目的 验证运用有机溶剂/去污剂(S/D)处理法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中辛德毕斯病毒(Sindbis virus)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活/去除效果.方法 采用S/D处理法灭活人凝血因子Ⅸ中添加的Sindbis virus,噬斑滴定法检测灭活前后的病毒滴度;膜过滤法去除添加的PPV,细胞病变法检测去除前后的病毒滴度.结果 经S/D处理法灭活后,3 批人凝血因子Ⅸ中Sindbis virus降低量分别为>4.62 lgPFU/mL、>4.64 lgPFU/mL、>4.50 lgPFU/mL.经Planova 15N膜过滤后,3 批人凝血因子Ⅸ中PPV降低量分别为≥4.50 lgTCID50/0.1 mL、≥4.56 lgTCID50/0.1 mL、≥4.38 lgTCID50/0.1 mL.结论 通过对指示病毒的验证效果评估,证明运用S/D法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中的Sindbis virus和PPV均有较好的灭活/去除效果.

目的 研制检测基孔肯雅热免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)抗体的酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快检试剂盒,为流行病学调查及实验室诊断提供新的工具.方法 以基孔肯雅病毒特异性原核表达抗原pMal-chik23为诊断抗原,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记抗IgG二抗为显色抗体,正交实验对诊断抗原、待检血清、二抗工作浓度进行优化,并对包被、封闭、孵育及显色等反应条件进行系统优化,在临床大样品评估的基础上,确定ELISA检测的临界值.在此基础上,对ELISA反应的特异性、灵敏性及稳定性进行评估,研制组装检测基孔肯雅热IgG抗体的ELISA快检试剂盒.结果 经系统优化,研制、组装了检测基孔肯雅热IgG抗体的间接ELISA快检试剂盒,其最佳反应条件为:1.0 μg/mL包被抗原经碳酸盐缓冲液4 ℃包被24h,HBV封闭液37℃封闭4 h,待检样品1:101稀释后,100μL/孔,37℃反应40 min,磷酸盐吐温缓冲液(phosphate buffered saline with tween 20,PBST)洗涤4次,HRP标记兔抗人IgG 1∶20 000、HRP标记羊抗鼠IgG 1∶10 000稀释后,100 μL/孔,37℃反应30 min,PBST洗涤5次,TMB显色液 100 μL,37 ℃显色 10 min,50 μL 20％H2SO4终止反应,双波长450/630 nm测定 A450 nm值.试剂盒性能评估结果表明,所研制试剂盒与所试阳性样品检测A450 nm值＞0.43,阴性样品检测A450nm值＜0.04,S/N比值＞10,与辛德毕斯、盖塔、罗斯河、登革等9种其他相近虫媒病毒均无交叉反应,并具较高稳定性,板内变异系数为0.76％～2.12％,板间变异系数为0.64％～1.85％,批间变异系数为0.83％～2.31％,均小于3％,4℃保存1年性能无明显下降.结论 研制了检测基孔肯雅热IgG抗体的间接ELISA快检试剂盒,具备良好的灵敏性、特异性与稳定性.

目的 了解浙江省台州市2017-2022年实施新版病媒生物监测方案以来蚊虫种类、密度、季节消长及病毒携带状况,为媒介蚊虫防制及蚊媒传染病的预测预警提供科学依据.方法 在台州市9个县(市、区)设置监测点,每年4-11月分别采用诱蚊灯法和布雷图指数(BI)法开展成蚊和幼蚊生态学监测,2022年6-8月在路桥区采集成蚊并应用荧光定量PCR法检测登革病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、基孔肯亚病毒、黄热病毒和辛德毕斯病毒6种病毒.数据采用SPSS 20.0软件进行统计分析.结果 2017-2022年,台州市共布放诱蚊灯4800台夜,捕获雌蚊109 160只,平均蚊密度为22.74只/(灯·夜),其中三带喙库蚊76 799只,占70.35％,其次为淡色/致倦库蚊20 724只(18.98％).6-9月为成蚊活动高峰期.不同生境平均蚊密度以牲畜棚(养殖场)最高,为92.91只/(灯·夜).牲畜棚(养殖场)以三带喙库蚊为优势种,占83.08％,居民区等其他生境均以淡色/致倦库蚊为优势种(构成比均＞60％),不同生境蚊种构成比差异有统计学意义(x2=60 286.496,P＜0.001).幼蚊监测共调查居民户94 523户,平均BI值为16.94,4-11月平均BI值均＞5.阳性积水以闲置容器(碗、瓶、缸、罐)为主,占54.88％,轮胎/废旧轮胎伊蚊孳生率最高为37.37％.共检测淡色/致倦库蚊雌蚊1 050只,白纹伊蚊雌蚊1 140只,病毒检测结果均为阴性.结论 台州市居民区优势蚊种为淡色/致倦库蚊,牲畜棚(养殖场)蚊密度较高、优势蚊种为三带喙库蚊,4-11月均有登革热传播风险,需加强环境治理为主的综合性蚊虫防制措施,防止输入性或本地蚊媒传染病传播流行.

目的 对静注人免疫球蛋白(intravenous human immunoglobulin,IVIG)新生产工艺的病毒灭活/去除效果进行验证及评估.方法 选择4种脂包膜病毒[人免疫缺陷综合征病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SV)和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)]及非脂包膜病毒[猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)]作为验证病毒,在缩小的生产规模条件下考察辛酸钠沉淀/深层过滤、低pH孵放和纳米膜过滤步骤对一种或几种指示病毒的灭活/去除能力.结果 辛酸钠沉淀/深层过滤步骤可灭活/去除PPV 1.88 Log;低pH孵放对HIV、PRV、SV和VSV的灭活效果最低分别为≥5.22、≥4.26、≥6.56和≥5.69 Log;Bio EX纳米膜可去除PPV达4 Log以上.结论 IVIG新生产工艺的病毒灭活/去除效果合格,可有效灭活/去除未知的、新出现的病原体.

基于二代测序的宏基因组测序方法(m-NGS)在理论上可以无偏性地检测样品中的所有生物,在感染性疾病的分子诊断领域彰显了突出的作用.但其实验流程复杂,需要操作者具备足够的知识和经验才能获得准确而丰富的诊断信息.因此,需要建立更简单,更快速而且更低成本的宏基因组测序方法,以满足公共卫生实验室的需求.本研究基于MinION建立了宏基因组纳米孔测序(m-NanoS)方法,并成功用于基孔肯雅病毒(CHIKV)和辛德毕斯病毒(SINV)模拟临床样本的检测.将CHIKV和SINV培养物与发热病人咽拭子混合,灭活后提取核酸用于构建m-NanoS文库.MinION共产生了25 147条reads,平均质量得分为10.20,平均读长为1334 bp.来自CHIKV和SINV的reads分别有47条和1 371条,占总数据量的0.19％和5.45％.CHIKV和SINV的基因组覆盖度分别为99.45％和99.34％,经过拼接获得一致性序列,与参考序列比对的一致性分别为95％和90％.在公共卫生领域,快速地对样本中潜在的全部病原体进行准确鉴定是一个重要又困难的工作,而m-NanoS方法的成功建立无疑为该工作提供了一个有力的诊断工具.

黄病毒基因组为单链，正股RNA，全长约11Kb。在其NS1基因序列设计了一对通用引物，DJS（+）和DJA（-）均为17个硷基，扩增序列长度为413bP。应用逆转录——多聚酶链反应（RT—PCR）成功地扩增了登革病毒（DEN）1，2，3，4型和乙型脑炎病毒（JEV）基因部分片段，其扩增片段的大小与设计相符。采用该引物检测国内分离株DENV（GZ）、DEN2（HN91）和JEV（A 2）株同样出现一条明显的扩增带（约413bP），说明该引物也适合于我国分离株。应用通用引物扩增黄病毒中的POW和LGT均出现一条特异带。甲病毒属的辛德毕斯和基孔肯稚病毒应用该引物扩增后无特异性条带；扩增C 6/36细胞也无特异带。表明该通用引物特异性良好，对于今后黄病毒感染的临床快速诊断和进一步的分子病毒学研究均有重要意义。

含缬酪肽蛋白(VCP)作为一种具有广泛功能的ATPase,在哺乳动物细胞内质网相关降解和泛素蛋白酶体途径中发挥重要功能.VCP不仅参与真核细胞核酸的重建、膜损伤和细胞周期调控等生命活动,还在病毒对宿主细胞的感染、复制和释放过程中发挥调控作用.VCP能够促进西尼罗河病毒(WNV)、丙型肝炎病毒(HCV)、脊髓灰质炎病毒(PV)、肠道病毒71型(EV71)、冠状病毒(CoV)、基孔肯雅病毒(CHIKV)、辛德毕斯病毒(SINV)和裂谷热病毒等单链RNA病毒的复制或释放,还能促进加州苜蓿多核核型多角体病毒(AcMNPV)和人类巨细胞病毒(HCMV)等双链DNA病毒的复制.VCP通过其ATPase酶活性及参与的内质网相关降解(ERAD)和泛素蛋白酶体等途径促进单链RNA和双链DNA病毒的复制或释放.现从VCP促进多种单股正链RNA、双链DNA病毒的复制和病毒粒子释放等3个方面综述近年来VCP同病毒感染相关的研究进展,为抗病毒治疗提供新的思路.

目的 对狂犬病人免疫球蛋白(human rabies immunoglobulin)低pH孵放生产工艺[pH 3.8～4.4,(24±1)℃,21 d]进行脂包膜病毒灭活验证.方法 以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、辛德毕斯病毒(sindbis virus,SV)和人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)作为研究病毒,考察低pH孵放对这些脂包膜病毒的灭活能力.同时考察低pH孵放步骤对制品质量的影响.结果 在工艺设定的参数范围内,低pH孵放后4种脂包膜病毒的滴度降低均在4.00 Log以上,且3批狂犬病人免疫球蛋白的纯度和分子大小分布保持稳定,抗体效价与灭活前差异均在方法允许的波动范围内.结论 低pH孵放工艺能有效地灭活脂包膜病毒,保证了狂犬病人免疫球蛋白制品的质量及安全性.