目的:评价胆碱能生物标记物与老年患者术后谵妄(POD)的关系。方法:收集2018年7月至2019年9月本院择期在脊椎-硬膜外阻滞下行全膝/髋关节置换术患者，年龄65～85岁，体重50～80 kg，ASA分级Ⅰ～Ⅲ级。收集患者一般临床资料，于麻醉前取肘静脉血5 ml，采用ELISA法检测血浆胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、丁酰胆碱酯酶(BuChE)、TNF-α和IL-6浓度。于术前1 d、术后入恢复室、术后1、3和7 d(或出院前)同一时段进行神经心理学测试，术前采用简明智力状态检查量表(MMSE)评估术前认知状态，术后采用CAM法和MDAS法评估POD的发生情况，根据是否发生POD分为POD组(P组)和非POD组(NP组)。采用logistic回归分析筛选POD的危险因素。结果:NP组349例，P组57例，POD发生率为14.0%。与NP组比较，P组患者年龄、术前并存基础疾病(≥3种)、血浆ChAT、TNF-α和IL-6浓度升高，AChE和BuChE浓度降低( P<0.05)。logistic回归分析结果显示，血浆AChE、BuChE、ChAT浓度变化和高龄是发生POD的独立危险因素( P<0.05)。 结论:老年患者POD的发生与术前血浆AChE、BuChE和ChAT浓度变化有关。

目的:探索硫醇乙酰基转移酶MshD对结核分枝杆菌在体外生长、应对压力刺激和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响.方法:利用CRISPR-NHEJ基因编辑技术,构建结核分枝杆菌mshD基因敲除株(ΔmshD株)和回补株(ΔmshD∷mshD株).分别检测H37Rv野生株(WT)、ΔmshD株和ΔmshD∷mshD株在液体培养基和固体培养基中的生长情况,以及外源添加L-半胱氨酸和过氧化氢酶对菌株生长的影响;检测3种菌株对不同刺激剂如H2O2、二硫苏糖醇(DTT)、十二烷基硫酸钠(SDS)的敏感性,以及外源添加过氧化氢酶对压力条件处理后菌株的恢复情况;采用流式细胞术检测SDS处理3种菌株前后菌株的ROS水平.结果:与WT和ΔmshD∷mshD株相比,ΔmshD株在固体平板上的生长较为缓慢,外源添加过氧化氢酶可以恢复其生长趋势;ΔmshD 株应对 DTT[WT(6.96±2.02)％,ΔmshD(0.02±0.00)％,ΔmshD∷mshD(6.64±0.77)％;F=29.700,P＜0.001],H2O2[WT(0.23±0.06)％,ΔmshD(0.01±0.00)％,ΔmshD∷mshD(0.26±0.06)％;F=25.520,P=0.001]和 SDS[WT(0.12±0.03)％,ΔmshD(0.01±0.00)％,ΔmshD∷mshD(0.18±0.04)％;F=19.540,P=0.002]刺激的存活率更低,差异均有统计学意义;外源添加过氧化氢酶可以恢复其存活率.ΔmsshD株自身ROS水平高于 WT(WT:95.100±2.553,ΔmshD:106.000±4.000,Δmsh∷mshD:94.667±3.055;F=11.650,P=0.009),SDS 处理 ΔmshD 株的自身 ROS 水平进一步升高(WT:436.000±8.000,ΔmshD:533.667±4.726,ΔmshD∷mshD:441.333±2.517;F=292.900,P＜0.001),差异均有统计学意义.结论:mshD基因缺失在固体培养基中生长减慢,mshD基因协助结核分枝杆菌抵抗各种应激压力,ΔmshD菌株内源性ROS水平增加.外源添加过氧化氢酶可一定程度恢复mshD基因敲除株生长和存活缺陷.

目的 体外构建高糖诱导HT-22小鼠海马神经元"代谢记忆"细胞模型,探究"代谢记忆"对HT-22细胞凋亡和组蛋白乙酰化的影响.方法 以高糖培养基(葡萄糖浓度为55 mmol/L)和常规糖培养基(葡萄糖浓度为25 mmol/L)培养HT-22细胞,分为常糖组(NG 4、6、8组,25 mmol/L葡萄糖分别培养4、6、8 d),高糖组(HG 4、6、8组,高糖培养4、6、8 d),代谢记忆组(HG2NG2、HG2NG4、HG2NG6、HG4NG2、HG4NG4组,即高糖2d转25 mmol/L葡萄糖培养2、4或6d,高糖4d转25 mmol/L葡萄糖培养2d或4 d).CCK-8法检测细胞活力变化,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,筛选出建立"代谢记忆"模型的最佳作用时间.后续将细胞分为NG4组、NG8组、HG4组、HG4NG4组和HG8组,光学显微镜观察各组细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测去乙酰化酶(HDAC)和组蛋白乙酰转移酶(HAT)活性;Western blot检测组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达情况.结果 HG4NG4组为理想的高糖"代谢记忆"细胞模型;NG4、NG8组细胞交织成致密网状,生长状态良好,细胞呈梭形,突触结构明显.而HG4、8组细胞胞体变圆,突触结构消失,生长受抑,HG4NG4组细胞数量增多但形态受损;流式细胞术结果显示,与NG8组相比,HG8、HG4NG4组凋亡率增加(P＜0.05);ELISA结果表明,与NG8组相比,HG8组及HG4NG4组HAT和HDAC的水平均增高(P＜0.05),与HG8组相比,HG4NG4组HAT和HDAC差异无统计学意义;Western blot结果显示,与NG8组相比,HG8组、HG4NG4组HDAC4、Bax和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05),与HG8组相比,HG4NG4组蛋白表达差异无统计学意义.结论 HT-22小鼠海马神经元细胞经高糖55 mmol/L培养4d后,再以25 mmol/L葡萄糖培养4d是理想的高糖"代谢记忆"细胞模型.其机制可能与高糖模型中HDAC、HAT活性及HDAC4表达升高有关.

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点.方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对HpG2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测HepG2细胞与L02细胞KAT2A mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对HpG2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员DN端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况.结果 大黄素能降低HpG2细胞活性,半抑制浓度(IC50)95%置信区间为58.12～66.52μmol/L.与正常肝组织相比,组蛋白乙酰化相关基因mRNA水平在肝癌组织中表达增高,且KAT2A变化倍数最大[log2(Fold Change)=2.010,P＜0.01];在肝癌组织中,KAT2A mRNA的表达与细胞凋亡通路呈负相关(rs=-0.230,P＜0.01).与L02细胞相比,KAT2A mRNA在HepG2中表达升高(P＜0.05);与对照组相比,大黄素干预组HAT和HDAC的表达水平下降,IL-18、IL-1β表达水平水平增高,细胞凋亡率升高,KAT2A、BAX的表达降低,Bcl-2、NLRP3、GSDMD-N及Caspase-1表达水平升高(P＜0.05).结论 大黄素可抑制肝癌细胞活力,加速细胞凋亡和焦亡,其机制可能与调控KAT2A表达相关.

目的 探讨siRNA抑制饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)对肝脂肪变性影响及作用机制.方法 游离脂肪酸(FFA)作用于人肝细胞系LO2细胞以诱导肝细胞脂肪变性.FFA与siRNA-GOAT单独或联合处理LO2细胞,分为4组,即空白对照(NC)组:仅用PBS处理;siRNA-GOAT组:仅以终浓度为10 nmol/L的siRNA-GOAT处理;FFA组:仅以终浓度为1 mmol/L的FFA处理;FFA+ siRNA-GOAT组:采用上述浓度FFA和siRNA-GOAT混合处理.肝细胞油红O染色检测脂肪滴形成情况;TG检测试剂盒检测LO2细胞脂质水平;免疫印迹法(Western Blot)、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光染色、电子显微镜检测自噬活性;酶联免疫吸附测定法、RT-PCR检测TNFα、IL-6水平.Western Blot检测雷帕霉素(mTOR)、磷酸化mTOR(pmTOR)、AMP-活化蛋白激酶(AMPK)以及磷酸化AMPK(p-AMPK)的蛋白水平变化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 FFA+ siRNA-GOAT组脂肪滴形成较FFA组明显减轻,TG水平明显低于FFA组,差异有统计学意义(P ＜0.001).FFA+ siRNA-GOAT组TNFα和IL-6蛋白、mRNA表达水平较FFA组均明显下降,差异均有统计学意义(P值均＜0.005).siRNA-GOTA组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).FFA+siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).FFA+ siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).免疫荧光染色示FFA+ siRNA-GOAT组LO2细胞中内源性LC3-Ⅱ表达水平较FFA组、siRNA-GOAT组升高.电子显微镜观察结果示FFA+ siRNA-GOAT组自噬体表达较FFA组增加.自噬抑制剂siRNA-ATG5、3-MA或刺激剂雷帕霉素处理LO2细胞后,FFA+ siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组TG水平分别与FFA+ siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).FFA+ siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组LC3-Ⅰ/Ⅱ水平明显高于FFA+ siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).FFA+ siRNA-GOAT组p-AMPK蛋白表达水平明显高于于FFA组、p-mTOR蛋白表达水平明显低于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 siRNA抑制GOAT可通过调节AMPK/mTOR通路,上调自噬活性,进而减轻肝细胞内脂肪变性.

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞来源的恶性克隆增殖性疾病,发病率居血液系统肿瘤第2位.骨髓瘤溶骨性病变是骨髓瘤主要临床特征之一,主要是由骨髓瘤疾病状态下破骨细胞异常激活,成骨细胞功能抑制所致.组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)广泛表达于机体多种细胞组织,可以调节细胞的增殖分化,参与肿瘤的发生和发展.HDACs不仅可以促进骨髓瘤细胞的增殖与耐药,也可以正向调节破骨细胞的分化成熟,同时抑制成骨细胞的功能.部分HDACs小分子抑制剂体现出抗骨髓瘤和骨保护的双重作用.因此,进一步深入研究HDACs在骨髓瘤及其溶骨性损害中的作用机制可能为骨髓瘤的治疗提供更新、更精准的靶点和理论依据.

肿瘤的发生和进展是遗传和表观遗传共同作用的结果.组蛋白脱乙酰化修饰作为重要的表观遗传修饰的一种,对肿瘤的发生与发展有不可忽视的作用.组蛋白脱乙酰基酶在正常组织及细胞中的异常表达,会促进肿瘤的发展,并与肿瘤细胞的增殖和凋亡、血管生成、转移及耐药等方面相关,成为肿瘤治疗的新靶点.组蛋白脱乙酰基酶抑制剂作为抗肿瘤药物显示出良好的应用前景.

目的 探讨β1,2-N-乙酰氨基葡萄糖-氧位-甘露糖基转移酶1(protein O-linked mannose β1,2-N-acetylglucosaminyltransferase 1,POMGnT1)基因是否参与了阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的病理生理过程.方法 通过实时PCR和蛋白免疫印迹法,检测POMGnT1基因在AD模型细胞系[N2a/淀粉样前体蛋白(APP) 695 swe,n=3]和正常对照细胞系(N2a/wt,n=3)转录和翻译水平上的差异.利用免疫荧光染色比较POMGnT1基因在5个月龄AD模型小鼠(APP/PS1,n=3)和同月龄正常野生型对照小鼠脑组织(n=3)中的表达差异.通过免疫组织化学的方法,检测POMGnT1基因敲除小鼠2个月龄(n=3)和1岁龄(n=3)脑组织中β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的差异.结果 POMGnT1基因在AD模型细胞系中mRNA(0.80±0.02)和蛋白质(0.50±0.02)的含量均显著低于正常对照细胞系(mRNA:1.00,t=10.52,P＜0.01;蛋白质:1.31±0.04,t=18.64,P＜0.01).免疫荧光染色结果显示,POMGnT1在AD模型小鼠中的阳性表达率明显低于正常野生型对照小鼠.免疫组织化学结果显示,2个月龄(0.358±0.014和0.048±0.001,t=22.58,P＜0.01)和1岁龄(0.266±0.004和0.229±0.003,t=7.771,P=0.002) POMGnT 1-/-小鼠的脑中Aβ沉积均显著较同月龄正常野生型小鼠多.结论 POMGnT1基因参与了AD的病理生理过程,并且起到了正向保护作用.

沉默调节蛋白(SIRT)家族是一类高度保守、依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷(NAD+)的去乙酰化酶类,包括7个家族成员(SIRT 1～7).定位于线粒体的SIRT-4具有去乙酰基酶、ADP-核糖转移酶、依赖NAD+蛋白脂酰胺酶和脱酰酶活性,参与线粒体蛋白翻译后修饰,调节体内多个代谢过程.由于代谢功能障碍与肝脏疾病息息相关,近些年,SIRT-4在肝脏疾病中的作用及调控机制日益受到关注.阐述了SIRT-4在病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化以及肝细胞癌等疾病中的作用,为这些肝脏疾病的防治提供新的视角.

目的 检测N-乙酰基转移酶10(NAT10)在透明细胞性肾细胞癌(CCRCC)中的表达情况,并探讨其意义.方法 对100例CCRCC临床病理标本进行NAT10抗体的免疫组织化学染色,并对染色结果进行观察.结果 100例CCRCC患者中,NAT10的表达率为100％,染色强度高于肿瘤旁正常组织,其着色部位为细胞核及胞浆,并在核仁区有特异着色.结论 NAT10在CCRCC中高表达,并在核仁区有特异着色,NAT10有望成为临床辅助CCRCC诊断及核仁的新标记物.