目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和Yes相关蛋白（YAP）是否参与急性肾损伤（AKI）中肾小管上皮细胞（RTEC）凋亡及其机制。方法:15只6~8周雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、阿霉素（ADR）干预组、ADR+ CaMKⅡ抑制剂（K）干预组（ n=5）。ADR干预小鼠建立AKI模型，HE染色观察小鼠肾小管细胞损伤，酶联免疫吸附检测小鼠血肌酐值。ADR干预体外培养HK-2细胞建立RTEC凋亡模型，流式细胞仪检测ADR、ADR+K、YAP-siRNA、CaMKⅡ活化剂（C）、C +oYAP（过表达YAP）对细胞凋亡率的影响。免疫印迹检测小鼠肾组织和HK-2细胞总蛋白Bax和Bcl-2、胞质蛋白pCaMKⅡ和CaMKⅡ、核YAP蛋白的表达。 结果:与正常对照组比较，ADR干预小鼠肾小管细胞损伤增加和血肌酐值升高，予K后肾小管细胞损伤减少、血肌酐值降低（均 P<0.05）。ADR干预的RTEC凋亡率明显高于对照组（ P<0.05），予K后细胞凋亡减轻（ P<0.05）。与正常对照组和siRNA空白对照组比较，YAP-siRNA和C干预的RTEC中细胞凋亡率明显增加（均 P<0.05），而C干预RTEC的同时予oYAP后细胞凋亡又减轻（ P<0.05）。与正常对照组比较，ADR干预的RTEC和小鼠肾组织细胞中，pCaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白的表达增加而核YAP蛋白、Bcl-2蛋白的表达减少（均 P<0.05），予K后这些作用减轻（均 P<0.05）。 结论:CaMKⅡ可能通过YAP调节ADR诱导AKI小鼠的RTEC凋亡。

室性心律失常是导致心原性猝死的重要原因，研究室性心律失常的发生机制具有重大临床意义。钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型（CaMKⅡ）是一种在心脏电活动中发挥重要作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究表明，CaMKⅡ可在许多病理状态下激活，通过影响下游多种离子通道，最终导致室性心律失常发生。因此，CaMKⅡ可能是治疗室性心律失常的潜在靶点。

目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）对离体心肌缺血-再灌注损伤的影响及对细胞凋亡与自噬的作用。方法:选取心电图正常的SPF级雌性SD大鼠（体重250~280 g），Langendorff灌流系统建立成功的离体心肌缺血-再灌注损伤模型共70只，随机分为五组（ n = 14），心脏缺血-再灌注组（IR组）、CaMKII磷酸化激活剂组（IR+异丙肾上腺素组）、CaMKII磷酸化抑制剂类似物组（IR+KN92组）、CaMKII磷酸化抑制剂组（IR+KN93组）、空白对照组（Control组）。采用再灌注末，左心室功能的变化、心肌细胞形态的变化评价心肌损伤程度；原位末端标记(TUNEL)法来检测细胞凋亡指数；蛋白印迹法（Western blot）检测CaMKII、受磷蛋白（PLN）的磷酸化水平（p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN）、以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和自噬标记蛋白LC3II/LC3I、Beclin-1、P62的表达水平。 结果:与Control组相比，IR组的大鼠左心室功能降低,心肌纤维形态排列紊乱，凋亡指数增高，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax/Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达增多，P62表达减少，凋亡和自噬水平明显升高（均 P < 0.05）。与IR组相比，IR+KN93组的大鼠心肌损伤有明显改善，凋亡指数减少，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax /Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达减少，P62表达增多，凋亡和自噬水平明显降低（均 P < 0.05）。IR+异丙肾上腺素组与IR组相比，进一步降低大鼠左心室功能，同时凋亡和自噬水平进一步升高（ P < 0.05），而IR+KN92组大鼠与IR组相比，心肌各指标比较差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:抑制CaMKII磷酸化通过降低细胞凋亡和自噬进而减轻离体心肌缺血-再灌注损伤。

目的:评价脊髓胞质活化/增殖相关蛋白1(Caprin-1)介导的钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡα)表达与小鼠痛觉感知的关系。方法:通过Nestin CreERT2小鼠与Caprin-1 flox/flox小鼠多代杂交，获得Nestin CreERT2；Caprin-1 flox/flox纯合子小鼠，采用随机数字表法分为2组( n＝5)：Nestin CreERT2；Caprin-1 flox/flox溶剂对照组(SC组)和Caprin-1敲除组(KO组)。KO组连续5 d腹腔注射他莫昔芬100 mg/kg，以诱导性敲除Caprin-1基因，SC组给予等容量溶剂。于连续给药前1 d和给药结束后5 d时测定机械缩足反应阈(MWT)。随后处死小鼠，取脊髓L 4-6节段，采用Western blot检测脊髓Caprin-1、CaMKⅡα表达，采用实时定量PCR法检测脊髓Caprin-1、CaMKⅡα的mRNA表达，采用免疫荧光双标染色检测Caprin-1与CaMKⅡα共表达情况。 结果:与SC组比较，KO组他莫昔分给药结束后5 d时MWT升高，脊髓Caprin-1及其mRNA、CaMKⅡα及其mRNA表达下调( P<0.05)，Caprin-1与CaMKⅡα在脊髓背角共定位表达下调。 结论:脊髓Caprin-1可通过促进CaMKⅡα表达，参与小鼠痛觉感知的形成。

目的:探讨1，25二羟维生素D 3［1，25（OH） 2D 3］对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制。 方法:将雄性野生型（WT）小鼠和1α羟化酶基因敲除［1（OH）ase -/-］小鼠分为WT组、WT+CVB3组、1（OH）ase -/-+CVB3组和1（OH）ase -/-+CVB3+VD 3组，每组8只。实时荧光定量PCR测定促炎症因子白细胞介素（IL）1β、IL-6、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA水平；HE染色观察心肌组织病理学改变；TUNEL染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡；Fluo-4/AM荧光探针检测心肌细胞内的钙离子含量；Western印迹法检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）及内质网应激相关葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的表达水平。 结果:与WT组相比，WT+CVB3组小鼠心肌中促炎症因子IL-1β（14.88±3.32比1.03±0.02， P=0.009）、IL-6（7.00±1.09比1.81±0.18， P=0.005）、IFN-γ（4.70±1.11比1.34±0.34， P=0.006）、TNF-α（17.20±3.22比1.02±0.12， P<0.001）mRNA水平均升高，炎症细胞浸润增多，心肌细胞凋亡率增加（16.66%±1.09%比7.85%±1.12%， P=0.012），心肌细胞胞质中游离Ca 2+增加（2.98±1.05比0.96±0.10， P=0.006），磷酸化CaMKⅡ（pCaMKⅡ）（1.97±0.34比1.00±0， P<0.001）、GRP78（1.78±0.19比1.00±0， P=0.005）及CHOP（1.62±0.09比1.00±0， P=0.002）蛋白表达增加；上述心肌细胞损伤指标在1，25（OH） 2D 3缺乏的1（OH）ase -/-+ CVB3组更显著；而在给予1，25（OH） 2D 3补充的1（OH）ase -/-+CVB3+VD3组，上述心肌细胞损伤指标均改善（均 P<0.05）；此外，CaMKⅡ特异性抑制剂可同样降低CVB3感染小鼠的心肌损伤和细胞凋亡率。 结论:1，25（OH） 2D 3缺乏可通过CaMKⅡ过度活化加重小鼠心肌炎症反应。

目的:探讨差异表达长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)LOC107987438在抑郁障碍发病机制中的调控作用，为其在抑郁障碍的临床应用提供理论依据。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)在60例抑郁障碍患者和60例健康对照的外周血单核细胞(peripheral blood monocular cells，PBMCs)中验证LOC107987438的差异表达，并通过受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线评估其诊断价值。基于lncRNA的竞争性内源性RNA(competing endogenous RNA，ceRNA)机制，应用miRDB数据库预测LOC107987438的靶miRNA，选取其中目标评分数≥80的miRNA。再将筛选出的miRNA通过TargetScan 8.0、miRTarBase、mirDIP和miRPathDB 2.0数据库预测其潜在靶mRNA。随后，将预测的靶mRNA通过R 4.1.1的ClusterProfiler 4.0.5软件包进行基因本体论(gene ontology，GO)功能注释和京都基因和基因组百科全书(tokoyo encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析。最后利用STRING 11.5平台构建蛋白质相互作用网络并筛选出关键基因。结果:qRT-PCR结果表明抑郁患者PBMCs中归一化的LOC107987438表达水平高于健康对照(抑郁障碍组：2.084±1.357；健康对照组：1.000±0.660， P<0.001)。ROC曲线结果显示LOC107987438的曲线下面积(area under curves，AUC)为0.759(95% CI：0.675~0.842， P<0.05)，表明其具有较高的诊断价值。生物信息学分析发现hsa-miR-4670-3p、hsa-miR-619-3p、hsa-miR-6721-5p和hsa-miR-297是与LOC107987438结合度较高的miRNA。KEGG富集分析出的缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor 1，HIF-1)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-AKT，PI3K-Akt)信号通路、酪氨酸激酶受体(erythroblastic oncogene B，ErbB)信号通路与抑郁障碍密切相关。通过蛋白质相互作用网络筛出前十的关键基因中，大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(kirsten rats arcomaviral oncogene homolog，KRAS)、雄激素受体(androgen receptor，AR) 、环腺苷酸反应元件结合蛋白1(cyclic-AMP response binding protein1，CREB1)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor 1，IGF1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B(cyclin-dependent kinase inhibitor 1B，CDKN1B)、钙/钙调素蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinase type Ⅱ alpha，CAMK2A)与抑郁障碍密切相关。 结论:抑郁障碍差异表达LOC107987438的ceRNA调控网络的建立为探索抑郁障碍的病理生理学机制提供理论基础。

目的:评价钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-环腺苷酸反应元件结合蛋白(Ca 2＋-CaMKⅡ-CREB)信号通路在U50488H减轻CPB致大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。 方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠40只，体重350～400 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：对照组(S组)、CPB组(C组)、CPB＋κ受体激动剂U50488H组(U组)和CPB＋CaMKⅡ特异性抑制剂KN93＋U50488H组(K组)。S组仅进行动静脉穿刺置管，其余各组建立无血预充心脏不停跳CPB模型。U组CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg；K组CPB前60 min时侧脑室注射10 μmol/L KN93 5 μl，CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg。术后第3天采用Morris水迷宫实验测试大鼠认知功能。然后处死大鼠取海马组织，采用Western blot法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、磷酸化CREB (p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平，采用RT-PCR法检测CaMKⅡ、CREB、BDNF的mRNA表达水平。 结果:与S组比较，C组、U组和K组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)；与C组比较，U组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达上调( P<0.05)，K组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与U组比较，K组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:U50488H减轻CPB致大鼠PND的机制与激活Ca 2＋-CaMKⅡ-CREB信号通路有关。

目的:探讨受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)介导的程序性坏死在糖尿病因素取消大鼠七氟烷后处理心肌保护效应中的作用。方法:取糖尿病造模成功的大鼠80只，4~5周龄，体重90~100 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷后处理组(SP组)、七氟烷后处理+RIPK3抑制剂GSK-872组(GSK组)。采用结扎左冠状动脉前降支40 min，再灌注120 min的方法制备糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。SP组于再灌开始时吸入2.4%七氟烷15 min；GSK组于术前24、2 h时腹腔注射GSK-872 3.3 mg/kg(溶于生理盐水)，其他操作同SP组。再灌注120 min时，取腹主动脉血样，检测血清LDH和CK-MB浓度；取心肌组织，TTC染色法确定心肌梗死面积百分比，免疫组化法检测RIPK3的表达，Western blot法检测RIPK3、磷酸化钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)、磷酸化混合谱系激酶结构域样假激酶(p-MLKL)的表达水平，透射电镜观察心肌超微结构。 结果:与Sham组比较，I/R组血清LDH和CK-MB浓度、心肌梗死面积百分比升高，心肌组织RIPK3、p-MLKL和p-CaMKⅡ表达上调( P<0.05)，心肌细胞损伤严重。与I/R组比较，SP组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。与SP组比较，GSK组血清LDH、CK-MB浓度和心肌梗死面积百分比降低，心肌组织RIPK3、p-MLKL和p-CaMKⅡ表达下调( P<0.05)，心肌细胞损伤程度减轻。 结论:糖尿病因素取消大鼠七氟烷后处理心肌保护效应的机制与其过度激活RIPK3介导的程序性坏死有关。

目的:评价艾司氯胺酮对发育期大鼠慢性应激后学习记忆功能及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)-钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型(CaMKⅡ)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:清洁级健康SD大鼠60只，雌雄不拘，7日龄，体质量10～15 g，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照＋生理盐水组(CN组)、慢性应激＋生理盐水组(NS组)和慢性应激＋艾司氯胺酮组(ES组)。采用慢性不可预知性应激方法建立慢性应激模型。应激刺激结束后，ES组腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg，NS组腹腔注射等容量生理盐水，连续7 d，1次/d。腹腔给药结束后，行Y迷宫实验和Morris水迷宫实验测定学习记忆功能；取静脉血样，采用ELISA法检测血清皮质醇和ROS浓度；随后麻醉断头取脑，分离海马组织，观察海马CA1区神经元病理学结果，采用Western blot法确定磷酸化NMDAR(p-NMDAR)/NMDAR、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)/CaMKⅡ、磷酸化CREB(p-CREB)/CREB表达水平的比值。 结果:与CN组比较，NS组新臂停留时间缩短，进入新臂次数减少，逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，血清皮质醇和ROS浓度升高，p-NMDAR/NMDAR比值、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值和p-CREB/CREB比值降低( P<0.05)，神经元发生明显病理学损伤；与NS组比较，ES组新臂停留时间延长，进入新臂次数增多，逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增多，血清皮质醇和ROS浓度下降，p-NMDAR/NMDAR比值、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值和p-CREB/CREB比值升高( P<0.05)，神经元病理学损伤减轻。 结论:艾司氯胺酮可改善发育期大鼠慢性应激后学习记忆功能，机制可能与降低氧化应激水平，增强海马NMDAR-CaMKⅡ-CREB信号通路活性有关。

目的:研究长链非编码RNA C2dat1在不同时期糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)大鼠肾脏中的表达变化以及其与肾间质纤维化的关系。方法:48只雄性SD大鼠，随机分为两组：对照组和DKD组，每组24只。对照组给予普通饲料喂养，DKD组给予高脂饲料喂养，自由饮水。喂食8周后，干预前禁食不禁水12 h，DKD组予一次性腹腔注射链脲佐菌素，对照组给予同等剂量的柠檬酸钠缓冲液。72 h后，连续3 d测定随机末梢血糖浓度≥16.7 mmol/L，尿糖定性为阳性，糖尿病模型成功。在3、6、9和12周采集大鼠尿液、血液和肾脏样本。采用全自动生化仪检测尿蛋白24 h排泄率、尿肌酐和血清总胆固醇；HE染色观察肾脏组织病理变化；免疫组织化学染色检测钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶2D(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ delta, CaMK2D)、p65、p50、α-SMA、E-cardherin相关蛋白质的表达；实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)检测lncRNA C2dat1和CaMK2D的表达；通过相关性分析，探究lncRNA C2dat1与α-SMA、E-cardherin和CaMK2D的关系。用高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2，干预后24、48、72 h收集细胞，qPCR检测lncRNA C2dat1及CaMK2D的表达。结果:与对照组大鼠比较，DKD组大鼠出现典型的多饮、多食，体重明显降低，血糖升高，尿蛋白24 h排泄率增加，尿肌酐降低，总胆固醇升高。HE染色结果显示，对照组大鼠肾小球结构完整，基底膜正常，未见系膜增生与炎症细胞浸润，而DKD组大鼠肾小球增大，基底膜均匀增厚。DKD组CaMK2D、p50、α-SMA表达高于对照组，E-cardherin表达低于对照组。DKD组lncRNA C2dat1和CaMK2D mRNA的表达高于对照组。在高糖诱导的HK-2细胞中，lncRNA C2dat1和CaMK2D的表达也高于对照组。相关性分析提示，lncRNA C2dat1与α-SMA和CaMK2D呈正相关，与E-cardherin呈负相关。结论:在DKD进展过程中，高表达的lncRNA C2dat1可能通过调节CaMK2D表达激活NF-κB信号通路促进糖尿病肾间质纤维化。