicola的生物学特性,筛选高效安全的杀菌剂,科学防治黄芩斑枯病.方法:通过菌落生长速率法评价碳源、氮源、温度、培养基、pH、光照对多主棒孢菌落生长的影响,以及 5 种杀菌剂对病原菌的室内毒力.结果:多主棒孢最适生长条件为胡萝卜培养基外源添加可溶性淀粉和蔗糖作为碳源、蛋白胨作为氮源、pH为 6、温度为 30℃.菌丝致死条件为 51℃处理 10 min,孢子致死条件为 54℃处理 10 min.98%多菌灵对多主棒孢的毒力最强,半数效应浓度(EC50)为 0.07 mg·L-1;其次是 98%咯菌腈、98%咪鲜胺和 98%吡唑醚菌酯,EC50 分别为 0.10、0.18、3.06 mg·L-1;98%嘧菌酯对多主棒孢的毒力最弱,EC50 为 632.39 mg·L-1.结论:黄芩斑枯病病原菌适生范围较广,在多种碳源、氮源、培养基及pH条件下均可生长,在中性偏弱酸、较高温条件下生长速度较快.多菌灵和咯菌腈对多主棒孢表现出较强的抑制作用,可考虑将其用于黄芩斑枯病的田间防治.

目的 建立针对2种注射用多西他赛胶束的无菌检查方法.方法 参照2015年版《中国药典》(四部)通则1105无菌检查法,取注射用多西他赛胶束15瓶,用500 mL 0.9%氯化钠溶液溶解,作为供试液,平均分配至3个滤筒过滤.同法制备6个滤筒.每个滤筒用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗3次,每次100 mL,然后加入相应培养基,并分别接种<100 CFU/mL的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌和黑曲霉,于适宜温度下观察培养.以等量无菌氯化钠溶液替代注射用多西他赛胶束供试液后采用相同的后续操作,作为对照组.采用薄膜过滤法,用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每个滤筒冲洗3次,每次100 mL,检测各菌株生长情况.结果 6种验证菌株均在48 h内生长良好,样品的抑菌活性被完全消除.结论 注射用多西他赛胶束可用上述方法进行无菌检查.

[目的]探究产胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)菌株在促进盐碱土中植物生长,改善土壤性能等方面的影响,为研制适用于盐碱土壤修复的微生物菌剂奠定基础.[方法]从新疆喀什地区盐碱草地根际土壤中筛选产胞外多糖菌株,基于 16S rRNA基因序列比对及系统发育分析对产胞外多糖菌株进行种属鉴定,采用单因素和响应面法优化最高产菌株的培养基组分,通过接种试验评估其对盐碱土栽培植物的促生效果及土壤团聚体的影响.[结果]共筛选出 19 株具有产胞外多糖能力的菌株,隶属于7 个菌属,以假单胞菌属(Pseudomonas)占绝对优势.菌株产糖量介于 236-1 544 mg/L,尤以泛菌属Pantoea MQ A0 产糖量最高,且兼具固氮、产吲哚乙酸(IAA)和铁载体、解磷等功能.MQ A0 的最适产糖发酵培养基为甘油 12.5 mL/L,蛋白胨 9.0 g/L,酵母粉 5.5 g/L,CaCO3 5.1 g/L,在此条件下菌株产糖量达 2 436 mg/L,较优化前增加 57.8%.接种MQ A0 发酵液使盐碱土栽培的玉米株高、鲜重、茎粗、须根数和总根长分别提高 41.2%、203.0%、42.7%、30.4%和 99.7%;粗多糖提取液对土壤团聚体的形成也有显著促进作用(P<0.05).[结论]高产胞外多糖菌株MQ A0 兼具多种促生特性,在促进盐碱土中植物生长和土壤改良方面效果显著.

[背景]用于餐厨垃圾等有机废弃物处理的亮斑扁角水虻(Hermetia illucens,HI)含有丰富的氨基酸和营养物质,是一种优质、经济的蛋白来源.[目的]利用亮斑扁角水虻幼虫(Hermetia illucens larvae,HIL)制备蛋白胨用于细菌培养,为亮斑扁角水虻的应用方式提供新的思路.[方法]以亮斑扁角水虻幼虫为原料,利用单因素试验确定最佳酶解条件,对比分析HIL蛋白胨和市售胰蛋白胨的基本性质和功能性状,并进行细菌培养、生物化学试验,利用两种蛋白胨分别培养大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25922 模式细菌并通过生长动力学分析评价应用效果.[结果]制备HIL蛋白胨的最佳酶解工艺为按 1.3%(质量分数)添加复合酶(胰酶:碱性蛋白酶质量比为 1:1),在pH 7.0、54℃条件下反应 4 h,此时HIL的水解度为(19.34±0.15)%.HIL蛋白胨和市售胰蛋白胨的功能性状和生物化学试验差异不显著(P>0.05).大肠杆菌ATCC 25922 在HIL蛋白胨培养基中生长的Xmax和λ分别为 6.44 和 2.45,在市售胰蛋白胨生长的Xmax和λ分别为 6.14 和 3.19,差异均不显著(P>0.05).[结论]在培养大肠杆菌时,HIL蛋白胨可以替代胰蛋白胨作为微生物培养基的成分.

目的:对白术Atractylodes macrocephala Koidz.内生真菌米根霉Rhizopus oryzae的次生代谢产物进行研究.方法:利用大米蛋白胨固体培养基对米根霉Rhizopus oryzae进行发酵培养,利用多种柱色谱方法及制备高效液相等分离手段对该株真菌的次生代谢产物进行研究,根据多种波谱方法对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果:从该次生代谢产物中分离纯化得到了 26 个化合物,分别鉴定为:麦角甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、3β-O-acetyl-ergos-terol(3)、3-acetate-ergosterol-5,8-endoperoxide(4)、(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(5),麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(6)、24-亚甲基环阿尔廷醇(7)、(3β,5α,22E)ergosta-6,8(14),22-triene-3,5-diol(8)、3β,5α-di-hydroxy(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(9)、chaxine C(10)、demethylincisterol A3(11)、吡咯-2-羧酸(12)、吲唑(13)、烟酸(14)、6-[(1R)-1-hydroxy-1-methylpropyl]-3-(2-methylpropyl)-2(1H)-pyrazinone(15)、pentadecanamide(16)、对羟基苯甲酸(17)、对羟基苯乙酸甲酯(18)、反式-阿魏酸(19)、对羟基苯甲醛(20)、对羟基苯乙酸(21)、辅酶Q9(22)、2,3-丁二醇(23)、9,9-dimethylhexacosane(24)、硬脂酸(25)、methyl(5Z,9Z,17R)-17-methyl-5,9-nonadec-adienoate(26).结论:以上化合物均为首次从米根霉Rhizopus oryzae中分离得到.

以采自广西青龙山自然保护区的雅致栓孔菌菌株为试验材料,进行生物学特性的单因素试验与正交试验,探究了其驯化栽培的最适条件,并测定了栽培子实体水提物抗氧化活性.结果表明,雅致栓孔菌菌丝在以葡萄糖为碳源、蛋白胨为氮源、pH 为 5.5、温度为 30℃的条件下生长最佳.4 个因素对雅致栓孔菌菌丝生长的影响程度为:碳源>温度>氮源>pH.驯化栽培以棉籽壳作为栽培主料,搭配不同比例木屑进行栽培,结果表明,配方 3(棉籽壳 30%,木屑 48%,麸皮 20%,石灰 1%,石膏 1%)的菌丝生长速度达到 10.46 mm/d,平均产量 54.74 g/袋,生物学效率达到7.69%,为最佳栽培配方.采用超声法提取子实体水提物,子实体水提物浓度为 2.5 mg/mL 时,ABTS的清除率达到 100%,子实体水提物浓度为 5 mg/mL时,DPPH的清除率达到 90.07%,表明该菌具有较高的抗氧化活性.

[目的]黄淮海平原小麦玉米生产区主要实行冬小麦-夏玉米轮作种植模式.砂质潮土是广泛分布于黄淮海地区的土壤,属性和衍生障碍较多,包括结构性较差、蓄水保肥能力较弱等.为了提高肥料利用率、改善土壤肥力,综合实现作物产量提升和品质优化,筛选了一株多功能促生菌,并在该轮作体系验证其广谱促生效应.[方法]从玉米根际砂质潮土中筛选多功能促生菌,测定其产吲哚乙酸(IAA)、溶有机磷、解钾能力.通过形态学、生理生化及 16S rDNA序列分析方法对其种属进行鉴定.摇瓶条件下探究其产IAA的最适条件,通过玉米盆栽验证其促生能力,通过冬小麦-夏玉米大田试验验证其在轮作体系中的广谱性增产效果.[结果](1)试验筛选得到一株命名为YM3 的多功能根际促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其产IAA能力达到59.21 mg/L、解有机磷能力达到 0.72 mg/L、解钾能力达到 18.56 mg/L.当装液量为 25 mL/250 mL,pH 6-8 范围内,分别以麦芽糖、蛋白胨为碳、氮源时,YM3 产IAA能力最佳.(2)玉米盆栽试验结果可见,与接种灭活菌相比,接种YM3 菌水剂的土壤IAA、速效磷、速效钾含量分别显著提高 75.00%、48.66%、20.00%.玉米幼苗的根长、根表面积、根体积、根尖数、根分枝数分别显著增加 67.95%、59.21%、51.13%、71.34%、92.06%.玉米植株的鲜重、株高、相对叶绿素含量、全氮、全磷、全钾分别显著提高了39.86%、23.51%、18.27%、17.68%、52.26%和 36.53%.(3)小麦玉米轮作大田试验结果表明,接种YM3 菌剂的小麦大田土壤有效氮、速效磷、速效钾分别显著增加了 9.08%、13.78%、16.66%,增产率达到 42.18%.玉米大田土壤速效磷和速效钾含量分别显著增加了 19.18%和 15.95%,增产率达到 13.22%.[结论]筛选得到的枯草芽孢杆菌YM3 菌株兼具产IAA、溶有机磷、解钾功能,在黄淮海平原小麦玉米轮作体系土壤中适应性强,广谱性强,能够提升砂质潮土土壤肥力,提高冬小麦-夏玉米轮作体系的产量.

目的 优化海洋来源的蓝灰异壁放线菌OUCMDZ-413突变株CRM05的发酵条件,提高浅蓝霉素H的发酵产量并测定其对海洋环境病原细菌的抑菌活性.方法 探索培养基组成、接种量、种龄、发酵天数、盐度、pH、碳源、氮源、前体以及大孔吸附树脂添加量,再采用单因素实验和正交实验确定最优发酵条件.结果 优化后浅蓝霉素H的最佳发酵条件为:摇瓶发酵11d(28℃、180 r/min)、装液量150/500 mL(体积分数)、优化培养基(20 g可溶性淀粉、10 g蛋白胨、10 g酵母浸膏、4g NaCl、4gCaCO3、0.1 g2-吡啶甲酸、40gXAD-16大孔吸附树脂、1L陈海水、灭菌前用1 mol/L盐酸调节pH 6.5)、2％接种量、5 d种龄(即菌落的A6002.72).结论 以优化条件发酵菌株CRM05,浅蓝霉素H的分离产量达到434 mg/L,是优化前液体发酵产量的10倍和优化后固体发酵产量的1.6倍.浅蓝霉素H可显著抑制3种海洋弧菌—溶藻弧菌、创伤弧菌和副溶血弧菌,其最小抑菌浓度分别为8、16和16 μg/mL,活性强于环丙沙星(相应的最小抑菌浓度分别为64、64和32 μg/mL).

[背景]生物表面活性剂具有毒性低、生物兼容性好和可降解等优点,是化学表面活性剂的优良替代物.目前产生物表面活性剂的微生物多为常温菌,从低温环境中挖掘高产新型生物表面活性剂的生产菌株具有重要的意义.[目的]从南极土壤中筛选产表面活性剂的低温微生物,对其表面活性剂进行纯化和结构解析并评估其性能.[方法]采用排油圈法对分离自南极菲尔德斯半岛土壤样品中的细菌菌株进行筛选,获得一株在菌苔表面产白色固体颗粒的菌株,对菌株进行形态观察和 16S rRNA 基因序列分析以确定该菌株系统发育地位.利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分离产物,并用核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)技术对产物的化学结构进行鉴定.采用单因素试验和响应面设计方法对发酵培养基进行优化.此外,对产物的乳化性能及其对柴油的降解能力进行评估.[结果]得到了一株高产生物表面活性剂的耐冷土地杆菌属(Pedobacter)GW9-17,其最优发酵培养基(g/L)组成为:可溶性淀粉18.0、胰蛋白胨 9.0、C3H3NaO34.4、K2HPO43.6、MgSO41.2,pH 7.0±0.2.在此条件下,按 10%(体积分数)接种量、28℃、180 r/min培养 7 d后表面活性剂的浓度可达到(3.0±0.5)g/L.利用HPLC和 NMR 技术发现菌株 GW9-17 表面活性剂主要成分为 flavolipid-9U,9U,表面活性剂粗提物的甲醇-水溶液(体积比 1:1)对液体石蜡油有良好的乳化能力,菌株GW9-17 在柴油含量为 5%时,在 4℃和 28℃条件下对柴油的降解率分别达到 40.1%和 57.3%.[结论]从南极土壤中获得了一株高产低分子量表面活性剂的低温Pedobacter sp.GW9-17,其产物flavolipids具有对烷烃类污染物质增溶分解的潜力,对石油污染的低温生态修复有重要的利用潜能.