目的 基于网络药理学和实验验证探讨通关藤治疗乳腺癌的作用机制.方法 通过文献检索获得通关藤的活性成分,并利用SwissTargetPrediction数据库获得活性成分对应的靶点,通过GeneCards、GEPIA2、OMIM、PharmGKB、TTD数据库获得乳腺癌的靶点,将药物靶点与疾病靶点取交集后,用Cytoscape3.9.0软件构建通关藤活性成分-乳腺癌-靶点网络,通过蛋白相互作用(PPI)网络筛选关键靶点,进行GO和KEGG通路富集分析,并筛选相关信号通路.对前10个关键靶点和主要活性成分进行分子对接验证.利用通关藤注射液体外干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖能力,Calcein-AM/PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blot对PI3K-AKT信号通路进行验证.结果 从通关藤中筛选出11α-O-苯甲酰-12β-O-乙酰通关藤苷元B、咖啡酸、苦绳苷元A、山柰酚等 37 个活性成分和治疗乳腺癌的 276 个潜在作用靶点,PPI网络筛选出AKT1、EGFR、TNF、CTNNB1、IL-6等25个关键靶点,主要影响雌激素信号通路、ErbB信号通路、HIF-1信号通路和PI3K-AKT信号通路等.分子对接结果显示,通关藤的主要活性成分与核心靶点AKT1、ALB、CASP3、ESR1和TNF均有较好的结合活性.体外实验结果显示,通关藤注射液可抑制MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力(P<0.01,P<0.001),诱导细胞凋亡(P<0.001),同时抑制PI3K-AKT信号通路激活(P<0.05,P<0.01).结论 通关藤可能通过多靶点和多途径发挥抗乳腺癌作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT信号通路有关.

目的:建立通关藤药材的HPLC指纹图谱，并结合化学计量学方法对不同产地通关藤质量进行评价。方法:采用HPLC法建立指纹图谱，色谱柱为DiKMA C18（250 mm ?×?4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为1.0 ml/min，检测波长230 nm，柱温30 ℃，进样量10 μl。将色谱信息导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版），进行相似度分析。采用SPSS Statistics 26进行系统聚类分析，采用SIMCA 14.1软件进行主成分分析和偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）。 结果:确定12个共有峰，指认其中2个色谱峰分别为通关藤苷G、通关藤苷I。15批样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度为0.942～0.995。当平方欧式距离为20时，样品可聚为2类，S1～S3、S13～S15聚为一类，S4～S12聚为一类；主成分分析和PLS-DA结果表明，15批通关藤质量具有一定差异性，且与产地相关。结论:该结果可为分析不同产地通关藤药材质量差异及后期相关配方颗粒的质量标准提供参考。

目的 研究通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的化学成分及其细胞毒活性.方法 通关藤水提取物采用大孔树脂、硅胶、ODS、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.采用MTT法评价其对肿瘤细胞A549、Bel-7402的细胞毒活性.结果 从中分离得到12个化合物,分别鉴定为通关藤醇A(1)、12-O-惕各酰基-通关藤苷元 A(2)、isoshonanin(3)、caruilignan D(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、通关藤苷元A(7)、白桦脂酸(8)、11-O-异丁酰基-12-O-乙酰基通关藤苷元B-3-O-茯苓二糖苷(9)、通关藤苷H(10)、通关藤苷G(11)、通关藤苷Ⅰ(12).化合物1～2、7、10、12能抑制A549、Bel-7402细胞的生长.结论 化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物3～6为首次从该植物中分离得到.化合物1～2、7、10、12具有细胞毒活性.

目的:建立同时测定通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的方法.方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法,色谱柱为Phenomenex Kinetex XB-C18,流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为40℃,进样量为5 μL,离子源为电喷雾离子源,多反应离子监测模式,正离子扫描,离子源喷射电压为5500 V,雾化气压力为60 psi,加热气压力为60 psi,帘气压力为20 psi,去溶剂温度为600℃.结果:通关藤苷A、H、I检测质量浓度线性范围分别为0.1~10 ng/mL(r=0.9997)、0.025~10 ng/mL(r=0.9995)、0.025~10 ng/mL(r=0.9989);定量限分别为0.1、0.025、0.025 ng/mL,检测险分别为0.05、0.0125、0.0125 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于4.0%;加样回收率分别为97.67%~99.00%(RSD=0.47%,n=6)、95.00%~101.67%(RSD=2.59%,n=6)、96.67%~103.33%(RSD=2.83%,n=6).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的同时测定.

目的 建立UPLC-MS/MS同时测定消癌平注射液中通关藤苷A、通关藤苷I、通关藤苷H的含量.方法 采用Phenomenex Kinetex XB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.6 μm),以0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱分离,流速为0.2 mL·min-l,通过电喷雾离子源,多反应监测(MRM),正离子模式.结果 通关藤苷A、I、H分别在0.05～10 ng·mL-1,0.025～10 ng.mL-1,0.025～10 ng·mL-1浓度内呈良好的线性关系,r＞0.998,检测限为0.012 5～0.025 ng.mL-1,平均回收率分别为97.9％,95.7％,96.1％,RSD＜3.4％.结论 方法简单快速,准确灵敏,可用于消癌平注射液中通关藤苷A、I、H的定量测定.

目的:建立同时测定消癌平片中通关藤苷A和通关藤苷I含量的方法.方法:取消癌平片经三氯甲烷萃取后采用高效液相色谱(HPLC)法进样分析.色谱柱为Symmetry C18,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为223 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为20μL.采用上述条件测定3批样品中通关藤苷A和通关藤苷I的含量.结果:通关藤苷A、通关藤苷I的质量浓度检测线性范围分别为26.40～264.00μg/mL(r=0.9994)、4.59～45.90μg/mL(r=0.9993),检测限分别为0.26、0.12μg/mL,定量限分别为0.79、0.36μg/mL;精密度、稳定性(12 h)、重复性试验峰面积的RSD均<2.0％(n=6);加样回收率分别为98.53％～99.28％(RSD为0.20％～0.51％,n=9)、97.00％～98.89％(RSD为0.19％～1.03％,n=9).3批样品中通关藤苷A和通关藤苷I的含量分别为2.27～2.32、0.64～0.69 mg/g.结论:本试验建立的方法简便,结果准确可靠,适用于消癌平片中通关藤苷A和通关藤苷I含量的同时测定.

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)分析消癌平注射液中通关藤苷A和I的方法 并测定其含量.方法消癌平注射液经微孔滤膜过滤,用HPLC进行分析,采用Symmetry C18(5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱;流动相:乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B);梯度洗脱方式(0～10 min,32％A;10～10.01 min,32％A～42％A;10.01～15 min,42％A;15～15.01 min,42％A～50％A;15.01～28 min,50％A);流速:1.0 ml/min;检测波长:223 nm.结果 通关藤苷A和I的线性范围分别为6.60～132.00、3.52～70.40μg/ml,通关藤苷A和I的平均加样回收率均>98％,相对标准偏差均<3％.结论 HPLC准确可靠、操作简便,可用于同时测定消癌平注射液中通关藤苷A和I的含量.

目的 探讨通关藤总皂苷对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 将常规培养的HepG2细胞分为实验组、 空白对照组和通关藤苷A对照组,实验组加入不同质量浓度(0.14、0.29、0.58、1.15、2.13 mg/ml)的通关藤总皂苷溶液处理,通关藤苷A对照组加入通关藤苷A 1.0 mg/ml处理,同时设立空白对照组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测通关藤总皂苷对HpeG2细胞活力的影响,并用倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测药物作用后细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 细胞活性检测结果显示通关藤总皂苷浓度0.29、0.58、1.15、2.13 mg/ml时,对HepG2细胞的增殖具有抑制作用,并且与浓度呈正相关,通关藤总皂苷抑制HepG2细胞生长的半数抑制浓度(IC 50)为0.75 mg/ml.倒置显微镜观察通关藤总皂苷作用后贴壁细胞明显减少,细胞脱落成团,碎片增加.流式细胞术检测结果显示通关藤总皂苷可增加HepG2细胞晚期凋亡比例(P<0.01);蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白结果显示,实验组(通关藤总皂苷0.58、2.13 mg/ml)、通关藤苷A对照组与空白对照组bcl-2蛋白的表达量分别为0.62±0.16、0.31±0.15、0.84±0.09和1.00±0.11,bax蛋白的表达量分别为0.75±0.10、0.83±0.12、1.00±0.14和0.15±0.02,p53蛋白的表达量分别为0.63±0.08、0.78±0.11、1.00±0.13和0.18±0.02,通关藤总皂苷实验组细胞bcl-2蛋白表达下降,bax、p53蛋白表达上升,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 通关藤总皂苷通过上调p53基因进一步上调bax,并且抑制bcl-2的表达,从而引起级联反应,诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其抑制作用可能通过线粒体途径导致细胞凋亡实现.

目的:探讨通关藤苷元甲(tenacigenin A)对肝细胞癌小鼠肝功能的保护作用及其可能机制.方法:建立二乙基亚硝胺(DEN,2 mg·kg-1)联合四氯化碳(CCl4,1 595 mg·kg-1)诱导的雌性小鼠肝细胞癌模型,受试组小鼠分别灌胃给予通关藤苷元甲(10、20 mg·kg-1),每周6天,共4周.计算肿瘤结节数,微板法检测各组血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)水平;Elisa法检测血清中甲胎蛋白(AFP)含量;HE染色法观察肝脏病理学改变;Western Blot检测肝组织中Bax、Bcl-2水平.结果:通关藤苷元甲(10,20 mg·kg-1)组小鼠的肝、脾指数及血清中AST、ALT、AKP、AFP和Bcl-2水平较模型组均显著降低,Bax则显著升高(P＜0.05);肝脏的病理学损伤情况有所减轻.结论:通关藤苷元甲对肝细胞癌雌性小鼠的肝功能具有一定的保护作用,其机制可能与其促进肝癌细胞凋亡等有关.

目的 建立超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定消癌平片中的通关藤苷A、H和I的含量.方法 采用Phenomenex Kinetex XB-C18色谱柱,以0.1％甲酸:乙腈为流动相,线性梯度洗脱,通过电喷雾离子源,多反应监测(MRM),正离子模式.结果 通关藤苷A、H、I质量浓度线性范围分别为0.1～10.0 ng/ml(R=0.9997)、0.025～10.0 ng/ml(R=0.9995)、0.025～10.0 ng/ml(R=0.9989);平均加样回收率分别为97.71％、98.93％和98.92％,RSD分别为1.70％、0.58％和0.49％.消癌平片中通关藤苷A、H、I含量分别为620.33～622.00、310.67～311.33、377.33～379.33μg/g.结论 UPLC-MS/MS方法快速、准确、灵敏,可用于消癌平片中通关藤苷A、H、I的含量测定.