目的:研究甲氨蝶呤、来氟米特的药物相关基因多态性在RA患者中的基因型分布。方法:统计分析2018年12月至2019年5月在光华医院检测甲氨蝶呤与来氟米特药物相关基因（MTHFR677C/T、MTHFR1298A/C、ABCB13435T/C、DHODH19C/A和CYP1A2734C/A）RA患者基因分型结果及药物不良反应发生情况。使用Hardy-Weinberg检验等位基因分布的独立性；各基因基因型、等位基因频率等计数资料采用 χ2检验进行分析；计量资料以 ± s表示。使用Cytoscape软件对患者不良反应发生情况与基因型进行关联构网分析。 结果:151例患者中基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡（ P>0.05），各基因的基因型及等位基因分布性别差异无统计学意义（ P>0.05）。结果显示，对甲氨蝶呤应答好，中等耐药基因型（MTHFR677CC/MTHFR1298AA/ABCB13435CT）（16例，占13.5%）和对来氟米特应答好，不良反应风险中等基因型（DHODH19CC/CYP1A2734AC）（25例，占28.4%）在RA患者中比例最高。根据等位基因分布频率预测甲氨蝶呤与来氟米特联用导致高毒副作用的发生率为2.9%，与实际出现患者基因型所占比例1.8%相近。对患者临床不良反应发生种类及比例进行回顾分析并与基因型分析结果进行关联构网分析，发现不良反应发生频率从高到底依次为肝损伤（35例，35.4%）、白细胞减少（14例，14.1%）、血小板减少（2例，2.0%）、口腔溃疡（2例，2.0%）、皮疹（1例，1.0%）；发生不良反应频率处前2位的基因型分别为MTHFR677CT/MTHFR1298AA/ABCB13435CT、DHODH19CA/CYP1A2734AC，验证RA患者药物相关基因型与其临床表现具有一致性。 结论:RA患者基因型与药物的疗效和不良反应发生密切相关。2.9%的RA患者可能会因甲氨蝶呤耐药、应答差，联用来氟米特后毒副反应增高而停药，其中引起肝损伤比例最高，需引起重视。

目的 探究西达本胺(CDM)靶向P21调控二氢叶酸还原酶(DHFR)表达逆转T淋巴细胞白血病(T-ALL)甲氨蝶呤(MTX)的耐药机制,为T-ALL靶向治疗提供参考依据.方法 将过表达载体(ov-DHFR)转染T-ALL细胞系Jurkat细胞,Western blot检测细胞中DHFR蛋白表达水平.将转染ov-DHFR载体的Jurkat细胞采用不同浓度(5、25和 40 μmol/L)的 MTX 处理、0.5 μ mol/L CDM 处理以及不同浓度(5、25 和 40 μmol/L)的 MTX 联合 0.5 μmol/L CDM 进行处理.采用25 μmol/L MTX、0.5 μmol/L CDM和25 μmol/L MTX+0.5 μmol/L CDM联合处理进行增殖、周期和蛋白检测.MTS实验检测转染ov-DHFR载体的Jurkat细胞对MTX耐药增殖,并计算相应的半抑制浓度(IC50)值.MTS、流式细胞和Western blot实验分别检测CDM+MTX处理对过表达DHFR的Jurkat细胞的增殖、周期及细胞中耐药蛋白和周期蛋白表达的影响.在MTX+CDM处理的过表达DHFR的Jurkat细胞增加P21抑制剂处理,MTS、流式细胞和Western blot实验分别检测CDM+MTX+P21抑制剂处理对过表达DHFR的Jurkat细胞的增殖、周期及细胞中耐药蛋白和周期蛋白表达的影响.结果 与转染阴性对照载体(ov-NC)组细胞MTX IC50值相比,转染ov-DHFR组Jurkat细胞的MTX IC50值变大.不同浓度的MTX和CDM处理发现25和40 μmol/L MTX+CDM组的治疗能够最显著地抑制过表达DHFR的Jurkat细胞的增殖,而且这两组治疗效果相似,因此后续采用25 μmol/L MTX+CDM组进行分析.与cell组相比,MTX组、CDM组和MTX+CDM组的过表达DHFR的Jurkat细胞在24、48、72 h这3个时间点,细胞的吸光度值均显著下降,差异均有统计学意义(F=40.180、378.900、510.700,P均＜0.001).G1期的细胞比例均显著上升,而MTX+CDM组中表现最显著(F=7.419,P＜0.001).Cyclin D、p-GP、BCRP蛋白表达水平均显著下调,且在MTX+CDM组细胞中表现最显著;此外,P21蛋白表达水平均显著增加,且在MTX+CDM组细胞中表现最显著.与MTX+CDM+PBS组相比,MTX+CDM+P21抑制剂组ov-DHFR-Jurkat细胞在48、72 h这2个时间点,细胞的吸光度值均显著上升,差异均有统计学意义(F=66.690、68.400,P均＜0.001).与MTX+CDM+PBS组相比,MTX+CDM+P21抑制剂组ov-DHFR-Jurkat细胞中Gl期的细胞比例显著降低,差异有统计学意义(P＜0.019);细胞中cyclin D、p-GP、BCRP蛋白表达水平均显著上调.结论 CDM靶向P21调控DHFR表达逆转T-ALL的MTX耐药.

目的 确定亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C及多药耐药1(ABCB1)C3435 T基因多态性与急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)药物不良反应关系.方法 收集用HD-MTX化疗的ALL患儿血样,用测序法检测MTHFR C677T、A1298C和ABCB1 C3435T基因多态性,根据抗癌药物常见药物不良反应分级标准统一评价MTX化疗后的药物不良反应,统计分析MTHFR C677T、A1298C及ABCB1 C3435T基因多态性与HD-MTX药物不良反应的关系.结果 MTHFR A1298C AC+CC型肝功能损伤(2级)风险高于 AA 型[比值比(OR)=2.350,95％置信区间(CI)=1.038～5.320,P＜0.05)],未发现MTHFR A1298C与骨髓抑制、黏膜损伤、胃肠道反应及急性肾损伤有相关性(均P＞0.05).ABCB1 C3435TCT型肝功能损伤(2级)风险高于 TT 型(OR 5.161,95％CI=1.371～19.424,P＜0.05),ABCB1 C3435TCC+CT型肝功能损伤(2级)风险高于TT型(OR 4.231,95％CI=1.165～15.362,P＜0.05),未发现ABCB1 C3435T与骨髓抑制、黏膜损伤、胃肠道反应及急性肾损伤有相关性(均P＞0.05).未发现MTHFR C677T与HD-MTX药物不良反应有相关性(均P＞0.05).结论 在用HD-MTX治疗ALL时,可通过检测MTHFR A1298C及ABCB1 C3435T基因型来预测药物不良反应,从而实施更加科学的个体化用药.

目的:探讨转铁蛋白受体(TFRC)在胃癌组织中的表达及其与化疗药物敏感性的关系.方法:选取2018 年4 月至2020 年4 月医院胃肠外科收治接受胃癌切除术治疗的胃癌患者112 例,并收集手术切除的新鲜胃癌组织及距肿瘤边缘>5cm的癌旁组织.制备组织石蜡切片,分别采用免疫组织化学SP染色和原位杂交染色检测组织中TFRC蛋白及mRNA表达.制备胃癌组织单细胞悬液,采用MTT比色法分析TFRC表达与化疗药物敏感性的关系.术后随访3 年,绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析TFRC表达与胃癌患者预后的关系.结果:胃癌组织中TFRC蛋白阳性表达率为 67.86%,高于癌旁组织中的 21.43%,差异具有统计学意义(P<0.05).胃癌组织中TFRC mRNA阳性表达率为60.71%,高于癌旁组织中的 15.18%,差异具有统计学意义(P<0.05).胃癌组织中TFRC蛋白与mRNA表达呈显著正相关(P<0.05).肿瘤最大直径≥5 cm、临床分期Ⅲ-Ⅳ期、低分化、浸润深度T3 + T4 期、有淋巴结转移的胃癌患者TFRC蛋白和mRNA阳性表达率更高,差异具有统计学意义(P<0.05).胃癌组织中TFRC蛋白和mRNA阴性表达患者顺铂(DDP)、环磷酰胺(CTX)、氟尿嘧啶(5-FU)、氨甲蝶呤(MTX)敏感性高于阳性表达者,差异具有统计学意义(P<0.05).化疗敏感组患者胃癌组织中TFRC蛋白和mRNA阳性率低于化疗耐药组,差异具有统计学意义(P<0.05).胃癌组织中TFRC表达是胃癌患者化疗敏感性的独立危险因素(P<0.05).胃癌组织中TFRC蛋白和mRNA阳性表达的患者无病生存期(DFS)率及总生存期(OS)率均低于阴性表达者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:TFRC在胃癌组织中呈阳性表达,可能参与胃癌发生及发展,并与患者预后密切相关,且TFRC细胞表达增高时,对化疗药物敏感性亦增加,可作为胃癌术后辅助化疗效果的预测指标,为治疗提供参考.

背景与目的 奥希替尼是治疗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变肺腺癌患者的有效靶向治疗药物,然而,出现继发脑膜转移的耐药患者的后续治疗方式仍有待探讨.本研究旨在分析奥希替尼耐药后继发脑膜转移的患者接受甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、鞘内注射的疗效、安全性和预后.方法 回顾性分析2018年6月至2022年11月期间,34例接受甲氨蝶呤鞘内注射的奥希替尼治疗继发肺腺癌脑膜转移患者的临床资料.对比治疗前后患者的症状、实验室化验结果,分析治疗不良反应及生存期.结果 进行MTX鞘内注射后,67.6%(23/34)的患者脑膜转移症状改善.其中,31例患者接受了增强头颅磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)复查,MRI结果提示,治疗前存在脑膜异常强化的10例患者中,30%(3/10)的患者强化较治疗前减轻.脑脊液化验提示,蛋白水平及肿瘤标志物水平较治疗前均有所下降,差异具有统计学意义(P<0.05).奥希替尼联合MTX鞘内注射的中位无进展生存期为2.6个月,中位总生存期为12.7个月.结论 奥希替尼联合甲氨蝶呤鞘内注射治疗继发脑膜转移的EGFR突变型肺腺癌患者疗效显著,可延长患者生存期.

目的:观察温化蠲痹方治疗类风湿关节炎(RA)的临床疗效,研究其对RA患者耐药基因P-糖蛋白(P-gP)表达影响,探讨温化蠲痹方治疗RA的增效机制.方法:60例RA患者随机分为两组,中药温化蠲痹方加西药治疗组(治疗组)30例,对照组30例,其中对照组口服甲氨蝶呤片(MTX,每周1次,每次7.5 mg),来氟米特片(每天1次,每次10 mg),美洛昔康片(莫比可,每天2次,每次7.5 mg).治疗组在口服上述西药的同时,加用温化蠲痹汤(每天1剂,分2次口服)治疗,观察12周.观察两组临床疗效,治疗前后症状、体征、实验室指标,包括中医症候疗效分析、健康状况评估(HAQ评分)、疾病活动指数(DAS28)、患者疼痛评估(VAS评分)、晨僵时间、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、血小板计数、P-gP表达、安全性指标等,运用实时定量PCR检测外周血P-gP表达.结果:治疗组总有效率(86.6％)优于对照组(76.6％),差异有统计学意义(P＜0.05).在改善DAS28、HAQ评分、VAS评分、关节肿胀数、关节压痛数、晨僵时间,与本组治疗前和对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);两组患者P-gP、ESR、CRP、RF、抗CCP抗体、血小板计数等指标,与本组治疗前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),治疗组治疗后上述指标改善优于对照组(P＜0.05,P＜0.01);两组出现肝酶升高、白细胞下降、胃肠道反应、感染及血压升高等,治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:中药温化蠲痹方加西药治疗RA疗效优于单独西药治疗,温化蠲痹方可降低RA患者多药耐药基因P-gP表达,改善患者对DMARDs多药耐药,可能是其治疗RA提高临床疗效机制之一,该方治疗RA患者安全、有效.

目的:探究丹酚酸A的抗肿瘤作用及逆转人肺癌耐药细胞株A549/MTX肿瘤的多药耐药性的作用.方法:将体外培养人肺癌细胞A549及A549/MTX细胞分别分为3组:空白对照组(只加培养基)、阴性对照组(细胞+培养基)及实验组(细胞悬液+3种化疗药).丹酚酸A以5个浓度(4、8、16、32、64 μg/mL)对A549细胞作用,MTT法检测丹酚酸A在24、48、72 h对A549细胞的抑制作用;同时,检测甲氨喋呤(MTX)、顺铂(CDDP)、吉非替尼(GEF)这3种化疗药对A549、A549/MTX细胞株及丹酚酸A干预后的A549/MTX细胞株的半数抑制浓度(IC50),观察丹酚酸A对耐药细胞株的药敏性及药物逆转的作用.结果:丹酚酸对A549细胞24h抑制率从(9.16±3.64)％(4μg/mL)上升至(52.93±5.21)％ (64 μg/mL),当浓度增加至64 μg/mL,并分别作用24 h、48 h、72 h后,抑制率为(54.93±5.21)％、(63.83±2.74)％、(72.91±4.06)％,丹酚酸A对A549细胞具有显著的增殖抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性.4 μg/mL丹酚酸A对A549细胞及A549/MTX细胞的生长抑制率均低于10％ (9.16％,7.38％),说明对两者没有明显的毒性.经4 μg/mL丹酚酸A干预A549/MTX细胞后,甲氨喋呤对A549/MTX细胞株的IC50由(105.72±4.62)μ-g/mL降低至(26.13±1.36) μg/mL,逆转倍数为4.05倍;顺铂对A549/MTX细胞株的IC50由(174.92±6.86)μg/mL下降至(49.89±1.73)μg/mL,逆转倍数为3.51倍;吉非替尼对A549/MTX细胞株的IC50由(251.38±8.64) μg/mL降为(116.93±5.22)μg/mL,逆转倍数为2.15倍.与对A549细胞的作用相比较,MTX、CDDP、GEF对A549/MTX细胞作用差异均有统计学意义(P＜0.01).经丹酚酸A干预后,三种化疗药物对A549/MTX细胞作用差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论:丹酚酸A能够抑制A549细胞及A549/MTX细胞的生长,此外,丹酚酸A在体外能够部分逆转A549/MTX的多药耐药性.

原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)是一种罕见的结外侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL),病灶仅局限于脑、脊髓、眼或软脑膜,无全身受累表现[1 ].形态学上, 95％以上 PCNSL 为弥漫大 B 细胞淋巴瘤(DLBCL)[2],但与外周 DLBCL 相比,PCNSL 病程进展快、预后差.大剂量甲氨喋呤 (HD-MTX)能够穿透血脑屏障,在中枢神经系统(CNS)内达到有效的治疗浓度,因此以HD-MTX为 基 础 的 联 合 化 疗 能 明 显 改 善 PCNSL 预后[3],但仍有 30％ ～40％患者因年龄、化疗相关不良反应、原发耐药、复发等原因不能从中受益.近年来,随着对 PCNSL 生物学及分子发病机制的深入了解,以及针对肿瘤细胞表面抗原、信号通路调控分子、肿瘤微环境等治疗靶点的新型抗肿瘤药物不断问世,PCNSL获得了越来越多的治疗机会,我们现将这些新型靶向药物在 PCNSL 中的治疗进展进行综述.

目的:探讨低危妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)单药化疗耐药的高危因素.方法:回顾分析2010年6月至2017年12月南京医科大学鼓楼临床学院妇科收治的84例初治低危GTN患者的临床资料.结果:84例低危GTN患者中,15例发生耐药,耐药率为17.9％.继发于葡萄胎和流产患者的耐药率比较,差异无统计学意义(P>0.05).低危GTN患者的单药化疗耐药发生与血清β-HCG值水平高、肿瘤病灶较大、转移病灶较多、FIGO/WHO预后评分较高有关,差异均有统计学意义(P<0.05),而与患者接受MTX为主的化疗单药化疗方案和5-FU为主的单药化疗方案无关.结论:最大肿瘤病灶≥5cm,转移病灶≥5个、血清β-HCG值>105 IU/L、FIGO/WHO预后评分6分可能是化疗耐药的高危因素,不同单药化疗方案的耐药率无显著差异.

骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤,它好发于长骨的干骺端,而股骨远端和胫骨近端的发病率占其 50％.其每年发病率为 3 / 100 万,其中男女比例为 1:1.4 [1-2].OS 易通过血液转移到其它器官,尤其肺部.少数情况下可转移到大脑、前列腺和其它组织 [3-4].新辅助化疗联合手术已成为治疗 OS 的主要治疗方式,常用的新辅助化疗药物包括顺铂(DDP )、阿霉素(ADM )、甲氨蝶呤(MTX)和异环磷酰胺(IFO)[5].随着新辅助化疗的开展,OS 患者 5 年生存率已从 20％ 提高至 75％,转移率和病死率已得到很大程度降低.但由于不同个体之间 OS 细胞对化疗药物的敏感性不同而使化疗效果并不理想,并且随着药物长时间的使用,OS 患者会产生化疗耐药 [6].