目的 建立一种人体血清中心脏毒素的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS-MS)的检测新方法.方法 向100μl血清样品中加入300 μl乙腈沉淀蛋白,-20℃冷冻2 h,高速离心10 min,取上层有机相用纯水按照1:1比例稀释,然后过膜、上机测定.样品分离采用梯度洗脱模式,流动相为0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液,柱温为70℃,Protein BEH C4色谱柱分离,采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式测定血清中心脏毒素浓度,外标法定量分析.结果 心脏毒素在2.0～200.0 μg/L范围内呈现良好的线性关系,r=0.999 2.该方法的回收率为98.6％～115.0％,RSD为3.6％～9.8％;检出限为0.6μg/L.结论 该方法操作简单,灵敏度和准确度均较高,适用于血清中心脏毒素的快速测定.

[目的]建立化妆品中葡糖醛酸、酒石酸、羟基乙酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、2-羟基丁酸钠、扁桃酸、二苯乙醇酸、羟基辛酸、乳糖酸、葡糖酸、N-乙酰神经氨酸等13种α-羟基酸类化合物的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定法.[方法]水剂、膏霜、乳液类化妆品经超声提取、澄清剂净化、10 000.0 r·min-1高速离心处理,上层溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤后进样.采用Poroshell 120 EC-C18反相色谱柱(2.7 μm,4.6 mm×100 mm)分离,以0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,采用电喷雾负离子源(ESI-),多反应监测(MRM)扫描方式监测,外标法定量测定.[结果]葡糖醛酸、酒石酸、苹果酸、2-羟基丁酸钠、二苯乙醇酸、羟基辛酸、N-乙酰神经氨酸等7种化合物在50.0～2 000.0 μg·L-1的浓度范围内呈线性关系(r>0.995);羟基乙酸、乳酸、柠檬酸、扁桃酸等4种化合物在100.0～5 000.0 μg·L-1的浓度范围内呈线性关系(r>0.995);乳糖酸、葡糖酸等2种化合物在50.0～5 000.0 μg·L-1的浓度范围内呈线性关系(r>0.995).考察了水剂、膏霜、乳液类化妆品的加标回收率.回收率结果在92.3%～114.1%,相对标准偏差(RSD)在0.9%～6.0%.葡糖醛酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、2-羟基丁酸、二苯乙醇酸、羟基辛酸、乳糖酸、葡糖酸、N-乙酰神经氨酸的方法检出限均为0.003%;羟基乙酸、乳酸、扁桃酸的方法检出限均为0.006%.10批市售化妆品中8批为阳性.[结论]UHPLC-MS/MS法高效、灵敏、准确,适用于化妆品中葡糖醛酸、酒石酸、羟基乙酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、2-羟基丁酸、扁桃酸、二苯乙醇酸、羟基辛酸、乳糖酸、葡糖酸、N-乙酰神经氨酸等13种α-羟基酸的检测.

目的 考察l-四氢巴马汀(l-THP)对氯胺酮诱导大鼠条件位置偏爱(CPP)的表达、消退和复吸的影响.检测大鼠大脑纹状体(CPu)多巴胺(DA)在不同时间点的含量.方法 采用CPP建立氯胺酮成瘾大鼠模型,以CPP得分为指标,考察l-THP对氯胺酮诱导大鼠CPP的表达、消退和复吸的影响.采用超高速液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定氯胺酮给药以及l-THP干预后30 min、60 min、90 min、120 min、150 min大鼠CPu的DA含量.结果 /-THP可减弱氯胺酮诱导大鼠CPP的表达,并促进其消退,抑制氯胺酮的复吸.此外,l-THP联合氯胺酮给药可显著抑制氯胺酮诱导的大鼠CPu中DA含量的增加.结论 l-THP抑制氯胺酮奖赏作用的机制可能与阻滞DA受体,减少DA神经递质释放有关.l-THP对于治疗氯胺酮成瘾具有潜在的意义.

目的:对三七中农药多残留进行筛查研究,初步了解其农药残留状况,并评估高检出农药的健康风险,为现有标准最大残留限量值的制(修)订提供科学依据.方法:以乙腈为溶媒,对收集的 16 批三七进行高速匀浆法提取处理;针对拟定的检测指标,分别采用气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)和高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)、多反应监测(MRM)模式进行检测,以不少于 2 组特征离子对进行定性,并采用校准曲线法对检出农药进行定量检测;结合本课题组前期建立的风险评估方法,对检出率较高的高风险农药进行暴露评估,计算其急性和慢性摄入风险.结果:所建方法共有 262 个农药指标(总计 271 个化合物),在线性范围内线性关系良好,灵敏度、回收率均符合痕量多残留分析技术要求.16 批三七样品中共检出 50 种农药,农药检出率较高,多数检出农药处于痕量水平,仅百菌清、毒死蜱、三氟氯氰菊酯、异菌脲、五氯硝基苯、甲基硫菌灵超出团体标准《无公害三七药材及饮片农药与重金属及有害元素的最大残留限量》(T/CATCM 003-2017)的最大残留限量(MRL).水洗可明显降低部分检出农药的残留量.对超出限量标准,以及无相关限量标准但检出率较高的农药品种进行风险评估,结果显示,9 种农药的短期危害指数(HIa)为 0.000 2～0.141 8、长期危害指数(HIc)为 0.000 4～0.009 0,其中五氯硝基苯的HIa和HIc较高,但风险可接受.结论:建立了三七中 262 种农药多残留筛查方法,并采用暴露评估方法中的点评估模式对其进行健康风险评估,可为三七相关农药残留限量标准的制修订提供参考.

目的 建立了超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法检测血液中芬普雷司的方法 .方法 将血液用乙腈沉淀蛋白后,高速离心,取上清液经 0.22 μm PTFE 滤膜过滤后进样,选用 Kinetex? C18(100×2.1 mm,2.6 μm)色谱柱,以 0.1%的甲酸及 5 mmol/L 甲酸铵水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速 0.5 mL/min.选择电喷雾离子源(ESI),采用多反应监测(MRM)的模式,优化质谱参数,离子对为:m/z 189.3/91.1 和 m/z 189.3/119.0.结果 试验结果 表明,芬普雷司0.5～500 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性相关系数 0.9933,最低检测浓度(LOQ,S/N= 3)为0.1 ng/ml,定量限0.5 ng/ml,空白添加回收率84.3%～92.1%,精密度为 1.9%～2.8%.结论 建立的 LC-MS/MS 分析方法 准确、快速、有效,可应用于血液中芬普雷司定量和定性要求.

首次运用高速逆流色谱(HSCCC)技术从经表观遗传试剂诱导的曲霉属真菌Aspergullus versicolor的次级代谢产物中快速分离纯化得到二苯醚类化合物diorcinol,建立了快速分离制备杂色曲霉次级代谢产物中的二苯醚类化合物的方法.本研究首先对经过表观遗传试剂诱导的菌株D J013的发酵液用乙酸乙酯浸提,萃取富集二苯醚类成分,然后以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:4:5,v/v)为两相溶剂系统进行高速逆流色谱分离纯化,上相为固定相,下相为流动相,流速5.0 mL/min,实验温度25℃,转速为800 rpm,检测波长为220 nm.对所得到的目标化合物经超高效液相色谱(UPLC)纯度分析,其纯度在97％以上.通过质谱、核磁等波谱技术鉴定所分离得到的目标化合物为二苯醚类化合物diorcinol.与前期研究中采用的柱色谱法、HPLC等多种方法相结合的长达48 h的制备周期相比,高速逆流色谱法仅需55 min,效率大大提高.该结果表明,本研究建立的高速逆流色谱方法可高效高纯度获得具有抗菌活性的二苯醚类化合物,将为二苯醚化合物的进一步研究提供高效制备方法.

目的 建立光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的超高液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC MS/MS)定量检测方法.方法 在纯甲醇溶液中破碎光滑双脐螺神经系统,经过2次高速离心获得含有目标检测物的上清液,通过ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱、Waters TQ-XS系列质谱检测器,采用ESI源、正离子模式上机检测.结果 光滑双脐螺神经系统五羟色胺UPLC MS/MS检测限为0.03 ng/ml,定量限为0.1 ng/ml;多巴胺UPLC MS/MS检测限为0.05 ng/ml,定量限为0.15 ng/ml.在1~40 ng/ml添加范围内,五羟色胺的回收率为90.68%~94.72%;多巴胺的回收率为91.68%~96.12%.结论 建立的UPLC MS/MS方法操作简单、检测结果稳定、重复性良好,可用于光滑双脐螺神经系统五羟色胺和多巴胺的定量检测分析和研究.

1 资料与方法1.1 材料 实验用品为:Aglient 1260高效液相色谱仪;TG16-W微量台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司,型号:AL204);Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6mm×150 mm,5μm);MTX对照品(中检所,批号:100138-201104,含量99.4％),甲醇(色谱纯,HPLC/Spectro,LOT:15045040,MS1922-804,UN1230),氢氧化钠(分析纯,批号:20140908,重庆茂业化学试剂有限公司),高氯酸(分析纯,批号:20120702,天津政成化学制品有限公司),超纯水(超纯水机型号:SMART-N15UV),患儿空白血清.

目的:建立硝苯地平原料药粒径测定方法,研究不同粒径硝苯地平原料药对其缓释片(Ⅰ)体外溶出行为的影响.方法:采用光散射法对硝苯地平原料药粒径测定进行方法学考察;采用高速万能粉碎机制备不同粒径的硝苯地平原料药样品,用高效液相色谱法测定硝苯地平缓释片(Ⅰ)的体外溶出曲线,并以国外原研制剂硝苯地平缓释片(商品名:Adalat-L,规格:10 mg)为参比制剂,用相似因子f2法进行溶出曲线的相似性比较.结果:粒度测定条件为:粒度分析仪的泵速为1 800 r·min-1,遮光比为8% ~20% ,背景与样品的扫描时间为0 s,介质溶液为0. 3%吐温80,样品超声时间为1 min.溶出曲线结果表明,硝苯地平原料药粒径越小,溶出越好. Dv90(占总粒子量90%的粒子对应的粒径)从118. 781 μm减小至3. 471 μm时,自制硝苯地平缓释片在0. 25 h时的累积溶出度从11. 2%增加至44. 0% ,溶出曲线与原研制剂溶出曲线相似因子f2先增大后降低,Dv90为29. 823 μm时,f2值为77,表明自制片与原研片溶出曲线具有较高的相似度.结论:原料药微粉化技术可显著提高硝苯地平缓释片的体外溶出度,但粒度过细会影响硝苯地平缓释片的缓释效果.为获得与原研品生物等效的制剂,硝苯地平原料药应控制15 μm≤Dv90≤45 μm.

目的 建立具有大体积流通池的荧光检测超高效液相色谱法测定食品中4种生育酚异构体的方法.方法 样品中的生育酚异构体经皂化和液液萃取,Waters BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7 μm)分离,以乙腈加甲醇(1∶1)及纯水作为流动相,梯度洗脱,采用具有大体积流通池的荧光检测器检测.结果 4种生育酚异构体1～60 μg/ml范围内呈良好的线性关系(r2≥0.999 8),平均回收率为78.8％～111％,相对标准偏差(RSD)为0.22％～10.8％.结论 方法简便、快速、灵敏度高、试剂用量少,适用于食品中生育酚的常规检测.