目的:优选消癌平胶囊的最佳水提醇沉工艺。方法:采用正交试验法，以通关藤苷G含量和干浸膏率为指标，考察煎煮次数、煎煮时间、加水量对消癌平胶囊水提取工艺的影响；考察醇沉浓度、相对密度、静置时间对其醇沉工艺的影响。结果:优选的水提工艺为加6倍量的水煎煮3次，每次1.5 h；优选的醇沉工艺为水提液浓缩至相对密度为1.15(60 ℃)，冷却后加入乙醇，使含醇量为70%，静置12 h，除去沉淀。结论:优选的水提醇沉工艺稳定可行、重现性好，可为消癌平胶囊的提取纯化提供参考。

目的 研究通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的化学成分及其细胞毒活性.方法 通关藤水提取物采用大孔树脂、硅胶、ODS、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.采用MTT法评价其对肿瘤细胞A549、Bel-7402的细胞毒活性.结果 从中分离得到12个化合物,分别鉴定为通关藤醇A(1)、12-O-惕各酰基-通关藤苷元 A(2)、isoshonanin(3)、caruilignan D(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、通关藤苷元A(7)、白桦脂酸(8)、11-O-异丁酰基-12-O-乙酰基通关藤苷元B-3-O-茯苓二糖苷(9)、通关藤苷H(10)、通关藤苷G(11)、通关藤苷Ⅰ(12).化合物1～2、7、10、12能抑制A549、Bel-7402细胞的生长.结论 化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物3～6为首次从该植物中分离得到.化合物1～2、7、10、12具有细胞毒活性.

目的:建立同时测定通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的方法.方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法,色谱柱为Phenomenex Kinetex XB-C18,流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为40℃,进样量为5 μL,离子源为电喷雾离子源,多反应离子监测模式,正离子扫描,离子源喷射电压为5500 V,雾化气压力为60 psi,加热气压力为60 psi,帘气压力为20 psi,去溶剂温度为600℃.结果:通关藤苷A、H、I检测质量浓度线性范围分别为0.1~10 ng/mL(r=0.9997)、0.025~10 ng/mL(r=0.9995)、0.025~10 ng/mL(r=0.9989);定量限分别为0.1、0.025、0.025 ng/mL,检测险分别为0.05、0.0125、0.0125 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于4.0%;加样回收率分别为97.67%~99.00%(RSD=0.47%,n=6)、95.00%~101.67%(RSD=2.59%,n=6)、96.67%~103.33%(RSD=2.83%,n=6).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的同时测定.

目的 建立UPLC-MS/MS同时测定消癌平注射液中通关藤苷A、通关藤苷I、通关藤苷H的含量.方法 采用Phenomenex Kinetex XB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.6 μm),以0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱分离,流速为0.2 mL·min-l,通过电喷雾离子源,多反应监测(MRM),正离子模式.结果 通关藤苷A、I、H分别在0.05～10 ng·mL-1,0.025～10 ng.mL-1,0.025～10 ng·mL-1浓度内呈良好的线性关系,r＞0.998,检测限为0.012 5～0.025 ng.mL-1,平均回收率分别为97.9％,95.7％,96.1％,RSD＜3.4％.结论 方法简单快速,准确灵敏,可用于消癌平注射液中通关藤苷A、I、H的定量测定.

目的:建立同时测定消癌平片中通关藤苷A和通关藤苷I含量的方法.方法:取消癌平片经三氯甲烷萃取后采用高效液相色谱(HPLC)法进样分析.色谱柱为Symmetry C18,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为223 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为20μL.采用上述条件测定3批样品中通关藤苷A和通关藤苷I的含量.结果:通关藤苷A、通关藤苷I的质量浓度检测线性范围分别为26.40～264.00μg/mL(r=0.9994)、4.59～45.90μg/mL(r=0.9993),检测限分别为0.26、0.12μg/mL,定量限分别为0.79、0.36μg/mL;精密度、稳定性(12 h)、重复性试验峰面积的RSD均<2.0％(n=6);加样回收率分别为98.53％～99.28％(RSD为0.20％～0.51％,n=9)、97.00％～98.89％(RSD为0.19％～1.03％,n=9).3批样品中通关藤苷A和通关藤苷I的含量分别为2.27～2.32、0.64～0.69 mg/g.结论:本试验建立的方法简便,结果准确可靠,适用于消癌平片中通关藤苷A和通关藤苷I含量的同时测定.

目的 建立HPLC-DAD-ELSD法同时测定22个产地通关藤Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight et Am.中3种皂苷的含有量.方法 通关藤70％乙醇提取物的分析采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水(45∶55);检测波长235 nm;体积流量1.0 mL/min;漂移管温度80℃;载气压力3.5 bar(1 bar=100kPa).结果 通关藤苷G、H、I分别在1.768～5.305μg (r=0.999 2)、3.842～ 11.526 μg (r=0.999 0)、3.026～9.078 μg (r=0.999 1)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.60％ (RSD=1.86％)、99.88％(RSD=2.49％)、99.08％(RSD=1.14％),不同产地样品中三者含有量有明显差异.结论 该方法 稳定可靠,可用于通关藤的质量控制.

目的 建立超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定消癌平片中的通关藤苷A、H和I的含量.方法 采用Phenomenex Kinetex XB-C18色谱柱,以0.1％甲酸:乙腈为流动相,线性梯度洗脱,通过电喷雾离子源,多反应监测(MRM),正离子模式.结果 通关藤苷A、H、I质量浓度线性范围分别为0.1～10.0 ng/ml(R=0.9997)、0.025～10.0 ng/ml(R=0.9995)、0.025～10.0 ng/ml(R=0.9989);平均加样回收率分别为97.71％、98.93％和98.92％,RSD分别为1.70％、0.58％和0.49％.消癌平片中通关藤苷A、H、I含量分别为620.33～622.00、310.67～311.33、377.33～379.33μg/g.结论 UPLC-MS/MS方法快速、准确、灵敏,可用于消癌平片中通关藤苷A、H、I的含量测定.

为了探讨通关藤苷G(tenacissoside G,TG)对人结直肠癌细胞增殖的影响及其分子机制,本研究采用CCK-8和平板克隆检测通关藤苷G对结直肠癌RKO和LoVo细胞增殖水平的影响,并利用流式细胞仪观察细胞周期变化、彗星实验检查DNA损伤情况、免疫荧光检测γ-H2AX表达水平以及Western blot检测细胞周期与DNA损伤相关蛋白表达.实验结果显示,TG作用于细胞48 h后,IC50分别为91.71(RKO)和88.34(LoVo)μM,可显著抑制结直肠癌细胞增殖;TG作用于细胞48 h后,细胞在G0/G1期比例显著上升(P＜0.01),周期相关蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1、Cyclin E表达水平显著下降(P＜0.01),DNA损伤明显,γ-H2AX、cleaved PARP、cleaved Caspase 3、p-ATM、p-CHK2、p-p53蛋白表达水平均显著上调(P＜0.01),同时,p-ATM/ATM、p-CHK2/CHK2和p-p53/p53均显著升高(P＜0.01).说明TG通过诱导DNA损伤抑制结直肠癌细胞增殖,其作用机制可能为激活ATM-CHK2-p53信号通路介导的细胞凋亡和周期阻滞.

[目的]研究通关藤苷H对低分化鼻咽癌(NPC)细胞增殖和转移抑制作用及其机制.[方法]以人低分化NPC细胞株CNE-2为病理模型,采用细胞计数试剂CCK-8检测通关藤苷H对细胞存活率的影响.摸索适宜的药效浓度范围,流式细胞法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷酸化蛋白激酶B、磷酸化糖原合成酶激酶-3β、周期蛋白D1、上皮性钙黏附蛋白、神经性钙黏附蛋白和波形蛋白的含量,酶联免疫吸附(Elisa)法检测两种基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)细胞培养液中的浓度,Transwell检测CNE-2的转移侵袭能力.[结果]CCK-8结果显示,通关藤苷H可显著降低CNE-2细胞的存活率(P<0.05);流式细胞法结果表明,通关藤苷H促进CNE-2细胞的凋亡(P<0.05);Transwell检测结果显示CNE-2转移侵袭能力随通关藤苷H浓度增加而逐渐降低,Western blot结果显示随着通关藤苷H浓度的增加,Akt的磷酸化程度逐渐减少,GSK-3β的磷酸化修饰则逐渐增加,进而上调周期蛋白D1的表达;通关藤苷H可随浓度增加逐渐上调上皮性钙黏附蛋白和下调神经性钙黏附蛋白、波形蛋白的含量,并抑制MMP-2和MMP-9的分泌(P<0.05).[结论]通关藤苷H可通过影响磷酸化蛋白激酶B/磷酸化糖原合成酶激酶-3β/周期蛋白D1通路,并上调上皮性钙黏附蛋白和下调神经性钙黏附蛋白、波形蛋白的含量,减少MMP-2和MMP-9的分泌,抑制CNE-2细胞的增殖、侵袭和转移.

目的 探讨通关藤苷H(TSH)对人结肠癌LoVo细胞增殖、迁移和凋亡的影响,及其对高尔基磷蛋白3(GOLPH3)的调控作用.方法 实验1:分为低、中低、中、高剂量组和对照1组,分别给予0.1,1.0,10.0和100.0μg·mL-1 TSH及等量0.9％NaCl干预,处理24,48和72 h;实验2:分为①对照2组,0.9％NaCl;②TSH组,TSH;③空载组,p-CMV-control+0.9％NaCl;④GOLPH3组,p-CMV-2-GOLPH3+0.9％NaCl;⑤实验1组,p-CMV-control+TSH;⑥实验2组,p-CMV-2-GOLPH3+TSH;本部分实验的TSH质量浓度均为25μg·mL-1,干预24 h,检测细胞增殖活力、GOLPH3及转录活化因子3(ATF3)的表达水平、迁移能力和凋亡情况.结果 TSH呈浓度依赖性抑制LoVo细胞增殖.TSH组和对照2组的ATF3蛋白相对表达水平分别为0.08±0.02和1.00±0.15.空载组、TSH组、GOLPH3组、实验1组、实验2组和对照2组的GOLPH3蛋白相对表达量分别为1.00±0.27,0.08±0.06,3.82±0.52,0.17±0.12,3.58±0.55和1.00±0.12,迁移细胞数分别为(301±26),(47±12),(372±55),(39±14),(284±31)和(293±64)个,细胞凋亡率分别为(1.11±0.65)％,(31.77±3.47)％,(0.34±0.35)％,(30.06±4.86)％,(2.27±1.19)％和(0.51±0.54)％.TSH组的GOLPH3、ATF3表达水平、细胞迁移数和细胞凋亡率与对照2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);GOLPH3组的GOLPH3的蛋白表达水平与空载组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验2组中GOLPH3的蛋白表达水平与实验1组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验1组的细胞迁移数、细胞凋亡率与空载组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);实验2组的细胞迁移数、细胞凋亡率与实验1组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 TSH可通过调控GOLPH3的表达,抑制人结肠癌LoVo细胞体外增殖和细胞迁移,并诱导凋亡.