目的:分析1个Cohen综合征家系的临床表型与遗传学特征，并为产前诊断提供实验依据。方法:选取2021年6月2日因"智力障碍及发育迟缓"就诊于郑州人民医院的Cohen综合征女性先证者、先证者妹妹及其家系成员(3代共11人)作为研究对象，收集先证者及先证者妹妹的临床资料。提取该家系成员外周血样品及胎儿胎盘绒毛样品基因组DNA，利用染色体微阵列技术(CMA)检测先证者染色体异常情况。利用全外显子组测序(WES)及Sanger测序，寻找先证者候选变异位点，并进行家系验证。提取家系成员外周血RNA，进行体内剪接变异体检测，应用RT-PCR分析 VPS13B基因的mRNA表达水平，并对胎龄12周的胎儿的进行产前诊断。 结果:先证者为10岁女性，临床表现为发育迟缓、躯体肥胖、高度近视、特殊面容。先证者妹妹为3岁女性，具有与先证者相同表型。CMA结果提示先证者染色体未见异常。WES结果发现先证者及其妹妹 VPS13B基因存在2个杂合变异，分别为c.10076_10077delCA(p.T3359fs *29)缺失移码变异及c.6940+1G>T剪接位点变异，均已有报道。母亲为c.10076_10077delCA(p.T3359fs *29)变异携带者，遗传自先证者外祖父。父亲为c.6940+1G>T变异携带者，遗传自先证者祖母。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南，c.10076_10077delCA评级为致病性变异(PVS1+PS4+PM4+PP1)，c.6940+1G>T评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PM3+PP1)。c.6940+1G>T剪接位点变异导致 VPS13B基因第38外显子发生跳跃，产生1个缺失69个氨基酸的转录本。与对照组相比，先证者父母在外周血中mRNA表达水平降低至65%~70%( P<0.01)、先证者及其妹妹降低至40%( P<0.001)。对胎龄12周的胎儿的产前诊断发现胎儿存在c.10076_10077delCA杂合变异。 结论:VPS13B基因的c.10076_10077delCA(p.T3359fs *29)缺失移码变异及c.6940+1G>T剪接位点变异考虑为该家系先证者及其妹妹患Cohen综合征的致病原因。基因检测技术可以辅助临床医师诊断Cohen综合征。

目的:探讨 ATP7B基因罕见同义变异对其前体mRNA剪接的影响。 方法:从ExAc数据库中筛选出人群等位基因频率<0.005的248种罕见同义变异，用Human Splicing Finder(HSF)软件分析其对于前体mRNA剪接的影响，进一步用ESE Finder 3.0软件预测其对于反式作用因子SR蛋白家族结合能力的影响。筛选出同时影响两种或以上SR蛋白结合的罕见同义变异，用体外迷你基因剪接报告系统进行验证。结果:HSF分析提示有136种罕见同义变异可能破坏外显子剪接增强子(exonic splicing enhancer，ESE)的基序；ESE Finder 3.0分析提示其中19种会同时影响两种或以上SR蛋白的结合。体外迷你基因实验证实其中c.1620C>T(p.L540L)和c.3888C>T(p.A1296A)变异可导致相应外显子的剪接异常，分别造成第4外显子的完全跳跃以及使第18外显子的跳跃增加25%。结论:同义变异可能通过各种途径影响前体mRNA的剪接，其中以破坏ESEs基序最为常见。本研究结果证实c.1620C>T(p.L540L)和c.3888C>T(p.A1296A)变异会对 ATP7B基因的mRNA剪接产生影响，使相应的外显子发生跳跃，从而为携带者的基因诊断和遗传咨询提供了依据。

目的:糖原贮积症Ⅸ型（GSD-Ⅸ）是一种罕见的磷酸肌酸化激酶缺乏导致的原发性糖代谢异常，由一系列基因致病性变异引起。现对1例肝大患儿进行临床特征总结、基因分析、变异功能验证，明确其致病原因。方法:收集1例GSD-Ⅸ患儿的临床资料，采集患儿及其父母外周血提取基因组DNA，应用二代测序对患者进行基因诊断，对疑似变异进行Sanger测序验证并行生物信息学分析，应用RT-PCR和一代测序对可疑剪接变异进行体内功能验证。结果:患儿表现为肝大、转氨酶和甘油三酯增高，肝穿刺病理检查结果提示糖原贮积症。基因测序发现患儿 PHKA2基因存在c.285 + 2_285 + 5delTAGG半合子变异。Sanger测序验证提示患儿母亲为该变异杂合型，患儿父亲为野生型。HSF3.1及ESEfinder等软件预测该基因变异会影响剪接。患儿及其母亲外周血RT-PCR证实该变异会引起 PHKA2基因组成型剪接时外显子3的跳跃。 结论:PHKA2基因半合子变异（c.285 + 2_285 + 5delTAGG）为患者的致病原因，新变异位点的检出丰富了 PHKA2基因的变异谱，为该家系的遗传咨询提供了依据。

目的:探讨2例成骨不全症(OI)胎儿的临床表型及遗传学特征，明确致病原因。方法:收集分别在2021年6月11日和2021年10月16日就诊于潍坊医学院附属医院的2例中孕期超声诊断疑似OI胎儿的临床资料信息。采集孕妇羊水及胎儿父母、亲属外周血样品提取基因组DNA，对2例胎儿进行全外显子组测序(WES)，对候选变异进行Sanger家系验证。针对可能影响pre-mRNA剪接的变异，利用minigene体外分析变异位点附近外显子的剪接方式，对变异的致病性进行判定。结果:胎儿1在胎龄17 +6周超声显示双侧肱骨和股骨发育落后2周余，四肢长骨多发骨折、成角畸形。胎儿2在胎龄23周超声显示双侧肱骨和股骨发育分别落后1 +周和4周，双侧股骨和胫腓骨弯曲。WES结果显示胎儿1的 COL1A1基因第49外显子存在c.3949_3950insGGCATGT(p.N1317Rfs*114)杂合变异，该变异导致翻译提前终止，胎儿父母外周血中未检出该变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)变异评级指南，c.3949_3950insGGCATGT变异评级为致病性变异(PVS1+PS2+PM2_Supporting)。胎儿2的 COL1A2基因第26内含子中存在父源的c.1557+3A>G杂合变异，剪接报告基因分析提示该变异使 COL1A2基因pre-mRNA第26外显子发生跳跃，导致mRNA转录本第1 504~1 557位编码序列整码缺失及其编码蛋白第502~519位氨基酸缺失，根据ACMG变异评级指南，c.1557+3A>G杂合变异评级为致病性变异(PS3+PM1+PM2_Supporting+PP3+PP5)。 结论:COL1A1基因c.3949_3950insGGCATGT变异、 COL1A2基因c.1557+3A>G变异分别可能为2例OI胎儿的遗传学原因。 COL1A1基因c.3949_3950insGGCATGT的发现丰富了成骨不全致病基因变异谱。

目的:分析一例德朗热综合征1型胎儿的遗传学病因。方法:收集胎儿及其父母的临床资料，采集羊水及父母的外周血样，提取基因组DNA，通过全基因组低深度重测序、全外显子组测序(whole exome sequencing，WES)及Sanger测序筛查 NIPBL基因的变异位点，参考美国医学遗传学与基因组学学会指南判断变异的致病性，利用minigene技术分析变异对mRNA的影响。 结果:测序结果提示胎儿 NIPBL基因的内含子上存在c.5808+5G>A杂合变异，预测可能影响mRNA剪接，胎儿父母未检测到相同的变异。上述变异在ExAC、1000G、dbSNP等数据库中均未见收录，综合分析判断其为有害变异。minigene实验结果证实该变异会影响mRNA剪接，导致第31外显子的跳跃。 结论:确诊了一例德朗热综合征1型胎儿。minigene实验可以在体外验证WES检测所发现的剪接变异，可为判断这类变异的致病性提供更多的证据。

目的:采用高通量测序技术，对一个综合征型耳聋家系的致病基因及突变进行探究。方法:2018年6月至2020年7月，郑州大学第一附属医院耳科联合郑州大学相关机构对该家系进行了研究。该家系来自河南省濮阳市，2代4人，详细询问病史及家族史，绘制家系图。先证者及其妹患有先天性耳聋，其父母表型正常。对该家系进行临床表型分析，包括影像学、听力检查（包括纯音测听、声导抗、脑干诱发电位、耳声发射）、前庭功能检查及眼科检查（包括视力、视野、眼底检查、视觉诱发电位及视网膜电图）。靶向捕获129个耳聋相关基因的编码区域，采用高通量测序方法检测，并进行生物信息学分析，筛选疑似致病突变，使用Sanger测序和minigene试验进行验证。结果:该家系共2代4人，其中第二代2人（即2例患儿）均患有双耳重度感音神经性聋，伴有双眼视力下降、夜盲症、周边视野敏感度下降及部分视野缺损，前庭功能正常。2例患儿均携带 CDH23(NM_022124.5)、c.6049G>A (p.Gly2017Ser)、c.9856C>G(p.His3286Asp）及c.8699A>G (p.Asp2900Gly)，其中c.6049G>A及c.9856C>G遗传自表型正常的父亲，c.8699A>G遗传自表型正常的母亲。错义突变c.9856C>G及c.8699A>G在gnomAD数据库中未收录。错义突变c.6049G>A位于第46号外显子的最后一个碱基位置，生物信息学软件预测其可能影响剪切，minigene试验表明，该突变位点会造成第46号外显子的跳跃，导致其所表达的蛋白功能异常。通过文献检索，并根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南，将c.6049G>A及c.8699A>G归类为致病/可能致病突变，c.9856C>G归类为临床意义未明突变。 结论:该病例是由 CDH23剪切变异与错义变异复合杂合导致的Usher综合征1D型（USH1D）， CDH23的这种复合杂合形式会导致USH1D。

目的:探讨1例多发性翼状胬肉综合征(MPS)患儿的临床特征及遗传学病因。方法:选取2020年8月19日于广州市妇女儿童医疗中心骨科就诊的1例MPS患儿作为研究对象。收集患儿的临床资料，采集患儿及其父母的外周血样，对患儿进行全外显子组测序(WES)，用Sanger测序对候选变异进行家系验证，并进行生物信息学分析。结果:患儿为女性，11岁，因"发现脊柱侧弯8年，加重伴双肩不等高1年"就诊。WES检测结果提示其携带 CHRNG基因c.55+1G>C纯合剪接变异，Sanger测序证实其父母均携带 CHRNG基因c.55+1G>C杂合剪接变异。生物信息学分析： CHRNG基因c.55+1G>C变异在CNKI、万方数据知识服务平台及HGMG等数据库中均未见收录。经Multain在线软件分析，该位点所编码的氨基酸在不同物种中高度保守。经CRYP-SKIP在线软件预测，该变异导致第1外显子潜在剪接位点激活与跳跃的概率分别为0.30与0.70。确诊患儿罹患MPS。 结论:CHRNG基因c.55+1G>C变异可能是本研究MPS患儿的遗传学病因。

目的:对2例中国汉族成骨不全症（osteogenesis imperfecta，OI）患者进行突变检测，对其候选剪接变异进行致病性鉴定。方法:采用常规酚-氯仿法从2例中国汉族OI先证者的外周血中提取基因组DNA，通过全外显子组测序（WES）进行致病突变筛查；针对检出的可能引起RNA剪接异常的疑似致病变异，构建Minigene分析变异对于剪接的影响，进而确定其致病性。结果:在先证者1中发现可能影响剪接的杂合变异：COL1A1：c.858+1_858+5delGTAAG；先证者2同时存在COL1A2的两个变异，一个为可能引起异常剪接的杂合变异c.1405-7C>T，另一个为杂合错义变异c.2972G>T（p.G991V）。Minigene实验分析证实家系1的变异导致COL1A1基因第12外显子发生跳跃，家系2变异位点c.1405-7C>T对COL1A2的转录后剪接没有影响。先证者2的COL1A2基因的G991为一个高度保守的氨基酸，经生物信息学分析c.2972G>T（p.G991V）可能为真正的OI致病变异。结论:先证者1的COL1A1剪接位点变异c.858+1_858+5delGTAAG是导致OI的致病性变异；排除先证者2中COL1A2变异c.1405-7C>T的致病性，确定COL1A2基因变异c.2972G>T（p.G991V）为先证者2的致病原因。针对WES提示的剪接变异进行Minigene分析，不仅实现了突变致病性鉴定，丰富了OI的突变谱，而且为患者产前诊断和后续机制研究奠定了基础。

目的:探讨1例原发性肥大性骨关节(PHO)病患儿的遗传学病因。方法:选取2021年7月27日于武汉大学中南医院就诊的1例患儿为研究对象。采集患儿及其父母的外周血样，提取基因组DNA，进行全外显子组测序，对疑似的剪接变异进行Sanger测序家系验证，并通过minigene实验进行体外功能验证；采用长片段PCR对疑似的外显子缺失变异进行验证。本研究通过武汉大学中南医院医学伦理委员会的审查(伦理号：[2021]伦审字62号)。结果:WES结果显示患儿携带 HPGD基因复合杂合变异，包括父源性杂合缺失变异(Exon 3 del)和母源性杂合剪接变异(c.421＋1G>T)。长片段PCR验证了患儿及其父亲存在包含第3外显子在内的7 565 bp片段的杂合缺失(c.218-1304_324＋6156del)，minigene实验结果显示母源性的剪接变异导致了第4外显子的跳跃剪接。 结论:HPGD基因c.218-1304_324＋6156del杂合缺失变异和c.421＋1G>T杂合剪接变异可能是该患儿的致病原因，上述结果丰富了 HPGD基因的变异谱，为受累家庭的遗传咨询和产前诊断提供了依据。

目的:探讨1例Rotor综合征患儿的遗传学病因。方法:收集患儿的临床资料，应用高通量测序技术对患者行全外显子组测序并进行Sanger测序验证。用单管三引物PCR分析法检测 SLCO1B3基因第5内含子长散布元件-1(long-interspersed element-1，LINE-1)的插入情况。 结果:高通量全外显子组测序发现患儿携带 SLCO1B1基因c.1738C>T纯合无义变异。 SLCO1B3基因第5内含子中LINE-1的纯合插入，导致第5外显子或第5～7外显子跳跃，并在 SLCO1B3转录本中引入了终止密码子。 结论:SLCO1B1基因c.1738C>T纯合变异以及 SLCO1B3基因第5内含子LINE-1的纯合插入可能是该Rotor综合征患儿的致病原因。