目的 探讨牛膝提取物含药血清对β淀粉样蛋白 1-42(amyloid β-protein1-42,Aβ1-42)诱导的神经元氧化应激和凋亡的影响及作用机制.方法 体外培养大鼠海马神经元,分为对照组,模型组(Aβ1-42 诱导神经元),牛膝低、中、高剂量组(15、30、45 μg/mL的牛膝提取物含药血清作用于Aβ1-42 诱导的神经元),si-ZBTB20-AS1 组[Aβ1-42 诱导转染锌指和BTB结构域蛋白 20 的反义RNA小干扰RNA的神经元]和si-NC组(Aβ1-42 诱导转染乱序无意义阴性序列的神经元).ELISA法检测超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,CCK-8 法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR法检测ZBTB20-AS1 表达水平,Western blot法检测细胞增殖抗原Ki67 和胱天蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Cas-pase-3)表达水平.结果 与对照组比较,模型组SOD含量、细胞存活率、Ki67 蛋白表达均降低(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1 表达、Caspase-3 蛋白表达均升高(P<0.05).与模型组比较,牛膝中、高剂量组SOD含量、细胞存活率、Ki67 蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3 蛋白表达均降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-ZBTB20-AS1 组SOD含量、细胞存活率、Ki67 蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1 表达、Caspase-3 蛋白表达均降低(P<0.05).结论 牛膝提取物含药血清可能通过下调ZBTB20-AS1 表达抑制Aβ1-42 诱导的海马神经元氧化应激和凋亡.

目的:评价血红素氧合酶-1 (HO-1)在七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:成年雄性C57BL/6J小鼠136只，体重20～25 g，6～8周龄，采用随机数字表法分为4组( n＝34)：假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)、脓毒症相关性脑病+七氟烷组(SAE+Sevo组)和脓毒症相关性脑病+七氟烷+HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ组(SAE+Sevo+ZnPPⅨ组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+Sevo组和SAE+Sevo+ZnPPⅨ组分别于造模成功后立即吸入2%七氟烷-33%氧气2 h，Sham组和SAE组吸入33%氧气2 h。SAE+Sevo+ZnPPⅨ组于造模前30 min时腹腔注射HO-1抑制剂ZnPPⅨ 25 mg/kg。于造模后6、12和24 h时处死6只小鼠，采用ELISA法检测皮层组织TNF-α、IL-1β、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和HO-1水平，采用Western blot法检测皮层组织HO-1表达。于造模后24 h时处死6只小鼠，采用TUNEL染色检测皮层细胞凋亡情况，计算细胞凋亡指数。每组取10只小鼠，分别于造模后3、5、7和14 d时行Y迷宫实验，计算自发交替百分比。 结果:与Sham组比较，SAE组、SAE+Sevo组及SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平、细胞凋亡指数、HO-1活性及其表达水平升高，自发交替百分比降低( P<0.05)。与SAE组比较，SAE+Sevo组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平和细胞凋亡指数降低，HO-1活性及其表达水平、自发交替百分比升高，SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β及HMGB1水平降低( P<0.05)，其余指标差异无统计学意义( P>0.05)。与SAE+Sevo组比较，SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平和细胞凋亡指数升高，HO-1活性及其表达水平、自发交替百分比降低( P<0.05)。 结论:七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病的机制与提高皮层组织HO-1活性，减轻炎症反应有关。

目的:比较沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦治疗慢性心功能不全患者的效果及对患者外周血单个核细胞（PBMCs）锌指蛋白A20和核因子-κB（NF-κB）的影响。方法:连续入选2019年2月至2020年1月济宁医学院附属医院收治的慢性心功能不全患者97例，按随机数字表法分为对照组（48例）和观察组（49例），两组均接受常规抗心力衰竭治疗，对照组加用缬沙坦胶囊，观察组加用沙库巴曲缬沙坦治疗，比较两组治疗前、治疗后3个月心功能指标的变化和超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）的变化；并提取PBMCs，检测锌指蛋白A20、NF-κB水平；统计两组不良反应发生情况，分析锌指蛋白A20、NF-κB与心肌损伤标志物NT-proBNP的相关性。结果:治疗后3个月，观察组心功能指标改善情况优于对照组，并且观察组hs-CRP、TNF-α、MMP-9、NT-proBNP水平低于对照组[（1.96 ± 0.57） mg/L比（2.87 ± 0.79） mg/L、（7.11 ± 1.46） μg/L比（8.24 ± 1.57） μg/L、（110.14 ± 10.63） μg/L比（129.52 ± 17.96） μg/L、（716.91 ± 105.78） ng/L比（965.25 ± 97.41） ng/L]，差异有统计学意义（ P<0.05）。治疗后3个月，观察组锌指蛋白A20、NF-κB水平低于对照组[（3.57 ± 1.13） %比（4.41 ± 1.32） %、（29.87 ± 6.58） ng/L比（35.71 ± 10.02） ng/L]，差异有统计学意义（ P<0.05）。慢性心功能不全患者A20、NF-κB与心肌损伤标志物NT-proBNP均呈正相关（ r = 0.487、0.738， P<0.01）。 结论:在常规治疗基础上加用沙库巴曲缬沙坦较缬沙坦更能提高慢性心功能不全患者心功能，减轻机体炎性反应，降低心肌损伤标志物NT-proBNP表达，抑制PBMCs NF-κB活化，降低锌指蛋白A20水平。

目的:探讨视网膜母细胞瘤相互作用锌指蛋白1(PRDM2)和c-Myc在垂体生长激素腺瘤发生、发展中的作用。方法:垂体腺瘤标本来自2013年7月至2016年12月首都医科大学附属北京天坛医院神经外科行手术治疗的70例垂体生长激素腺瘤患者，3例正常垂体组织标本来自遗体自愿捐献者。通过免疫组织化学染色方法检测肿瘤和正常垂体组织中PRDM2和c-Myc蛋白的水平。探讨肿瘤组织中PRDM2与c-Myc蛋白水平之间的关系，以及PRDM2和c-Myc蛋白与肿瘤侵袭能力、肿瘤体积的关系。体外培养大鼠垂体腺瘤GH3细胞株，设立对照组(空白细胞)、空载体组(转染空载体)和PRDM2组(转染PRDM2质粒)。通过细胞增殖实验检测PRDM2对细胞活力的影响；采用流式细胞术观察PRDM2对细胞凋亡的影响；行Transwell小室实验观察PRDM2对细胞侵袭能力的影响；采用蛋白质免疫印迹实验检测PRDM2对GH3细胞c-Myc表达水平的影响。结果:根据70例肿瘤标本的免疫组织化学染色评分中位数(PRDM2：40分，c-Myc：170分)分组，PRDM2低评分组(<40分)较PRDM2高评分组(≥40分)有更高的侵袭机会(19/35对比9/35, P＝0.015)和更大的肿瘤体积[(17.8±4.5)cm 3对比(5.2±0.9)cm 3, P<0.01]。c-Myc高评分组(≥170分)较c-Myc低评分组(<170分)有更高的侵袭机会(20/35对比8/35, P＝0.003)和更大的肿瘤体积[(15.5±3.5)cm 3对比(6.6±2.0)cm 3, P＝0.027]。70例肿瘤标本中的PRDM2与c-Myc水平呈负相关( r＝-0.407， P＝0.004)。GH3细胞转染24、48、72 h后，PRDM2组的细胞活力分别为对照组的(82.2±6.3)%、(68.5±5.2)%、(54.7±3.6)%(均 P<0.05)；而空载体组与对照组的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。流式细胞术检测结果显示，转染24 h后，PRDM2组膜联蛋白V(Annexin Ⅴ)染色阳性细胞和碘化丙啶(PI)染色阳性细胞所占的比率分别为(14.66±3.72)%和(6.21±2.17)%，均高于对照组[分别为(3.35±1.03)%和(1.34±0.48)%，均 P<0.05]；而空载体组Annexin Ⅴ阳性细胞和PI阳性细胞所占比率与对照组间的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。Transwell小室实验结果显示，PRDM2组透膜细胞数量为(145±37)个，低于对照组[(415±76)个]( P<0.01)。蛋白质免疫印迹实验显示，转染PRDM2质粒72 h后，PRDM2组的c-Myc水平为对照组的(0.32±0.12)倍( P<0.01)。 结论:PRDM2和c-Myc均参与垂体生长激素腺瘤的发生、发展；在GH3细胞中PRDM2可抑制c-Myc的表达，具有抑制细胞增殖和侵袭的作用。

目的:探讨N6-甲基腺苷(m6A)修饰与非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结转移的相关性。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载NSCLC患者的转录组测序数据，共包含1 037例原发肺癌组织样本和108例癌旁组织样本。分析参与m6A修饰过程的调控蛋白在肿瘤组织和癌旁正常组织样本中表达水平的差异，利用加权基因共表达分析(WGCNA)算法识别与m6A调控因子存在共表达关系的信使RNA(mRNA)和非编码RNA(ncRNA)并根据RNA的表达模式对NSCLC患者进行共识聚类。采用 t检验比较聚类亚组间m6A甲基化丰度的差异，采用 χ2检验比较组间淋巴结转移发生率的差异。 结果:共纳入20个m6A调控因子，肿瘤组织中15个调控因子的表达水平显著上调[甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、YTH结构域蛋白1(YTHDC1)、YTH结构域结合蛋白1-3(YTHDF1-3)、异质核核糖蛋白A2B1(HNRNPA2B1)和HNRNPC、ALK B同源物5(ALKBH5)等]，3个调控因子显著下调[M0ETTL14、含锌指CCCH结构域蛋白13(Zc3h13)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)]，差异有统计学意义( P<0.05)，YTHDC2和METTL16差异无统计学意义。通过WGCNA算法识别出454个与调控因子存在共表达关系的mRNAs和400个ncRNAs[325个长链非编码RNAs(lncRNAs)、23个微小RNAs(miRNAs)、28个核仁小RNAs(snoRNAs)、24个核内小RNAs(snRNAs)]。根据854个RNAs的表达模式进行共识聚类，将NSCLC患者分为2个聚类亚组(聚类1和聚类2)。WT1相关蛋白WTAP( t＝14.322， P<0.01)和HNRNPC( t＝15.424， P<0.01)等11个调控因子的表达水平在聚类1中均显著上调，其他9个调节因子在聚类亚组间差异无统计学意义，聚类1患者具有较高的m6A甲基化丰度。聚类1患者淋巴结转移发生率38.16%(292/765)明显高于聚类2组的22.27%(55/247)，差异有统计学意义( χ2＝19.487， P<0.01)。 结论:通过m6A甲基化与非小细胞肺癌淋巴结转移的相关分析，有助于探讨肺癌淋巴结转移相关机制。

目的:探讨神经胶质瘤相关基因同源蛋白1（GLI1）及超音刺猬蛋白（Shh）在卵巢型子宫内膜异位症（EM）恶变过程中的表达及其临床意义。方法:收集2000年4月—2018年4月在青岛大学附属医院及山东省威海市立医院行手术治疗的EM相关性卵巢上皮性癌（EAOC，即卵巢型EM恶变）患者50例（EAOC组），其年龄为（49±7）岁；另收集同期的卵巢异位子宫内膜非典型增生（aEM）患者35例（aEM组），其年龄为（44±9）岁，卵巢型EM患者50例（EM组），其年龄为（37±8）岁。实时荧光定量PCR技术及免疫组化EnVision二步法分别检测3组病变组织中GLI1、Shh mRNA和蛋白的表达，比较其在卵巢型EM恶变过程中的表达差异，分析GLI1与Shh表达的相关性，并分析GLI1及Shh表达与EAOC患者临床病理特征、预后的关系。结果:（1）实时荧光定量PCR技术检测显示，EM组、aEM组、EAOC组病变组织中GLI1 mRNA的表达水平分别为1.77±0.40、3.54±0.44、7.80±0.24，Shh mRNA的表达水平分别为0.95±0.21、3.14±0.35、5.41±0.31，EAOC组GLI1、Shh mRNA的表达水平均显著高于EM组、aEM组（ P均<0.01），EM组与aEM组分别比较，差异也均有统计学意义（ P均 <0.01）。免疫组化EnVision二步法检测显示，EM组、aEM组、EAOC组病变组织中，GLI1蛋白的高表达率分别为32%（16/50）、57%（20/35）及66%（33/50），Shh蛋白的高表达率分别为20%（10/50）、49%（17/35）、54%（27/50），3组分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.01）。EAOC组织中，GLI1 mRNA与Shh mRNA的表达呈显著正相关（ r=0.721， P<0.01），GLI1蛋白与Shh蛋白的表达也呈显著正相关（ r=0.608， P=0.001）。（2）GLI1蛋白表达与EAOC患者的血清癌抗原125（CA 125）水平、国际妇产科联盟（FIGO）分期、淋巴结转移状态、铂敏感性显著有关（ P均<0.05）；Shh蛋白表达与EAOC患者的FIGO分期、淋巴结转移状态均显著有关（ P均<0.05）。logistic回归模型多因素分析显示，FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、血清CA 125≥35 kU/L、GLI1蛋白高表达是影响EAOC患者预后的独立因素（ P均<0.05）。Kaplan-Meier法生存分析显示，在EAOC患者中，GLI1蛋白高表达、低表达患者的5年总生存率分别为12.1%、35.3%，两者比较，差异有统计学意义（ χ2 =10.73， P<0.01）；Shh蛋白高表达、低表达患者的5年总生存率为11.1%、30.4%，两者比较，差异有统计学意义（ χ2 =3.96， P=0.047）。 结论:GLI1及Shh均与卵巢型EM恶变相关，两者在促进卵巢型EM恶变方面可能有一定的作用，GLI1及Shh蛋白高表达提示EAOC患者的预后不良。

目的:分析B细胞淋巴瘤7A(BCL7A)在肝细胞癌中的表达以及与预后的关系，以及BCL7A表达对肝癌细胞侵袭、迁移的影响和机制。方法:前瞻性收集2017年11月至2018年3月于南通大学附属医院肝胆外科行根治性肝切除术的40例肝细胞癌患者的癌组织及癌旁组织用于提取蛋白质，其中男性29例，女性11例，年龄(58.5±10.4)岁。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载374例肝细胞癌和50例癌旁组织样本信息，肝癌细胞系Hep3B、SMMC-7721分别转染过表达BCL7A质粒及空载体质粒(阴性对照)。Western印迹和免疫组化检测BCL7A表达，Western印迹检测上皮间质转化相关蛋白表达(神经钙黏素、上皮钙黏素、锌指转录因子)。Transwell以及细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力。结果:TCGA中50例肝细胞癌患者(癌组织与癌旁组织匹配)，与癌旁组织相比，癌组织中BCL7A的mRNA相对表达显著升高，差异具有统计学意义( t＝13.38， P<0.001)。依据BCL7A mRNA表达水平的中位数将374例患者分为BCL7A高表达组( n＝187)和低表达组( n＝187)，BCL7A高表达患者术后累积生存率低于低表达组，差异有统计学意义( χ2＝6.95， P＝0.009)。Western印迹检测肝胆外科切除的手术标本，癌组织中BCL7A蛋白相对表达也高于癌旁组织。显微镜下(×20)，与对照组比较，肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的BCL7A过表达组侵袭的细胞数更多(153.7±1.3)个比(63.7±4.7)个、(307.7±25.1)个比(72.3±12.5)个，差异均具有统计学意义( t＝7.97、8.38，均 P＝0.001)。细胞划痕实验结果与Transwell侵袭检测结果一致。肝癌细胞BCL7A过表达组神经钙黏素、锌指转录因子表达高于对照组，上皮钙黏素低于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:肝细胞癌患者癌组织中BCL7A表达升高，并且与不良预后相关。BCL7A可能通过促进上皮间质转化促进肝癌细胞转移和侵袭能力。

目的:探究人牙槽窝肉芽组织的细胞组成与异质性并构建单细胞图谱，解析肉芽组织在炎性微环境下通过自然转归的潜在结局。方法:纳入2022年9月至2023年8月就诊于第四军医大学口腔医院颌面外科，因中、重度牙周炎行牙拔除术并拟行延期位点保存术或自体牙移植术的患者12例，收集其牙槽窝肉芽组织，分别用HE染色和单细胞转录组测序技术（ScRNA-seq）观察不同类型肉芽组织细胞构成、组织形态学变化，获得特定微环境下的炎性牙槽窝肉芽组织细胞序列差异，构建出人牙槽窝不同类型肉芽组织的单细胞图谱，并探索炎性肉芽组织转归过程中细胞类型分布及关键基因变化的时空规律。结果:HE染色显示，牙槽窝炎性肉芽组织中含有大量炎性细胞浸润，保留炎性肉芽组织待自然转归3周后，其组织学形态与修复性肉芽组织愈合形态基本一致。ScRNA-seq共捕获肉芽组织细胞20 448个，基因表达定量检测分析炎性肉芽组织、自然转归性肉芽组织及修复性肉芽组织基因总数分别为33 835、36 058、34 719个。肉芽组织在单细胞水平被注释为血管内皮细胞、间充质干细胞、成纤维细胞等10个细胞亚群。炎性肉芽组织与自然转归性肉芽组织在细胞组成占比存在差异。拟时序分析展示了肉芽组织中免疫反应与血管新生参与组织转归愈合的两种主要结局。参与炎症调控和免疫反应的基因胰岛素样生长因子结合蛋白 5（Igbp5）、锌指蛋白（Zfp36）和热休克蛋白（Hspa1b），以及参与细胞外基质分泌及血管、纤维形成的相关基因组织金属蛋白酶抑制因子3（Timp3）、骨膜蛋白（Postn）和G蛋白信号调节因子5（Rgs5）在两种肉芽组织中的表达存在显著差异。结论:炎性肉芽组织在细胞组成占比、基因表达、生物学功能等方面与自然转归性肉芽组织存在异质性，不刮除牙槽窝炎性肉芽组织待其自然转归后在组织学及单细胞水平展现出与修复性肉芽组织相似的细胞结构组成，并通过免疫反应及组织重塑调节炎症反应及愈合过程。

目的:观察锌指蛋白A20（A20）在慢性丙型肝炎患者肝脏组织中的表达和定位情况，并探讨其与瞬时肝弹性测定（FibroScan）、血清纤维化指标在肝脏纤维化分期中的关系。方法:对150例慢性丙型肝炎患者肝组织中的A20按照肝脏病理纤维化分期，行免疫组化定量检测，并检测FibroScan、血清纤维化指标（透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原），进行统计学分析。结果:肝组织A20表达、FibroScan、血清纤维化指标随肝脏病理纤维化加重而增加。肝脏纤维化各期前述指标与对照组之间差异有统计学意义（ P<0.05）；肝脏A20与FibroScan之间呈正相关， r=0.756（ P<0.05）。 结论:慢性丙型肝炎患者A20、FibroScan、血清纤维化指标与肝脏纤维化程度均呈正相关，A20与细胞外基质沉积致纤维化形成有一定关系。

目的:探索5-羟甲基糠醛(5-HMF)影响心血管发育的机制。方法:以10、25、50 μg/ml的5-HMF处理受精8 h后的AB系斑马鱼幼鱼，用E3溶液处理同胞幼鱼作为对照组，进行形态组织学观察，吖啶橙染色检测细胞凋亡，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测相关基因表达。用抗氧化剂N-乙酰-l-半胱氨酸(NAC)和Wnt信号通路激活剂(BML)处理幼鱼进行挽救实验，比较各组幼鱼心血管发育情况。数据比较采用单因素方差分析。结果:高浓度5-HMF处理组幼鱼心率、心包水肿程度、静脉窦-动脉球距、凋亡染色面积[(76.23±2.59)次/20 s、(65.83±3.12)%、(18.38±2.33) μm、(8 639.28±798.06)]均高于对照组[(14.39±3.41)次/20 s、(0.84±0.12)%、(14.39±0.76) μm、(1 420.84±359.34)]，差异有统计学意义( t＝9.312、8.590、11.784、9.786， P<0.05)。高浓度5-HMF处理组幼鱼心脏发育相关基因心脏特异性同源盒转录因子(nkx2.5)、T-框蛋白5(Tbx5)、锌指转录因子(gata4)和血管发育相关基因血管内皮生长因子A旁系同源基因(VEGF-A)的表达水平(0.48±0.06、0.34±0.04、0.64±0.08、0.78±0.13)均低于对照组(1.00±0.12、1.00±0.17、1.00±0.13、1.00±0.18)，差异有统计学意义( t＝5.624、4.439、5.804、6.872， P<0.05)。而凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)和p53的表达水平(2.56±0.36、3.65±0.48)均高于对照组(1.00±0.18、1.00±0.13)，差异有统计学意义( t＝7.283、6.392， P<0.05)。NAC和BML可以挽救5-HMF引起的表型异常。 结论:高浓度5-HMF提高了斑马鱼幼鱼活性氧水平，抑制Wnt信号通路的转导，最终导致斑马鱼幼鱼心血管发育异常。