鼻眶脑型毛霉病（ROCM）是一种急性、进展快速、病情凶险的机会性真菌感染疾病，早期临床表现不典型，容易漏诊误诊，合并脑血管病变患者病死率极高。文中报道1例山东第一医科大学附属中心医院收治的患者，为47岁女性，合并糖尿病酮症酸中毒和新型冠状病毒肺炎，主要表现为发热、进行性加重的意识障碍、眶尖综合征和偏瘫，通过影像学表现结合脑脊液宏基因组二代测序手段确诊为米根霉所致的ROCM，给予两性霉素B胆固醇硫酸酯复合物联合艾沙康唑抗真菌治疗，后期并发右侧颈内动脉和双侧大脑前动脉闭塞，最终因重症脑梗死及肺部感染而死亡。报道本病例旨在阐述ROCM继发缺血性脑血管病变的特点和双侧前循环梗死的少见情况及诊治方法。

目的:探究新型冠状病毒感染相关性肺毛霉病(CAPM)的流行病学并进行病例分析。方法:本研究为观察性研究。收集2022年12月9日至2023年3月9日期间经广州微远医学检验实验室送检支气管肺泡灌洗液(BALF)行宏基因组二代基因测序(mNGS)同时检测出新型冠状病毒和毛霉菌的病例的流行病学数据，并对同一时期来自于北京清华长庚医院的相关患者在流行病学、临床特征、微生物学特征、治疗及预后等方面进行回顾性分析。结果:经BALF-mNGS检测诊断新型冠状病毒感染3 001例，其中合并小孢根霉17例，米根霉16例，毛霉菌占比为1.10%(33/3 001)。北京清华长庚医院诊治新型冠状病毒感染患者846例，其中CAPM患者9例，占比为1.06%。CAPM患者中男6例，女3例；糖尿病患者6例，血液系统疾病3例，新型冠状病毒感染期间经糖皮质激素治疗4例；CAPM累及多个肺叶7例，累及单个肺叶2例。入院当日死于大咯血1例，入院当日死于呼吸衰竭1例，放弃治疗失访1例。经全身药物治疗联合支气管镜局部介入治疗4例；经全身药物治疗、支气管镜局部介入治疗联合手术治疗2例。结论:CAPM在新型冠状病毒感染患者中的总体发病率相对较低，常为糖尿病或血液系统疾病等免疫抑制宿主；CAPM病变常累及多个肺叶，全身药物治疗联合支气管镜局部介入治疗或手术治疗可取得较好的临床疗效。

目的:对白术Atractylodes macrocephala Koidz.内生真菌米根霉Rhizopus oryzae的次生代谢产物进行研究.方法:利用大米蛋白胨固体培养基对米根霉Rhizopus oryzae进行发酵培养,利用多种柱色谱方法及制备高效液相等分离手段对该株真菌的次生代谢产物进行研究,根据多种波谱方法对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果:从该次生代谢产物中分离纯化得到了 26 个化合物,分别鉴定为:麦角甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、3β-O-acetyl-ergos-terol(3)、3-acetate-ergosterol-5,8-endoperoxide(4)、(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(5),麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(6)、24-亚甲基环阿尔廷醇(7)、(3β,5α,22E)ergosta-6,8(14),22-triene-3,5-diol(8)、3β,5α-di-hydroxy(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(9)、chaxine C(10)、demethylincisterol A3(11)、吡咯-2-羧酸(12)、吲唑(13)、烟酸(14)、6-[(1R)-1-hydroxy-1-methylpropyl]-3-(2-methylpropyl)-2(1H)-pyrazinone(15)、pentadecanamide(16)、对羟基苯甲酸(17)、对羟基苯乙酸甲酯(18)、反式-阿魏酸(19)、对羟基苯甲醛(20)、对羟基苯乙酸(21)、辅酶Q9(22)、2,3-丁二醇(23)、9,9-dimethylhexacosane(24)、硬脂酸(25)、methyl(5Z,9Z,17R)-17-methyl-5,9-nonadec-adienoate(26).结论:以上化合物均为首次从米根霉Rhizopus oryzae中分离得到.

报道2例肾移植患者并发毛霉菌感染的诊断及治疗过程,为毛霉菌感染诊治提供参考依据.病例1,患者男性,因肌酐升高8年余,行同种异体肾移植术,术后25 d肾功能恢复尚可,之后患者突发上腹痛加剧,对腹腔引流液进行病原体培养、涂片镜检、质谱鉴定及宏基因二代测序(next-generation sequencing,mNGS)鉴定,结果显示为小孢根霉,用两性霉素B硫酸胆固醇复合体抗真菌治疗后病情好转出院;病例2,患者男性,有高血压,血肌酐升高7年余入院,行同种异体肾移植术后,移植肾组织培养涂片及组织病理检查均考虑毛霉菌感染,后行"手部肌肉清创术+创面封闭式负压引流术(VSD)",术后予以两性霉素B抗毛霉菌感染治疗及清创,之后mNGS复测未见毛霉菌感染.2例患者治疗过程中均加用替加环素治疗后出现腹痛,随即诊断为胰腺炎,停药后恢复;患者均为男性,其中1例合并高血压;2例肾移植患者毛霉菌感染经传统的涂片检查作为导向,后经组织病理学检查、mNGS及质谱鉴定技术确诊,1例为小孢根霉感染,另1例为米根霉和小克银汉霉混合感染.肾移植术后由毛霉菌感染患者的诱因多种多样,治疗的关键是早期诊断,选用两性霉B及其脂质体治疗是改善肾移植术后毛霉菌病患者的有效治疗手段.

真菌α-淀粉酶被广泛应用于麦芽糖浆生产工业,但其热稳定性普遍较差,在制糖工艺中增加了由于酶活力损失而引起的追加生产成本.在充分研究了热稳定性对于真菌α-淀粉酶应用于工业生产的重要性的基础上,为提高米根霉α-淀粉酶(ROAmy)的热稳定性,基于酶蛋白B-factor分析和分子动力学模拟,利用重叠PCR技术分别对ROAmy中的3个氨基酸残基G128、K269和G393进行了单点突变及组合突变.结果表明,所获得的7个突变体均比原酶具有更好的热稳定性,其中效果最好的为组合突变体G128L/K269L/G393P,其在55℃下的热失活半衰期(t1/2)约为原酶的5.63倍.同时,该突变体的最适温度由50℃提高到了65℃,最大反应速率(Vmax)和催化效率(Kcat/Km)分别提高了65.38％和99.86％.通过蛋白结构功能比较分析,发现氢键数目的增多或脯氨酸在特殊位置中的引入可能是突变体热稳定性得到提高的主要因素.

L-乳酸因对人体安全无毒,应用领域广泛.为提高L-乳酸的产量、得率,降低其生产成本,选用制备L-乳酸的理想菌种米根霉,以低聚木糖生产废渣为底物,探究基于木质纤维原料生物转化L-乳酸的最佳工艺路线.采用纤维床生物反应器固定化米根霉进行同步糖化发酵,有利于解决低聚木糖工业加工中的大量废渣再利用问题,实现米根霉利用木质纤维原料低成本、高得率制备L-乳酸.在固定化米根霉发酵的基础上,从原料低聚木糖生产废渣到成品L-乳酸全工艺过程,利用SuperPro Designer进行评估核算,探讨其工业化可行性和经济效益,年产5.0万tL-乳酸的项目建设投资回收期为3.24年.

[背景]少根根霉物种内菌株间生理生化指标存在差异,相应的遗传背景不明,不利于少根根霉生产发酵的进一步应用.[目的]探究不同少根根霉菌株温度-生长动力学模型间的差异,为其群体遗传研究奠定基础,为生产菌株的筛选提供依据.[方法]选取来自欧亚各地的纯种少根根霉为实验材料,通过形态学鉴定,以及ITS和IGS rDNA分子系统发育重建进行分子鉴定,采用培养基平板培养直接测量法进行温度-生长动力学分析.[结果]少根根霉温度-生长动力学模型呈现丰富的多样性,与各形态和分子系统发育变种基本不具有相关性.菌株间温度-生长速度曲线具有显著性差异.少根根霉生长抑制低温范围、最适生长温度范围、生长抑制高温范围和致死高温范围分别为4-9、30-37、40-49和40-52℃.菌株XY00454和XY00469具有良好的高温适应性和较快的生长速度,有开发成为工业发酵菌的潜力.[结论]少根根霉物种仍然处于剧烈的演化之中,种内形态、分子和生理分化较为活跃,但尚未形成任何独立的种群.根据温度适应性的数据可以筛选出发酵生产潜力菌株.

致死性中线肉芽肿(LMG)与鼻眶脑真菌病(ROCM)均为发生于面中线部位的损毁性溃疡,有时LMG可合并真菌感染,后者常被认为是继发.我们从LMG组织中分别分离出不规则毛霉(PUTH 10050641)和米根霉(PUTH 20111112),病人均经抗真菌治疗获得痊愈,我们因此推测PUTH 10050641 和PUTH 20111112可能参与诱导非典型增生及CD-56和Ki-67抗原表达.为论证上述推测,我们用ICR 小鼠设计了一项观察研究.方法 为小鼠背部皮下接种PUTH 10050641和PUTH 20111112,分别于接种后1周、2周、3周、4周和5周进行皮肤标本培养和组织学分析,包括直接免疫荧光和免疫组化特征.结果 成功诱发感染并形成溃疡,病理表现为多形细胞浸润性炎症、血管侵入.此外,一些区域出现非典型增生、CD-56和Ki-67抗原表达,其中Ki-67高表达围绕真菌菌丝周围.上述研究表明不规则毛霉PUTH 10050641和米根霉PUTH 20111112参与了诱导非典型增生及NK细胞聚集.

对几种霉菌在现配PDA与商品化速成PDA上的生长、产孢子量及胞外酶活力进行了研究.先分别用不同PDA转接活化霉菌,观察其生长情况.再用不同PDA培养的米根霉糖化糯米,检测其糖化酶和液化酶活力;用不同PDA培养的黑曲霉分解柚子皮,检测其纤维素酶活力;用不同液体PDA培养的酒精酵母发酵酒精,检测其酒化酶活力.结果 表明:米根霉、黑曲霉和酒精酵母在当季土豆现配PDA上生长更快,酶活力更高,过季土豆现配PDA次之,商品化速成PDA较差.商品化速成PDA只适合做一般验证实验和生理生化实验,不适合生产用菌株的活化及转接培养.

[目的]实现米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶ROL在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高效表达,为其产业化奠定基础.[方法]通过基因的理性设计提高其在毕赤酵母中的表达水平,再通过构建含串联的ROL基因的表达载体,获得含多拷贝ROL基因的重组菌株,拟通过提高ROL基因在宿主细胞中的基因剂量来进一步提高其表达量.[结果]基因的理性设计和基因剂量有效地提高了ROL基因在毕赤酵母中的表达量.原始ROL基因重组表达菌株活性最高的为260 U/mL.进行密码子优化后,发酵罐条件下,其活性最高的为26 500 U/mL,前后相比较,酶活力提高10倍.[结论]成功获得了脂肪酶ROL高效表达的菌株,完成了在小型发酵罐中的产酶能力评估,为该酶的工业化生产奠定了基础.