目的:建立并评估同步分离卵巢内不同发育阶段卵泡的方法——酶消化后滤网过滤法。方法:运用混合有胶原酶Ⅰ和脱氧核糖核酸酶Ⅰ的消化酶来消化小鼠卵巢预切组织，然后依次通过不同孔径（100 μm、40 μm、20 μm）的滤网以实现不同发育阶段卵泡同步分离的目的，将翻转冲洗100 μm滤网得到的卵泡记为A组（>100 μm），翻转冲洗40 μm滤网得到的卵泡记为B组（40~100 μm），翻转冲洗20 μm滤网得到的卵泡记为C组（20~40 μm）。评估并比较经不同孔径滤网筛选获得的卵泡群的数量、大小、形态、活力和发育潜能。结果:数量上，C组获得的卵泡数目最多，A组次之，B组最少；形态上，C组卵泡基底膜完整率高于A组和B组（ P<0.001， P<0.001）。活力上，A组卵泡的存活率70.59%（120/170）高于B组51.79%（58/112）和C组35.90%（28/78）（ P=0.001 6， P<0.001）。发育潜能上，经过96 h体外培养，A组卵泡直径由（113.64±9.57） μm增长至（150.95±45.90） μm（ P=0.002 4），B组卵泡直径由（88.12±9.12） μm增长至（120.61±18.00） μm （ P<0.001），C 组卵泡在培养第24 h内出现单层颗粒细胞贴壁，卵母细胞与颗粒细胞之间失去连接结构，卵母细胞完全裸露，未能培养成功。 结论:酶消化后多重滤网过滤法能快速有效获得大量形态完整、有活力和发育潜能良好的卵泡，且能达到不同发育阶段卵泡同步分离的目的。

目的:探讨假体隆鼻术后发生慢性感染,假体取出后即刻利用自体颗粒脂肪移植填充维持鼻部外观的临床效果.方法:2019年6月-2023年6月笔者医院处理的假体隆鼻术后慢性感染的22例患者为研究对象.将假体完整取出后,假体腔隙进行反复冲洗,创腔内搔刮处理,然后将过滤后的自体颗粒脂肪填充于假体腔隙.观察手术一期愈合率、患者满意度及术后并发症情况.结果:术后随访3～12个月,所有患者均一期愈合,患者术后鼻外观形态满意度100%,无严重并发症发生.结论:脂肪移植治疗隆鼻术后慢性感染是一种可行的治疗方法,可以改善鼻部形态,减轻术后远期增生出现的挛缩等并发症,增加鼻部的美观度,可作为隆鼻术后感染治疗的较好辅助手段.

无菌检查法是无菌药品检查的法定检验方法,其中薄膜过滤法因易操作、风险低和准确度高等优点比直接接种法应用更广泛.无菌药品剂型种类繁多,其中抗生素类药品因品种结构多变、抑菌性强和抗菌谱广等因素,一直以来是建立无菌检查方法的难点.本文就薄膜过滤法中的溶解、过滤、冲洗和培养等4个关键步骤展开讨论,通过对已建立的13类47个品种共61个抗生素药品无菌检查方法的综述,探讨建立无菌检查方法的基本策略,并对无菌检查方法和结果的局限性进行讨论,以期为建立抗生素类无菌药品无菌检查方法及正确认识无菌检查结果提供思路和参考.

目的 建立针对2种注射用多西他赛胶束的无菌检查方法.方法 参照2015年版《中国药典》(四部)通则1105无菌检查法,取注射用多西他赛胶束15瓶,用500 mL 0.9%氯化钠溶液溶解,作为供试液,平均分配至3个滤筒过滤.同法制备6个滤筒.每个滤筒用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗3次,每次100 mL,然后加入相应培养基,并分别接种<100 CFU/mL的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌和黑曲霉,于适宜温度下观察培养.以等量无菌氯化钠溶液替代注射用多西他赛胶束供试液后采用相同的后续操作,作为对照组.采用薄膜过滤法,用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每个滤筒冲洗3次,每次100 mL,检测各菌株生长情况.结果 6种验证菌株均在48 h内生长良好,样品的抑菌活性被完全消除.结论 注射用多西他赛胶束可用上述方法进行无菌检查.

目的 用克拉霉素酶解试验指导建立克拉霉素制品的微生物限度检查方法.方法 采用不同剂量单位的大环内酯酶酶解克拉霉素,高效液相色谱法(HPLC)测定克拉霉素含量以确定酶解时间与克拉霉素降解速度之间的关系,选择最小剂量单位和最佳酶解时间,用于克拉霉素片和克拉霉素颗粒的微生物限度检查.结果 大环内酯酶作用20 min后接近最大酶解效果,30 min后达到酶解平衡,克拉霉素含量不再显著变化.20 U和10U的大环内酯酶对0.02 mg·mL-1克拉霉素的酶解作用没有显著差异.需氧菌总数选择1∶100 供试液,采用薄膜过滤法,冲洗量 300 mL,并在最后一次冲洗液中加入约 10U的大环内酯酶作用 20 min,霉菌和酵母菌总数选择 1∶10 的供试液采用平皿法(倾注法).大肠埃希菌检查采用直接接种法,2 000 mL胰酪大豆胨液体培养基联合 20U大环内酯酶,可检出所加试验菌.结论 大环内酯酶酶解试验指导建立了克拉霉素制剂的微生物限度检查方法,提高了检验效率,开拓了大环内酯类抗生素微生物限度检查的新思路.

目的:考察中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)临床常用104种单一药物、17种2个药物和2种3个药物调配的成品输液物理性质.方法:根据临床用药医嘱,按无菌操作技术调配成品输液;室温下于0,1,2,4 h考察上述成品输液的外观性状、pH值、浊度、不溶性微粒和紫外-可见吸光度.结果:用5％葡萄糖注射液(5％GS)调配的1.36mg·mL-1阿昔洛韦溶液和0.75 mg·mL-1更昔洛韦溶液颜色立即变黄;用5％GS调配的6 mg·mL-1吗替麦考酚酯溶液立即产生丁达尔效应,不溶性微粒超过《中国药典》(2020版)规定,且1 h浊度变化＞0.5 NTU;用5％GS调配的0.35 mg·mL-1银杏叶提取物溶液不溶性微粒立即超过《中国药典》(2020版)规定,1 h产生丁达尔效应,2 h浊度变化＞0.5 NTU;用0.9％氯化钠注射液(NS)调配的0.12mg·mL-1维生素K1溶液、0.5 mL·mL-1血必净溶液、0.1μg·mL-1前列地尔溶液、4 mg·mL-1替考拉宁溶液、240万U·mL-1青霉素钠溶液立即产生丁达尔效应,不溶性微粒超过《中国药典》(2020版)规定;用NS调配的0.04 mg· mL-1七叶皂苷钠溶液,1 mg·mL-1酚磺乙胺、0.4mg·mL-1氨甲苯酸与0.04 mg·mL-1维生素K1混合溶液不溶性微粒立即超过《中国药典》(2020版)规定;用NS调配的6 mg·mL-1维生素C与1 mg·mL-1异甘草酸镁混合溶液4 h不溶性微粒超过《中国药典》(2020版)规定.结论:123种静脉药物中109种成品输液4 h内物理性质符合规定;14种成品输液物理性质不符合规定,临床上须采用5 μm的一次性使用精密过滤输液器,并尽快完成输注;维生素C与异甘草酸镁或酚磺乙胺、氨甲苯酸与维生素K1联合使用时,建议每种药物单独调配,序贯输注,输注前后用适量NS或5％GS冲洗输液管.

目的 建立管路类医疗器械无菌检测新方法,并筛选出更适用于输液器无菌检测的方法.方法 采用培养基冲洗法和培养基灌装法2种无菌检测新技术,与传统的薄膜过滤法比较,评价管路类医疗器械无菌检测新方法的适用性.结果 本研究采用的3种无菌检测技术中培养基灌装法检出率最高,可达100%,其次为培养基冲洗法.两种无菌检测新技术均优于传统的薄膜过滤法.结论 3种方法均适用于输液器产品的无菌检测,其中以培养基灌装法检出率最高,以培养基冲洗法作为输液器产品无菌检测的首选方法.

目的 分析软式消化内镜清洗消毒工作现状及效果,为促进内镜管理工作质量不断提升提供参考依据.方法 调查2019-2021年绍兴市柯桥区中医医院软式消化内镜清洗消毒工作现状,随机对完成清洗和消毒的待用内镜进行有机物和病原菌残留情况检查,分析内镜清洗和消毒工作质量.结果 2019-2021年软式消化内镜清洗消毒人员中护士、清洗时间＞60 s、清洗用水使用过滤水和纯化水、消毒时间＞5 min、终末漂洗方法中手动喷淋、干燥方法使用75％乙醇冲洗后吹干、存储方式为无菌巾包裹后平置以及可追溯记录的占比均升高(P＜0.05);2019-2021年软式消化内镜内腔面、外腔面和活检孔端口有机物检测合格率各年度比较差异无统计学意义;2019-2021年胃镜和肠镜检出菌落数逐渐减少(P＜0.05);2021年胃镜微生物学抽检合格率均高于2019年(P＜0.05),2020年和2021年肠镜微生物学抽检合格率高于2019年(P＜0.05);2019-2021年软式消化内镜抽检病原菌分布情况未见明显变化.结论 2019-2021年医院软式消化内镜清洗和消毒工作清洗人员、清洗方式、清洗时间、储存方式和消毒记录等逐渐趋于规范化,且有机物和病原菌残留抽检合格率均不断升高.

目的 建立注射用单磷酸阿糖腺苷无菌检查方法标准.方法 按照2015年版《中国药典》规定,采用薄膜过滤法,对14家企业生产的注射用单磷酸阿糖腺苷进行无菌方法适用性研究.结果 确定了规格为0.1g注射用单磷酸阿糖腺苷的无菌检查方法.14家企业(共111批次)无菌检验方法均为:取样品60支,采用薄膜过滤法,用pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每次100 mL,共冲洗2次.结论 通过对14家企业生产的注射用单磷酸阿糖腺苷的方法验证资料进行整理、归纳、分析、试验,最终确定严谨统一的无菌检查方法.

目的 研究不同用量卵磷脂中和剂和PB缓冲液,在双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)无菌检查中的应用.方法 取双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)转移至卵磷脂中和剂中(摇匀后放置5 min),按薄膜过滤法过滤后,用0.15 mol/LPB缓冲液(30 ～ 35 ℃保温)冲洗滤膜,加入液体培养基培养,进行不同用量卵磷脂中和剂和PB缓冲液适用性试验.用选定的试验条件进行无菌检查方法的适用性试验(薄膜过滤法)及阳性对照验证试验.结果 采用10 ml卵磷脂中和剂中和10瓶供试品(摇匀后放置5 min),用0.15mol/L PB缓冲液(30 ～ 35℃保温)冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100 ml,共冲洗2次(末次冲洗液中含小于100cfu的菌液),该方法过滤速度快,卵磷脂冲洗完全,无残留、不影响结果判定,确定适用.无菌检查方法的适用性试验中,供试品各滤筒中的试验菌与阳性对照比较均生长良好,达到《中国药典》三部(2015版)要求,应用于双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)的无菌检查中无抑菌作用或其抑菌作用可忽略不计.以金黄葡萄球菌和黑曲霉作为阳性对照菌,0和17d培养到期后加入阳性菌,对比试验显示试验菌均生长良好.结论 该方法适用于双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)无菌检查.