神经轴突导向因子(Netrin)-1不仅在神经系统中发挥作用,而且在多种组织器官和不同类型疾病中异常表达并可能参与发病过程.大量研究表明它具有抑制细胞凋亡、促进血管再生、调控炎症反应等重要的生物学功能.因此,它已成为临床疾病研究的热点.现对其在临床疾病组织中的表达改变与相关生物学研究,以及它在患者外周血等体液中的水平变化进行综述,以探讨其作为临床疾病的机制性分子、治疗靶点、生物标志物方面的潜在研究价值,为临床疾病的诊断与治疗提供新的思路.

目的:探讨轴突导向因子3A（Sema3A）对脂多糖（LPS）诱导的CD4 +CD25 +调节性T细胞（Tregs）稳定性的作用及机制。 方法:采用体外免疫磁珠法分离和培养C57BL/6J小鼠脾脏CD4 +CD25 + Tregs，将分离的细胞按随机数字表法分为对照组（仅给予抗小鼠CD3e和CD28诱导细胞处于激活状态）、LPS组（在对照组的基础上给予LPS 100 μg/L）、LPS+核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L）、LPS+磷酸盐缓冲液（PBS）组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL）、LPS+PDTC+重组Sema3A（rSema3A）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L+rSema3A 300 μg/L）和LPS+PBS+rSema3A组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL+rSema3A 300 μg/L）。各组培养24 h后，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测CD4 +CD25 + Tregs特异性标志物叉头翼状转录因子-3（Foxp-3）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和膜相关转化型生长因子-β1（TGF-β1 m+）的基因及蛋白表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-10（IL-10）和分泌型转化生长因子-β1（sTGF-β1）的水平，采用免疫荧光法检测细胞凋亡，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测Foxp-3-Tregs特异性去甲基化区（Foxp-3-TSDR）的去甲基化程度，以反映CD4 +CD25 + Tregs的稳定性，采用电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB信号通路的DNA结合活性，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路活性。 结果:与对照组比较，LPS能够增加细胞稳定性，表现为Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达上调，IL-10和sTGF-β1分泌增加，细胞凋亡减少，Foxp-3-TSDR去甲基化程度增加；同时LPS可增加细胞内NF-κB信号通路的DNA结合活性，以及主要分子NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和p65的磷酸化水平，说明LPS增加细胞稳定性的机制与NF-κB信号通路有关。与LPS组比较，PBS并未对细胞稳定性和NF-κB信号通路产生影响；但添加rSema3A后能进一步增加细胞稳定性，并激活NF-κB信号通路。而PDTC能够抑制rSema3A增加细胞稳定性的功能，表现为：与LPS+PBS+rSema3A组比较，LPS+PDTC+rSema3A组Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达明显下调〔Foxp-3基因（2 -ΔΔCt）：8.092±1.117比18.509±1.068，Foxp-3蛋白（相对荧光强度）：1.224±0.033比1.826±0.181；CTLA-4基因（2 -ΔΔCt）：3.254±0.760比11.840±0.827，CTLA-4蛋白（相对荧光强度）：1.305±0.058比1.842±0.111；TGF-β1 m+基因（2 -ΔΔCt）：3.589±1.180比8.509±0.472，TGF-β1 m+蛋白（相对荧光强度）：1.319±0.033比1.822±0.063，均 P<0.01〕，IL-10和sTGF-β1分泌减少〔IL-10（ng/L）：445.33±54.08比992.67±83.10，sTGF-β1（ng/L）：1 116.67±65.25比1 494.67±94.45，均 P<0.01〕，细胞凋亡明显增加（荧光强度：0.398±0.031比0.268±0.046， P<0.01），Foxp-3-TSDR去甲基化程度明显降低（灰度值：0.467±0.048比1.780±0.119， P<0.01），NF-κB信号通路的DNA结合活性被明显抑制（灰度值：1.23±0.02比3.95±0.06， P<0.01），IKKβ和p65的磷酸化水平降低〔p-IKKβ表达（p-IKKβ/IKKβ）：0.97±0.07比1.97±0.04，p-p65（p-p65/p65）：0.95±0.08比1.93±0.06，均 P<0.01〕。 结论:LPS能通过NF-κB信号通路增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性；Sema3A能够进一步增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性，并且与NF-κB信号通路有关。

目的:探讨血浆蛋白质组学在高原红细胞增多症（HAPC）诊断和发病机制研究中的应用价值。方法:选取2020年1月至2021年1月青海省人民医院10例HAPC患者为试验组，其中男4例，女6例，年龄（46±4）岁。筛选同期同海拔健康对照者10名为对照组，其中男5名，女5名，年龄（44±4）岁。运用高效液相色谱-质谱联用方法进行差异蛋白鉴定和定量，针对筛选出的差异蛋白进行基因本体（GO）功能富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）功能富集分析和互作网络分析。结果:试验组和对照组共筛选出有定量值的差异蛋白共117个，只在试验组有定量值的显著上调蛋白数为45个，只在对照组有定量值的显著下调蛋白数为40个，试验组与对照组均有定量值的差异表达蛋白为32个。与对照组比较，试验组32个差异表达蛋白中，11个表达下调，21个表达上调。GO功能富集分析结果显示，差异蛋白参与的生物学过程主要包括免疫反应、补体激活、蛋白级联激活、凝血系统；KEGG功能富集分析结果显示，差异蛋白参与的主要生化代谢途径和信号转导途径为轴突导向、溶酶体、细胞黏附分子、脂质和动脉粥样硬化、造血细胞谱系、胆固醇代谢；显著富集的结构域主要在免疫球蛋白样结构域、类EGF域、纤维连接蛋白Ⅲ型超家族、丝氨酸蛋白酶、Sushi/SCR/CCP超家族；差异蛋白互作分析结果显示，互作评分>700分，节点数最多的前10个差异蛋白分别为MPO、RPS27A、ARG1、GM2A、TIMP1、CRP、FABP5、HBB、S100A7、RHOA。结论:血浆蛋白质组学分析技术有助于识别在HAPC发展中的相关蛋白标志物，为HAPC的诊断及发病机制研究提供参考。

目的:探讨轴突导向分子Netrin-1对周围神经损伤后有序轴突再生及神经功能恢复的影响。方法:通过划痕实验及Transwell小室迁移实验检测Netrin-1对雪旺细胞(Schwann cells，SCs)迁移能力的影响。取21只健康雄性SD大鼠，随机分为3组，每组7只，即假手术组、周围神经损伤(peripheral nerve injury，PNI)组及Netrin-1治疗组。假手术组坐骨神经游离后不进行处理；PNI组及Netrin-1治疗组坐骨神经挤压后分别行神经内注射PBS及Netrin-1。术后7、14及28 d进行步态分析和坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index，SFI)检测。术后28 d处死各组大鼠取右侧坐骨神经，采用HE及Masson染色评估坐骨神经组织病理学变化及轴突排列情况，通过免疫荧光染色分析SCs增殖及轴突再生情况。结果:Netrin-1治疗组SCs划痕愈合率及细胞迁移数均高于空白对照，差异有统计学意义( P<0.05)。术后28 d，Netrin-1治疗组轴突排列较PNI组紧密且有序，损伤所致轴突崩解和空泡化现象较少；Netrin-1治疗组NF200及S100β荧光强度高于PNI组，差异有统计学意义( P<0.05)；术后14及28 d，Netrin-1治疗组SFI高于PNI组，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:Netrin-1可通过定向SCs迁移介导有序轴突再生加速神经功能恢复。

目的:探究Piwi相互作用RNA（Piwi-interacting RNA，piRNA）与糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的相关性。方法:使用高通量测序技术检测DN患者肾组织（实验组）及肾肿瘤患者肿瘤旁肾组织（对照组）中piRNA的差异表达谱，通过基因本体（gene ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）富集分析对差异表达piRNA的生物学功能进行阐述。采用实时荧光定量PCR检测目标piRNA在DN患者血清中的表达水平。采用Spearman相关分析法分析血清目标piRNA与DN患者临床指标之间的相关性。结果:高通量测序结果显示，以|log 2差异倍数|≥2且 P<0.05为筛选条件，与对照组相比，DN组显著差异表达的piRNA共127个，其中99个表达上调，28个表达下调，上调前5位的piRNA分别是piRNA-hsa-161686、piRNA-hsa-349255、piRNA-hsa-355720、piRNA-hsa-151229及piRNA-hsa-154959，下调前5位的piRNA分别是piRNA-hsa-1929960、piRNA-hsa-174194、piRNA-hsa-148658、piRNA-hsa-172594及piRNA- hsa-172421。PCR验证 P值较小且表达量较高的3个上调和3个下调基因，结果显示，血清piRNA- hsa-77976的表达在DN患者中显著下调（ P=0.028），与测序结果一致，其余基因表达与测序结果不一致或差异无统计学意义。生物信息学分析预测显示显著差异表达的piRNA可能通过Rap1、Ras、PI3K-Akt及轴突导向通路参与DN的调控。相关性分析结果显示，piRNA-hsa-77976表达与血尿素氮（ r=-0.584， P=0.028）、血肌酐（ r=-0.637， P=0.014）、胱抑素C（ r=-0.738， P=0.003）及β2微球蛋白（ r=-0.822， P<0.001）均呈负相关，与估算肾小球滤过率（ r=0.661， P=0.010）呈正相关。 结论:piRNA差异表达与DN密切相关，或可作为DN诊断及预后评估的新型生物标志物。

目的:以磁共振扩散张量成像（DTI）为活体动态连续监测手段，分析轴突导向分子（RGMa）在缺血性脑梗死后大鼠脑组织核心梗死区及远隔脑区的表达变化与轴突再生、突触重塑及磁共振参数的关系，以及其在缺血性脑梗死的神经康复治疗及调控中的作用，并提供有效无创的影像学检查技术手段。方法:将SD大鼠72只随机分为对照组、大脑中动脉栓塞（MCAO）术后12 h、24 h、48 h、7 d、10 d组，每组大鼠12只。在相应时间点给予头部磁共振扫描后，测量各组大鼠梗死核心区、双侧小脑表观弥散系数（ADC）值和各向异性分数（FA）值。扫描后取各组大鼠相应部位脑组织分别行RT-PCR和免疫组化方法检测RGMa表达情况，采用免疫组化法检测各组大鼠轴突再生和突触重塑情况，并应用透射电镜观察各组大鼠细胞超微结构变化。采用Spearman相关分别分析大鼠脑梗死核心区和双侧小脑RGMa蛋白与神经微丝蛋白（NFP-200）、磁共振ADC值及FA值的相关性。结果:缺血性脑梗死后的各时间点大鼠梗死核心区和双侧小脑ADC值和FA值较对照组降低（均 P<0.05），12 h降至最低（均 P<0.05）。MCAO术后12 h起可见RGMa和突触素阳性表达并随时间延长持续增加，48 h表达达高峰，而MCAO术后各组轴突表达逐渐减少，24 h组破坏最为明显，以上各指标表达变化梗死对侧（右侧）小脑均较患侧（左侧）小脑明显（均 P<0.05）。RGMa蛋白表达与磁共振参数及轴突生长情况呈显著负相关（ r=-0.312， P=0.004）。 结论:RGMa蛋白可能参与缺血性脑梗死后轴突和突触的再生与重塑，磁共振检查可作为无创性监测脑梗死及神经功能的评估手段。

目的:探讨Slit引导配体2(Slit2)对糖尿病小鼠角膜上皮和神经损伤修复的促进作用及其可能的分子机制。方法:选取60只SPF级5~6周龄C57BL/6小鼠，采用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病模型组和Slit2注射组，每组20只。糖尿病模型组和Slit2注射组小鼠采用链脲霉素腹腔内注射法建立糖尿病模型。构建小鼠角膜上皮损伤修复模型，Slit2注射组于造模后即刻结膜下注射Slit2重组蛋白，糖尿病模型组小鼠结膜下注射等容量PBS，正常对照组不做处理。采用角膜荧光素染色法观察小鼠角膜上皮缺损后24、48和72 h愈合情况；采用实时荧光定量PCR法检测正常对照组和糖尿病模型组小鼠角膜上皮中Slit2及其相关受体mRNA的表达；采用角膜铺片β-tubulin Ⅲ荧光染色法观察小鼠角膜神经形态变化；采用免疫荧光法检测正常对照组和糖尿病模型组小鼠角膜上皮中Slit2的表达分布及修复的角膜上皮中Slit2、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、苏氨酸蛋白激酶(AKT)、β-连环蛋白(β-catenin)和Ki67的表达。将小鼠角膜上皮干/祖细胞系(TKE2)分为正常对照组、高糖组和Slit2干预组。采用Western blot法检测各组细胞中p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT、p-ERK/ERK和β-catenin的表达；取高糖培养的TKE2，采用Western blot法检测0.01、0.1和0.5 μg/ml Slit2处理10 min及0.5 μg/ml的Slit2处理前和处理后10、20、30、60、120 min时p-EGFR/EGFR和p-AKT/AKT的表达。原代培养各组小鼠三叉神经节(TGs)细胞，采用β-tubulin Ⅲ免疫荧光染色法观察Slit2对于TGs细胞轴突再生的影响。结果:角膜上皮刮除后48 h和72 h，与正常对照组和Slit2注射组比较，糖尿病模型组小鼠角膜上皮修复速度明显减慢。糖尿病模型组小鼠正常角膜上皮中Slit2及其Robo1、Robo2、Robo4受体mRNA相对表达量明显高于正常对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。糖尿病模型组损伤修复的角膜上皮中Slit2免疫荧光强度明显弱于正常对照组。角膜铺片神经荧光染色显示，与糖尿病模型组比较，角膜上皮损伤后7 d Slit2注射组角膜神经丛致密，神经纤维数量增多且分布均匀，神经末梢可见较多分支。正常对照组和Slit2注射组修复的角膜上皮中p-EGFR、p-ERK、β-catenin和Ki67荧光明显强于糖尿病模型组。高糖组TKE2细胞内p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT和β-catenin相对表达量均明显低于正常对照组和Slit2干预组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Slit2处理高糖培养TKE2细胞后10 min，p-EGFR/EGFR和p-AKT/AKT的相对表达量较处理前均明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，随着Slit2质量浓度的增加，TKE2细胞中p-EGFR/EGFR和p-AKT/AKT相对表达量逐渐升高，Slit2质量浓度为0.5 μg/ml时对EGFR和AKT信号通路的活化作用最明显。高糖组体外培养的TGs突触长度为(40.52±5.44)μm，明显短于正常对照组的(72.14±9.48)μm和Slit2注射组的(73.04±4.66)μm，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Slit2通过激活EGFR信号通路对糖尿病模型小鼠角膜上皮发挥保护作用，并通过增加角膜上皮下神经丛密度和促进TGs细胞轴突生长，发挥神经保护能力。

在骨骼系统中，血管生成与骨形成之间的耦联作用可促进骨骼生长及维持骨量平衡。H型血管（CD31 hiEmcn hi）是一类骨特异性毛细血管亚型，实质为血管内皮细胞，主要分布于骨干骺端，周围密布骨祖细胞，介导成血管-成骨耦联机制，其中涉及多种细胞因子及信号通路，包括血小板源性生长因子BB、轴突导向分子3、低氧诱导因子-1α、Notch信号通路、血管内皮生长因子等。H型血管通过多种细胞因子传递信号，增强血管生成和骨形成间的联系，从而调控骨生长和骨稳态；靶向增加H型血管数量可用于治疗骨丢失，为临床骨损伤修复和抗骨质疏松治疗提供参考。

骨血管在骨生长、重塑和损伤修复中发挥重要作用,H型血管是一类同时高表达CD31与Emcn的骨血管亚型,具有显著的解剖特征与年龄依赖性减少特点,深度参与血管生成与骨形成之间的偶联.一些细胞因子如缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子A、血小板衍生生长因子BB、神经轴突导向因子3等可参与调控H型血管的生成,同时药物治疗、物理治疗和转移性肿瘤也能对H型血管产生影响.本文通过回顾近年文献,总结H型血管生成的分子机制与影响因素,以期为骨折不愈合、骨代谢异常等骨病的治疗提供新思考.

接触蛋白-1(CNTN1)属于神经细胞黏附分子之一,是免疫球蛋白超家族的一个亚组,其通过糖基磷脂酰肌醇锚定的神经元膜蛋白锚定在细胞表面,参与轴突导向、突触形成以及多种神经系统生长、发育和疾病的发生过程.此外,CNTN1可通过多种机制促进炎症反应以及小胶质细胞和星形胶质细胞之间的信号交流,从而参与多种神经、精神疾病的病理过程.本文就CNTN1在抑郁症和认知功能障碍中的作用进行阐述.