目的:探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,SIRT6)对四氯化碳(carbon tetrachlo-ride,CCl4)诱导的小鼠肝纤维化作用和机制,以及肝星状细胞在SIRT6沉默后其下游通路的表达变化.方法:将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(n=6)和模型组(造模2、4、8、12周,n=24),采用腹腔注射CCl4制备肝纤维化小鼠模型,每周2次,持续12周.检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)含量评估肝损伤;HE、Masson染色观察小鼠肝脏病理学改变;免疫组织化学染色检测小鼠肝脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;Western blot检测肝脏α-SMA、SIRT6、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetyl histone H3 at Lys9,H3K9ac)、第56位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetyl histone H3 at Lys56,H3K56ac)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18蛋白的表达.将大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells-T6,HSC-T6)进行SIRT6基因沉默,分为NC siRNA组和SIRT6 siRNA组.Western blot检测SIRT6、H3K9ac和H3K56ac蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST含量均显著升高(P<0.05);HE染色和Masson结果显示,模型组肝脏病理变化逐渐加重,胶原纤维沉积逐渐增多;免疫组织化学染色与Western blot均显示,在8和12周模型组中肝脏α-SMA表达显著增加(P<0.05);Western blot检测结果显示,CCl4造模后各组小鼠肝脏中SIRT6蛋白表达均低于正常对照组(P<0.05),并随肝纤维化的加重逐渐降低;同时模型组小鼠肝脏H3K9ac、H3K56ac、IL-1β和IL-18表达水平在8、12周时明显升高(P<0.05);SIRT6沉默后,与NC siRNA组比较,SIRT6 siRNA组中的H3K9ac和H3K56ac显著增加(P<0.05).结论:SIRT6缺乏通过H3K9ac和H3K56ac的异常增多使得IL-1β和IL-18的表达升高,加剧炎症反应而促进肝纤维化进程,提示SIRT6的表达异常参与了肝纤维化进程的发展.

目的:分析1例A w37B亚型患者及其家系的血清学和分子特征，探讨其分子生物学机制及在疑难血型鉴定和临床输血中的意义。 方法:应用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-sequence specific primer，PCR-SSP)进行 ABO基因分型，并对 ABO基因的全部外显子进行扩增产物直接测序。进一步对第6、7外显子进行克隆测序。 结果:先证者红细胞为A弱B表型，其血清样本中含有弱反应性抗-A抗体，依据血清学特征可定义为A wB血型。血型基因分型检测到 A和 B等位基因。基因克隆测序显示在 A等位基因第7外显子存在 ABO* AW.37的特征性变异c.940A>G，导致多肽链第314位的赖氨酸(Lys)被谷氨酸(Glu)替换。同时测序发现先证者的女儿遗传了 ABO* AW.37等位基因。 结论:ABO血型基因第7外显子c.940A>G变异导致α-1，3-N-乙酰半乳糖基转移酶活性降低，产生A w37表型。

目的:探讨砷暴露大鼠肝脏组蛋白H3第18位赖氨酸乙酰化（H3K18ac）水平与砷致肝损伤的关系，为砷中毒肝损伤机制及干预研究提供新靶点。方法:选取健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，按体质量（80~100 g）采用随机数字表法分为对照组，低、中、高砷剂量组，每组6只。对照组给予去离子水灌胃，低、中、高砷剂量组按体质量用亚砷酸钠（NaAsO 2，2.00 g/L）溶液灌胃（灌胃量依次为2.5、5.0、10.0 mg/kg·bw），每周染砷6 d，持续4个月。实验终末收集各组大鼠肝脏组织及外周血，采用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）检测肝砷含量；酸抽提法提取大鼠肝脏组蛋白，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测H3K18ac水平；采用全自动生化分析仪检测大鼠血清总胆汁酸（TBA）及谷氨酰胺转移酶（γ-GT）水平。 结果:对照组，低、中、高砷剂量组肝砷含量[中位数（四分位数间距）：2.41（1.83，2.99）、62.64（56.26，65.17）、68.81（62.58，77.24）、88.48（74.47，98.99）μg/g]比较差异有统计学意义（ H=18.98， P < 0.01），低、中、高砷剂量组均高于对照组（ P均< 0.05）；且大鼠肝砷含量随染砷剂量增加逐渐升高（ Z趋势=5.04， P < 0.01）。对照组，低、中、高砷剂量组血清TBA、γ-GT水平比较差异有统计学意义（ F=11.11、12.26， P均< 0.05）；且大鼠血清TBA、γ-GT水平随染砷剂量增加逐渐升高（ F趋势=32.09、33.22， P均< 0.01）。对照组，低、中、高砷剂量组肝组织H3K18ac水平比较差异有统计学意义（ F=4.62， P < 0.05），中、高砷剂量组显著低于对照组（ P均< 0.05）；且大鼠肝组织H3K18ac水平随染砷剂量增加逐渐降低（ F趋势=12.82， P < 0.01）。相关性分析结果显示，大鼠肝砷含量与肝功能指标TBA、γ-GT水平呈正相关（ r=0.631、0.863， P均< 0.01），与H3K18ac水平呈负相关（ r=- 0.476， P < 0.05）；H3K18ac水平与肝功能指标TBA、γ-GT水平呈负相关（ r=- 0.628、- 0.544， P均< 0.05）。H3K18ac对砷致肝损伤的中介效应检验结果显示，组蛋白H3K18ac在砷暴露对肝功能指标的影响中具有部分中介效应，其对TBA和γ-GT水平的中介效应分别占总效应的37.10%[95%置信区间（ CI）：9.71%~92.45%]和20.05%（95% CI：2.61%~52.89%）。 结论:大鼠肝脏H3K18ac水平不仅响应于砷暴露，还与砷诱导的肝损伤密切相关，提示H3K18ac可能作为砷中毒肝损伤机制及干预研究的新靶点。

胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统肿瘤中最具侵袭性和致死性的类型，以进展快、易复发和治疗抵抗为特征。腺病毒早期区域1A蛋白结合p300蛋白(简称p300)是一种功能丰富的蛋白，可作为转录辅激活物和赖氨酸乙酰转移酶发挥作用。目前研究表明p300在GBM的发生、增殖、侵袭和放化疗抵抗中具有着重要价值。本文现围绕p300的结构、功能及其参与GBM发生发展的多种途径、转化应用前景等方面的相关研究进展进行综述，以期为GBM研究提供更多的参考借鉴。

目的 探究赖氨酸乙酰转移酶 8(KAT8)在结直肠癌细胞增殖过程中所扮演的角色及潜在作用机制.方法 通过TCGA数据库的RNA-seq数据分析KAT8 在结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织的表达情况;集落形成实验和CCK8 法检测KAT8 敲低细胞的增殖;利用GEO数据库对KAT8 敲低细胞与对照细胞的差异基因进行分析,并进一步进行功能通路富集分析;利用cBioPortal网站分析结直肠癌数据库中KAT8 与调控N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的相关性;Western blot 检测KAT8 和METTL3 的蛋白表达.结果 与人正常结直肠组织相比,KAT8 在结直肠癌中高表达(P＜0.05);敲低或选择性抑制KAT8 抑制结直肠癌细胞系增殖(P＜0.05);敲低KAT8 降低结直肠癌细胞总RNA的m6A修饰水平(P＜0.05);敲低KAT8 抑制METTL3 的表达(P＜0.05);过表达METTL3 能够逆转敲低KAT8抑制的细胞增殖(P＜0.05).结论 KAT8 通过增强METTL3 介导的m6A修饰进而促进结直肠癌细胞系的增殖.

目的 本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA 0IP5-AS1)转录的促进作用,探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响.方法 白细胞介素13(IL-13)处理NEC以建立AR细胞模型.采用实时定量PCR检测0IP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和体外细胞模型中的表达.ELISA检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、嗜酸性粒细胞趋化因子1(eotaxin-1)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的浓度.原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法用于检测NEC的凋亡.双荧光素酶报告实验用于验证OIP5-AS1和TLR4的关系.染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析用于验证0IP5-AS1启动子区组蛋白的H3K27乙酰化修饰.结果 与健康对照和未处理的NEC相比,0IP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和IL-13刺激的NEC中均表达升高.敲减0IP5-AS1可降低IL-13诱导的NEC的TLR4水平,而过表达OIP5-AS1可增加IL-13处理的NEC的TLR4水平.敲减0IP5-AS1可降低IL-13处理的NEC凋亡率及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC的分泌,而过表达TLR4可部分逆转敲减OIP5-AS1对NEC凋亡及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC表达的影响.此外,H3K27ac在0IP5-AS1的启动子区域显著富集,H3K27乙酰化可促进OIP5-AS1在IL-13诱导的NEC中的表达.结论 H3K27乙酰化修饰促进OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导AR中NEC凋亡.

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点.方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对HpG2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测HepG2细胞与L02细胞KAT2A mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对HpG2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员DN端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况.结果 大黄素能降低HpG2细胞活性,半抑制浓度(IC50)95%置信区间为58.12～66.52μmol/L.与正常肝组织相比,组蛋白乙酰化相关基因mRNA水平在肝癌组织中表达增高,且KAT2A变化倍数最大[log2(Fold Change)=2.010,P＜0.01];在肝癌组织中,KAT2A mRNA的表达与细胞凋亡通路呈负相关(rs=-0.230,P＜0.01).与L02细胞相比,KAT2A mRNA在HepG2中表达升高(P＜0.05);与对照组相比,大黄素干预组HAT和HDAC的表达水平下降,IL-18、IL-1β表达水平水平增高,细胞凋亡率升高,KAT2A、BAX的表达降低,Bcl-2、NLRP3、GSDMD-N及Caspase-1表达水平升高(P＜0.05).结论 大黄素可抑制肝癌细胞活力,加速细胞凋亡和焦亡,其机制可能与调控KAT2A表达相关.

目的·利用冷冻电镜技术分析人源性赖氨酸乙酰转移酶7(lysine acetyltransferase 7,KAT7)的全长蛋白结构,获得人源KAT7的轮廓信息.方法·使用pGEX-4T1载体和人源KAT7全长基因构建重组蛋白表达质粒pGEX-4T1-GST-KAT7,在原核蛋白表达体系BL21(DE3)中表达KAT7蛋白,使用GST亲和层析获得GST-KAT7重组蛋白;在利用TEV蛋白酶去除GST蛋白标签后,通过HiLoad 16/600 Superdex 75 pg体积排阻色谱进一步分离纯化KAT7蛋白.将获取的蛋白样品利用蛋白质印迹法(Western blotting)对KAT7进行鉴定,使用负染电镜筛选样品并初步观察蛋白形貌;使用冷冻电镜收集数据,利用冷冻电镜数据分析软件CryoSparc挑选蛋白颗粒并分析KAT7全长蛋白的空间结构;通过UCSF Chimera软件将蛋白质数据库(Protein Data Bank,PDB)中KAT7的MYST结构域模型(5GK9)、AlphaFold预测模型与生成的结构模型进行匹配分析.结果·利用亲和层析成功纯化人源性KAT7的全长蛋白,并通过体积排阻色谱获得高纯度的KAT7蛋白;在通过Western blotting鉴定KAT7后,利用负染电镜、冷冻电镜及单颗粒重构技术初步解析了KAT7全长蛋白的空间结构,并通过三维优化处理获得了分辨率约为10A的初步三维结构模型;KAT7全长蛋白空间结构呈不规则的半环状,已有的MYST结构域模型(PDB:5GK9)可匹配入KAT7全长模型的C端部分,调整后的AlphaFold预测模型也可匹配KAT7全长结构模型.结论·利用冷冻电镜技术初步分析了人源性KAT7的全长蛋白空间结构模型.

组蛋白的共价修饰包括乙酰化、甲基化在基因表达调控上起着重要的作用. 组蛋白H3 的N端赖氨酸(Lysine,K)修饰最为多样和重要,K4(代表 4位赖氨酸)、K9 和K27 等为甲基化修饰位点,而K9、K14 和K27 等为乙酰化修饰位点. 组蛋白乙酰化修饰拥有基因激活效应,而甲基化修饰则存在位点差异[1] . 甲基化的赖氨酸的残基以及甲基化的状态(单甲基化、二甲基化、三甲基化)能够促进或者抑制基因的转录[2] . 甲基转移酶和去甲基化酶动态调控组蛋白甲基化.

目的 探讨序列相似家族135成员B(FAM135B)与赖氨酸乙酰转移酶(KAT5)在维吾尔族食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达规律.方法 使用罗氏全自动免疫组化仪检测40对维吾尔族ESCC及其癌旁组织中FAM135B与KAT5的表达情况,分析两种蛋白间表达的相关性及与临床特征的相关性.结果 维吾尔族ESCC标本中FAM135B、KAT5表达分别占92.50％(37/40)、15.00％(6/40);癌组织中FAM135B表达强阳性者所占比例高于癌旁组织[45.00％(18/40)vs 22.50％(9/40),χ2=4.528,P=0.033];癌组织中KAT5表达阴性者所占比例与癌旁组织差异无统计学意义[85.00％(34/40)vs 87.50％(35/40),χ2=0.105,P=0.745];ESCC与其配对癌旁组织FAM135B强阳性表达具有良好正相关性(Kendall相关系数=0.707,P<0.001);癌组织的FAM135B强阳性表达与其KAT5表达具有显著负相关性(Kendall相关系数=-0.946,P<0.001);FAM135B与KAT5表达与ESCC患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均无明显相关性(P>0.05).结论 FAM135B强阳性表达可能是维吾尔族ESCC发生的重要分子基础,且该分子可能通过KAT5的负性表达发挥作用.