目的 探讨新型量子点荧光免疫层析法测定血清淀粉样蛋白A(SAA)的应用.方法 采用双抗夹心法结合量子点荧光免疫层析技术制备以二硝基苯酚(DNP)-牛血清白蛋白(BSA)系统为质控线的SAA检测试剂盒.通过鸡IgY-羊抗鸡IgY系统作为对照评价了 DNP-BSA系统作为质控线的可行性,并通过优化量子点微球与抗体的偶联条件,进一步提高试剂盒的性能,并对试剂盒的空白限、检出限、线性范围、精密度、准确度、特异度、稳定性,以及临床实际样本测定等方面进行了评价.结果 以DNP-BSA系统作为质控线的SAA试剂盒受干扰成分浓度的影响小,稳定性高,热稳定性好.量子点微球与SAA抗体偶联比例为100 μg/mg,偶联反应液浓度为25 mmol/L 3-吗啉丙磺酸pH 7.4,与DNP-BSA偶联比例为100 μg/mg,偶联反应液浓度为25 mmol/L吗啉乙磺酸pH 6.0时偶联效果最佳.试剂盒最低检出限为0.5 mg/L;线性范围为1～200 mg/L,R2≥0.99;批内精密度变异系数(CV％)≤5.31％,批间精密度CV％≤15％;在低、高浓度的回收率分别为101.42％、98.83％;在血红蛋白浓度≤5 g/L,胆红素浓度≤0.15 g/L,胆固醇浓度≤15 g/L,甘油三酯浓度10 g/L时,SAA的检测结果无干扰;试剂盒在50 ℃放置21 d,稳定性良好;试剂盒与Roche的SAA电化学发光试剂盒同步检测67例样本结果具有高度一致性.结论 研制的SAA检测试剂盒灵敏度、线性、精密度、准确度、特异度及加速稳定性都满足试剂盒的要求,与鸡IgY-羊抗鸡IgY系统相比DNP-BSA系统作为质控线独立性好,测定临床样本准确度和热稳定性更佳.

目的:建立简便、快速、低成本的2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)中和抗体检测方法。方法:基于量子点荧光免疫层析原理，建立新冠RBD IgG检测方法，并用新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019，COVID-19)患者恢复期血清( N＝97)、疫苗免疫后血清( N＝82)及健康人血清( N＝299)对检测方法性能进行评价。同时用指尖血和外周血配对血样( N＝54)对指尖血的适用性进行了评价。 结果:本研究成功建立了基于量子点荧光免疫层析法2019-nCoV RBD IgG检测方法，该方法检测结果与微量中和试验结果具有较强的相关性( Spearman r>0.73， P<0.000 1)和较好的一致性( Kappa＝0.93， P<0.01)；敏感性和特异性较高，分别为92%和99%。指尖血和外周血检测结果差异无统计学意义( P＝0.102 6)，二者具有较强的相关性( Spearman r＝0.932 6， P<0.000 1)；指尖血可用于检测。 结论:本研究建立的2019-nCoV中和抗体检测方法可为群体免疫状态评估提供的即时、高效，低成本的方法选择，为疫苗群体免疫监测和疫情防控提供技术支撑。

目的:探讨叶酸偶联量子点（FA-QD）免疫脂质磁珠法检测卵巢上皮性癌循环肿瘤细胞（CTC）的有效性及CTC与患者临床病理特征的相关性。方法:选取2019年8月至2020年1月在山西省人民医院就诊的卵巢上皮性癌患者67例。将卵巢癌SKOV-3细胞分为5个细胞数梯度（0、100、150、200、300个），比较上皮细胞黏附分子（EpCAM）免疫磁珠法（单标法）和FA-QD免疫脂质磁珠法（双标法）对CTC的检出率。应用FA-QD免疫脂质磁珠法检测卵巢癌患者外周血中CTC数量，荧光显微镜下见阳性CTC者即为CTC阳性患者，分析CTC与患者临床病理特征及肿瘤标志物的关系。结果:FA-QD免疫脂质磁珠法对SKOV-3细胞CTC的平均捕获率高于EpCAM免疫磁珠法（83.4%比70.3%）。在67例卵巢癌患者中，Ⅰ~Ⅱ期患者CTC阳性者比例为30.0%（3/10），Ⅲ期为91.9%（34/37），Ⅳ期为95.0%（19/20），差异有统计学意义（ P<0.05）；淋巴结转移患者CTC阳性者比例为97.1%（33/34），高于淋巴结未转移者的69.7%（23/33），差异有统计学意义（ P<0.05）；人附睾蛋白4（HE4）>110 pmol/L患者CTC阳性者比例为58.8%（10/17），低于HE4≤110 pmol/L患者的92.0%（46/50），差异有统计学意义（ P=0.005）；而年龄、绝经情况、病理分化程度、远处转移、癌胚抗原125（CA125）、癌胚抗原199（CA199）、血清癌胚抗原（CEA）分层患者间CTC阳性患者比例差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:FA-QD免疫脂质磁珠法可有效检测卵巢上皮性癌患者外周血CTC。卵巢上皮性癌患者CTC水平与淋巴结转移、临床TNM分期及HE4水平有关。

本研究探讨建立一种基于量子点免疫层析法联检甲型流感病毒、乙型流感病毒抗原的快速且简便的甲流/乙流联检试剂卡。甲流/乙流联检试剂卡由试纸条和塑料外壳构成，试纸条由吸水纸、缓冲垫、硝酸纤维素膜（NC膜）、样品垫、量子点标记物垫、聚氯乙烯板（PVC板）等组成。硝酸纤维素膜T线（检测线）包被有鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体和鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体，C线（质控线）包被有内参蛋白A和内参蛋白B，标记物垫上含有鼠抗甲型流感病毒抗体量子点结合物和鼠抗乙型流感病毒抗体量子点结合物。结果显示使用甲流/乙流联检试剂卡，各病毒的检出为1.51×10 2~2.71×10 3 TCID50/ml，证明该试剂的灵敏度足以用于甲流、乙流的精准检测且不受多种变体的影响。本试剂卡与不同分型的甲型流感病毒培养液、不同分型的乙型流感病毒培养液均能发生特异性反应，与腺病毒、新型冠状病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒、金黄色葡萄球菌等多种病原体无交叉反应。试剂的灵敏度足以用于甲流、乙流的精准检测且不受多种变体的影响。综上，甲流/乙流联检试剂卡灵敏度和特异性可达到临床使用的要求，并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点，可进行快速辅助诊断，以预防疾病传播。

猴痘疫情的突然暴发及其在世界范围内的传播表明，迫切需要建立更加有效的现场诊断技术，以应对高致病性病毒的悄然传播。本研究报道了一种具有比色-荧光共增强能力的双信号读出免疫层析法(immunochromatography assay, ICA)，可在不同情况下对猴痘病毒(monkeypox virus, MPXV)抗原进行超灵敏和灵活地检测。与传统的球形纳米标签相比，为双信号ICA定制的具有二硫化钼(MoS2)核和多层量子点壳的二维膜状纳米标签具有更好的信号响应、更大的反应接触面和更好的稳定性。研制的便携式双模读数仪，可同时识别两种信号并进行数据处理。该集成检测平台的比色信号可用于MPXV的快速筛查，而荧光模式可定量检测目标病毒，二者的检出限分别低至0.1和0.002 4 ng/ml，大大拓宽了现有ICA技术的应用范围。

目的 采用量子点微球标记的免疫层析技术研制胶质纤维酸性蛋白(GFAP)快速检测试纸条,实现对轻度颅脑损伤(mTBI)的辅助诊断.方法 偶联量子点微球与GFAP抗体,优化偶联条件获得荧光探针,制备免疫层析试纸条,建立诊断方法并优化检测条件,采用临床样本对试纸条的诊断效果进行评价.结果 优化后的试纸条仅需70μL血清样本即可在13 min内实现对GFAP的浓度检测,检出限为0.15 ng/mL,不同批次试纸条重复性良好(CV=10.7%).在51例临床样本中,mTBI检出灵敏度95.24%,特异性96.67%,具有较好的检出效果.结论 研发的试纸条操作简便,结果可靠,为战时复杂环境下mTBI的快速诊断奠定了基础.

目的 将内参蛋白引入新型冠状病毒(SARS-CoV-2)荧光免疫层析检测体系,以监测样本检测各环节的有效性,提高检测准确率.方法 聚乙烯亚胺(PEI)自组装法制备硅核双层量子点微球(SiO2-DQD),分别偶联内参抗体和SARS-CoV-2检测抗体.硝酸纤维素膜双检测线上分别包被内参抗体和SARS-CoV-2的捕获抗体.基于双抗夹心免疫检测原理,构建基于内参辅助的SARS-CoV-2荧光免疫层析检测方法.结果 荧光信号结果显示,在样本检测结果有效的条件下,该方法对SARS-CoV-2抗原的检测限可达0.01 ng/ml,且具有良好的特异性、稳定性.结论 建立了快速的基于内参蛋白检测的SARS-CoV-2荧光免疫层析方法,为SARS-CoV-2抗原检测提供了质控对照,降低检测结果的假阴性率.

目的 建立肺炎支原体(M p)抗原量子点免疫层析的检测方法 ,初步评价其在临床辅助诊断中的应用价值.方法在偶联剂碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺(N HS)作用下,使鼠抗人M p单克隆抗体(针对P1蛋白)与羧基量子点(CdSe/ZnS)偶联,制备量子点标记抗体包被在玻璃纤维膜上,以另一株M p单抗(针对P1蛋白)作为捕获抗体包被在硝酸纤维素膜(N C膜)上,建立双抗体夹心量子点免疫层析法检测肺炎支原体抗原.该方法检测130份临床咽拭子标本,并与荧光聚合酶链反应方法相比较.结果 经过一系列的反应条件优化,确定偶联剂EDC用量为0.4 mg/mL,sulfo-N HS用量为0.58 mg/mL,标记抗体浓度1:100稀释,捕获抗体浓度为0.75 mg/mL,反应时间为10 min.量子点免疫层析法检测临床标本,阴性符合率为96.4％,阳性符合率为90.0％.结论 量子点(CdSe/ZnS)标记免疫层析法检测Mp与荧光聚合酶链反应法具有较好的符合性,该方法操作简便、检测快速、灵敏度高,适用于Mp感染的早期诊断.

降钙素原(Procalcitonin,PCT)是降钙素的前体物质,与人体细菌感染情况严重程度相关.通过PCT抗体与量子点偶联,自制试纸条,开发一种高灵敏度、快速便捷的PCT检测产品,对其初步应用.PCT单抗效价达107,PCT蛋白与量子点偶联,具有较好稳定性.试纸条线性检测范围0.15-120 μg/L,灵敏度0.007 μg/L,回收率范围91％-113％,批内批间变异系数小于8％.自制的荧光检测试纸条与市场上已有的降钙素原ELISA试剂盒进行比对,检测结果良好,基本能够完成临床样品的检测.

目的 制备一种能快速检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的量子点免疫层析试纸,以期用于MERS-CoV感染检测. 方法 采用EDC偶联法将羧基化CdTe /ZnSe量子点与抗MERS-CoV RBD的单克隆抗体(mAb/MERS-CoV)共价偶联,通过斑点免疫印迹检验偶联物的活性.以CdTe/ZnSe量子点标记的mAb/MERS-CoV作为荧光标记物,采用免疫层析技术制备量子点免疫层析试纸,用于MERS-CoV检测.并对该方法进行特异性、敏感性评价.结果 CdTe/ZnSe量子点可偶联mAb/MERS-CoV,且偶联物具有良好的生物活性.以其作为荧光标记物建立的量子点免疫层析试纸可特异性检测MERS-CoV假病毒,最低检测限为2×53 TCID50/ml,其他对照病毒检测均阴性. 结论 制备的MERS-CoV量子点免疫层析试纸具有简便、快速、特异等优点,可用于MERS-CoV感染快速诊断和流行病学调查.