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还原叶酸载体(RFC1)在结直肠中的表达、相关信号通路及其与患者预后关系的生物信息学分析
编辑人员丨5天前
目的:探讨还原叶酸载体(RFC1)在结直肠癌(CRC)中的表达、相关信号通路及其与患者预后关系。方法:在癌症基因组图集(TCGA)数据库中分析RFC1基因在多种实体肿瘤及CRC中的表达情况。采用检索相互作用基因的搜索工具(STRING)建立RFC1蛋白相互作用网络。通过使用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库比较RFC1高、低表达组患者的生存期差异。使用注释、可视化和集成发现(DAVID)数据库对差异表达基因进行基因肿瘤学(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析。分析CRC组织和癌旁正常组织中RFC1的免疫组化表达水平及其表达部位。结果:RFC1 mRNA在各种人类实体肿瘤中的表达差异并不明显。在CRC组织中,RFC1表达水平高于癌旁正常组织,但RFC1表达水平与患者的肿瘤分期无关。RFC1蛋白间的相互联系指数为119,平均蛋白间区域聚类系数为0.836,RFC1及其相互作用基因间存在明显的蛋白网络富集( P<0.05)。RFC1生物学过程主要富集于DNA复制、半保守复制维持端粒活性、DNA代谢过程、无差错翻译合成、参与DNA修复的DNA合成等;细胞成分主要富集于复制叉、染色体、核质、DNA复制因子C复合物、Ctf18类RFC复合物等;分子功能主要富集于DNA结合核酸结合、DNA结合受损、DNA活性、催化活性等。对于KEGG信号通路,RFC1主要富集于DNA复制、核苷酸切除修复、错配修复和恶性肿瘤发生等。RFC1高表达者的无病生存率和总生存率低于低表达组,其中两者在总生存率上的差异有统计学意义( P<0.05)。RFC1蛋白主要表达于细胞质,阳性表达呈现黄褐色颗粒状,均匀分布于细胞内,且在结直肠癌组织中RFC1大多为高或中表达,而在正常肠上皮中低表达。 结论:RFC1在CRC组织中表达升高,其高表达与CRC患者的总生存率降低有关。RFC1可作为CRC预后不良的分子标志物,并可能成为CRC治疗的潜在靶点。
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编辑人员丨5天前
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类风湿关节炎患者还原型叶酸载体1基因多态性与甲氨蝶呤疗效、血药浓度及不良反应的相关性
编辑人员丨5天前
目的:探究类风湿关节炎(RA)患者还原型叶酸载体1(RFC1)基因多态性与甲氨蝶呤(MTX)疗效、血药浓度及不良反应的关系。方法:采用病例对照研究方法,收集2018年1月20日至2021年1月20日在商丘市第一人民医院行MTX治疗的268例RA患者,男性82例,女性186例,年龄(52.47±10.29)岁。检测其RFC1 G80A位点的基因型,检测初次服用MTX 48 h后的血药浓度,观察并统计治疗6个月后的疗效及不良反应。比较不同组别间RFC1 G80A位点基因型的差异,采用共线性诊断和logistic回归分析MTX疗效和血药浓度的影响因素。采用卡方检验比较不同基因型患者间不良反应的发生率。结果:RFC1 G80A位点基因型(GG/GA/AA)及基因频率(G/A)分布在有效组和无效组中的差异有统计学意义( χ 2=6.583, P=0.037; χ 2=6.249, P=0.012),AA型治疗有效率59.26%(32/54)高于GG型36.49%(27/74)( χ 2=6.516, P=0.011);Logistic回归分析显示AA基因型患者相对于GG型的MTX治疗有效率的 OR(95% CI)值为2.491(1.206~5.144)。AA型患者的48 h血药浓度为1.15(0.75,1.35)μmol/L,与GG型[0.74(0.61,1.18)μmol/L]和GA型[0.84(0.69,0.99)μmol/L]相比,差异有统计学意义( χ 2=7.152, P=0.028)。Logistic回归分析显示AA型患者48 h血药浓度较高的概率约为GG型的2.583(1.238~5.390)倍。肝功能损伤在3种不同基因型(GG/GA/AA)间的发生率差异有统计学意义( χ 2=12.606, P=0.002)。 结论:RFC1 G80A位点多态性能够影响RA患者的MTX疗效、血药浓度及肝功能损伤,AA型患者相对GG型疗效更好、血药浓度较高,但肝功损伤率也更高。
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编辑人员丨5天前
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西达本胺靶向P21调控DHFR表达逆转T淋巴细胞白血病甲氨蝶呤耐药的初步探究
编辑人员丨2周前
目的 探究西达本胺(CDM)靶向P21调控二氢叶酸还原酶(DHFR)表达逆转T淋巴细胞白血病(T-ALL)甲氨蝶呤(MTX)的耐药机制,为T-ALL靶向治疗提供参考依据.方法 将过表达载体(ov-DHFR)转染T-ALL细胞系Jurkat细胞,Western blot检测细胞中DHFR蛋白表达水平.将转染ov-DHFR载体的Jurkat细胞采用不同浓度(5、25和 40 μmol/L)的 MTX 处理、0.5 μ mol/L CDM 处理以及不同浓度(5、25 和 40 μmol/L)的 MTX 联合 0.5 μmol/L CDM 进行处理.采用25 μmol/L MTX、0.5 μmol/L CDM和25 μmol/L MTX+0.5 μmol/L CDM联合处理进行增殖、周期和蛋白检测.MTS实验检测转染ov-DHFR载体的Jurkat细胞对MTX耐药增殖,并计算相应的半抑制浓度(IC50)值.MTS、流式细胞和Western blot实验分别检测CDM+MTX处理对过表达DHFR的Jurkat细胞的增殖、周期及细胞中耐药蛋白和周期蛋白表达的影响.在MTX+CDM处理的过表达DHFR的Jurkat细胞增加P21抑制剂处理,MTS、流式细胞和Western blot实验分别检测CDM+MTX+P21抑制剂处理对过表达DHFR的Jurkat细胞的增殖、周期及细胞中耐药蛋白和周期蛋白表达的影响.结果 与转染阴性对照载体(ov-NC)组细胞MTX IC50值相比,转染ov-DHFR组Jurkat细胞的MTX IC50值变大.不同浓度的MTX和CDM处理发现25和40 μmol/L MTX+CDM组的治疗能够最显著地抑制过表达DHFR的Jurkat细胞的增殖,而且这两组治疗效果相似,因此后续采用25 μmol/L MTX+CDM组进行分析.与cell组相比,MTX组、CDM组和MTX+CDM组的过表达DHFR的Jurkat细胞在24、48、72 h这3个时间点,细胞的吸光度值均显著下降,差异均有统计学意义(F=40.180、378.900、510.700,P均<0.001).G1期的细胞比例均显著上升,而MTX+CDM组中表现最显著(F=7.419,P<0.001).Cyclin D、p-GP、BCRP蛋白表达水平均显著下调,且在MTX+CDM组细胞中表现最显著;此外,P21蛋白表达水平均显著增加,且在MTX+CDM组细胞中表现最显著.与MTX+CDM+PBS组相比,MTX+CDM+P21抑制剂组ov-DHFR-Jurkat细胞在48、72 h这2个时间点,细胞的吸光度值均显著上升,差异均有统计学意义(F=66.690、68.400,P均<0.001).与MTX+CDM+PBS组相比,MTX+CDM+P21抑制剂组ov-DHFR-Jurkat细胞中Gl期的细胞比例显著降低,差异有统计学意义(P<0.019);细胞中cyclin D、p-GP、BCRP蛋白表达水平均显著上调.结论 CDM靶向P21调控DHFR表达逆转T-ALL的MTX耐药.
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编辑人员丨2周前
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新生儿出生缺陷与叶酸代谢产物及关键酶基因多态性的关系
编辑人员丨2024/2/3
目的 探究新生儿出生缺陷与叶酸代谢产物及关键酶基因多态性的关系.方法 选择2018 年3 月—2022 年9 月产下出生缺陷新生儿的产妇174 例及产下健康新生儿产妇 150 例,分别作为研究组及对照组.收集 2 组产妇一般资料,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性检测亚甲基四氢叶酸脱氢酶1 基因G1958A位点、5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因 C677T 及 A1298C 位点、甲硫氨酸合成酶基因 A2756G 位点、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因A66G位点、细胞膜还原叶酸转运载体(RFC)基因A80G位点基因多态性,分析产妇各基因多态性与新生儿出生缺陷的关系.结果 研究组MTRR基因A66G位点G等位基因、RFC基因A80G位点G等位基因比例高于对照组(P<0.05,P<0.01).MTRR基因A66G位点基因型在显性、共显性模型下差异有统计学意义(P<0.01);RFC基因A80G位点在隐性、共显性模型下差异有统计学意义(P<0.05).MTRR基因A66G位点、RFC基因A80G位点联合分析显示,AA/GG型、AG/AG型与纯合子AA/AA型比较差异有统计学意义(P<0.01).多因素Logistic回归分析显示,孕期叶酸服用史、MTRR基因A66G位点多态性、RFC基因A80G位点多态性是出生缺陷的独立危险因素(P<0.05,P<0.01).结论 叶酸代谢相关基因MTRR、RFC与新生儿出生缺陷相关,临床可通过检测母体相关基因多态性,评估叶酸利用能力,进而评估新生儿出生缺陷的发生风险.
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编辑人员丨2024/2/3
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MTHFR,TCN2,RFC基因的遗传变异与室间隔缺损性先天性心脏病发生风险相关性分析
编辑人员丨2024/1/13
目的 探索甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、转钴胺素蛋白Ⅱ(TCN2)、叶酸还原载体(RFC)基因的遗传变异与儿童室间隔缺损性先天性心脏病(CHD)发生率之间的相关性.方法 选取室间隔缺损性CHD患儿为试验组,选取同期在我院进行体检的健康儿童作为对照组.用聚合酶链反应法检测MTHFR C677T、MTHFR A1298C、TCN2 rs1801198、RFC rs 1051266 多态性,并用二元逻辑回归分析上述基因多态性与CHD之间的关系.结果 试验组和对照组各纳入108例.试验组和对照组的MTHFR C677T位点TT比例分别为44.44%和19.44%,MTHFR A1298C 位点 CC 比例分别为 51.85%和 37.04%,TCN2 rs1801198位点GG比例分别为55.56%和33.33%,差异均有统计学意义(均P<0.05).二元回归分析表明,MTHFR C677T和TCN2 rs1801198位点的多态性是室间隔缺损性CHD的危险因素(均P<0.05).结论 室间隔缺损性CHD的发生与MTHFR C677T和TCN2 rs1801198位点多态性息息相关.
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编辑人员丨2024/1/13
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介孔二氧化硅纳米粒的功能化修饰及其在药物研究中的应用
编辑人员丨2023/8/6
目的:提高介孔二氧化硅纳米粒作为药物载体的性能,促进其在药物治疗中的应用.方法:以"介孔二氧化硅纳米粒""功能化修饰""药物""Mesoporous silica nanoparticles""Functionalized modification""Drug"等为关键词,组合查询2012年1月-2018年3月在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、SpringerLink、Elsevier等数据库中的相关文献,主要对介孔二氧化硅纳米粒的肿瘤靶向性修饰、内源性刺激响应性修饰、外源性刺激响应性修饰及其在药物研究中的应用进行论述.结果与结论:共检索到相关文献292篇,其中有效文献43篇.根据肿瘤部位的靶向受体(包括叶酸受体、线粒体受体、透明质酸受体等)和肿瘤内部微环境(包括酸性pH环境、还原性环境、多种酶环境等)以及外部环境刺激(包括温度变化、光和磁场等),采用肿瘤靶向性材料(如叶酸、线粒体靶向肽三苯基膦、转铁蛋白等)、内源性刺激响应性材料(如pH敏感性接头、二硫键、酶响应性材料等)、外源性刺激响应性材料(如温敏性材料聚N-异丙基丙烯酰胺、光敏性材料偶氮苯、超顺磁性四氧化三铁等)对介孔二氧化硅纳米粒进一步功能化修饰,可实现药物的特异性递送,避免药物提前释放,提升药物的抗肿瘤效率,提高药物的生物利用度.介孔二氧化硅纳米粒要应用于临床,还需要解决其大规模生产问题、稳定性问题以及在动物实验中的良好效果能否在临床重现的问题,此外对其毒性和体内分布、代谢过程也需进行深入研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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过表达亚甲基四氢叶酸脱氢酶对高山被孢霉脂质合成的影响
编辑人员丨2023/8/6
高山被孢霉是一种富含多不饱和脂肪酸的丝状真菌,但其脂质过程中NADPH的来源还没有研究透彻.以高山被孢霉(尿嘧啶营养缺陷型)作为出发菌株,研究亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD1)对高山被孢霉脂质合成的影响.首先构建了过表达载体pBIG2-ura5 s-MTHFD1,采用根癌土壤杆菌介导转化真菌的方法,将二元表达载体转化进高山被孢霉CCFM501中,在筛选培养基SC-CS平板上进行筛选,进而得到稳定遗传MTHFD1基因的过表达菌株(MA-MTHFD1);其次提取MA-MTHFD1菌株基因组进行PCR鉴定,并结合qPCR分析结果,表明MTHFD1基因成功在高山被孢霉中实现了过量表达;最后通过对MA-MTHFD1中的脂肪酸含量、NADPH含量及NADPH合成途径中相关基因转录水平进行分析,研究MTHFD1基因过表达对脂质合成的影响.实验结果表明,过表达MTHFD1基因可以提高高山被孢霉脂质合成能力.与原养型高山被孢霉相比,MA-MTHFD1菌株中脂肪酸含量提高了40.13%,NADPH的含量提高了26.45%,而且NADPH合成途径中其他相关基因苹果酸酶(ME)和异柠檬酸脱氢酶(IDH)的转录水平也发生了上调.这一系列研究结果表明,在高山被孢霉脂质合成还原力形成中,MTHFD1基因起到了关键作用.这为解析高山被孢霉中NADPH来源及深入研究脂质合成机制,从而对其胞内脂肪酸代谢通路进行分子水平上的改建提供了一定的理论依据.
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编辑人员丨2023/8/6
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BHMT和RFC1多态性与中国北方汉族儿童神经管缺陷的易感性研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究中国北方汉族儿童中甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶基因(BHMT)和还原叶酸载体1基因(RFC1,又称SLC19A1)的单核苷酸多态性(SNPs)与神经管缺陷(NTDs)易感性的关系.方法 以中国北方汉族152例NTDs患儿和169例正常对照为研究对象,采用Sequenom Mass-ARRAY分型技术对BHMT和RFC1两个基因的9个SNPs位点进行基因分型,Haploview4.2软件进行单体型分析.结果 BHMT基因rs3733890位点等位基因频率与NTDs的发病存在显著关联,且携带A等位基因儿童发生NTDs风险高于G等位基因的儿童(OR=1.408,95%CI:1.013~ 1.956);RFC1基因rs1051266位点等位基因和基因型频率分布与NTDs的发病存在显著关联,且携带G等位基因和GG基因型的儿童患NTDs风险分别高于A等位基因和AA基因型儿童(OR=1.492,95%CI:1.089~ 2.044;OR=2.020,95%CI:1.081~ 3.780);RFC1基因rs3788200位点等位基因频率与NTDs发病存在显著关联,携带G等位基因的儿童患NTDs风险高于携带A等位基因儿童(OR=1.368,95%CI:1.002~1.868).同时,单体型分析结果显示BHMT基因单体型C-A-A-A(rs567754-rs3733890-rs558133-rs585800)和RFC1基因单体型G-G-G-T (rs 1051296-rs3788200-rs1051266-rs4819130)可使NTDs发病风险增加,而BHMT基因单体型C-G-A-A可使NTDs发病风险降低.结论 BHMT基因rs3733890和RFC1基因rs1051266、rs3788200多态性与中国北方汉族儿童NTDs的易感性相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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还原性叶酸载体基因多态性与大剂量甲氨蝶呤化疗反应的关系分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究还原性叶酸载体(RFC1)基因多态性与大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)化疗反应的关系.方法选取我院2016年8月—2018年4月收治的急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿90例,提取患儿血液DNA后检测其RFC180位点基因型,比较AA、AG+GG基因型患儿在HD-MTX治疗后化疗反应发生率,分析RFC1 G80A基因多态性与HD-MTX治疗后化疗反应发生的关系,测定不同基因型患儿化疗48 h后血药浓度,比较AA型、AG+GG型患儿与HD-MTX排泄延迟的关系.结果本组AA型24例、AG型45例、GG型21例,AA型患儿骨髓抑制、肝功能损伤、排泄延迟率发生的风险高于AG+GG型(P<0.05),AA型与AG+GG型患儿口腔黏膜炎和消化道反应发生率均无统计学意义(P>0.05).结论ALL患儿RFC1 G80A基因多态性与HD-MTX化疗反应存在相关性,可能成为预测HD-MTX化疗反应的遗传学标记.
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编辑人员丨2023/8/6
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叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停止发育的相关性
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停止发育的相关性.方法 选取有胚胎停育史114例(胚胎停育组)和正常妊娠妇女125例(对照组),采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术检测两组亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)、还原叶酸载体及蛋氨酸合酶等叶酸代谢酶的基因多态性,并对其叶酸利用能力风险进行分级评定.结果 胚胎停育组MTHFR C677T的T等位基因分布与对照组比较有统计学差异(P<0.05);胚胎停育组MTHFR C677T TT基因型和MTRR A66G GG基因型占比高于对照组(P均<0.05).Logistic回归分析显示,MTHFR C677T位点的TT基因型和MTRR A66G位点的GG基因型是发生胚胎停育的危险因素,其发生风险分别是对照组的4.127和4.528倍(P均<0.05).胚胎停育组叶酸利用能力中度风险和高度风险的分布比例高于对照组(P均<0.05).结论 MTHFR C677T位点和MTRR A66G位点的突变与胚胎停止发育有关.
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编辑人员丨2023/8/6
