目的:探讨沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ（ NMⅡ）基因的骨髓间充质干细胞（BMMSC）对内毒素/脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠肺细胞外基质（ECM）和肺纤维化的影响。 方法:采用实验研究方法。取4只1周龄雄性SD大鼠股骨和胫骨骨髓腔细胞并经流式细胞术鉴定为BMMSC。取第3代BMMSC用于后续实验。取细胞，分为用含 NMⅡ基因的小干扰RNA序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro质粒转染的沉默NMⅡ组，转染空载质粒的空载组及未进行任何处理的空白对照组，采用蛋白质印迹法检测干预后72 h的NMⅡ的蛋白表达（样本数为3）。取细胞，于倒置相差显微镜下观察形态；另取细胞，用氯甲基苯甲酰胺（CM-DiⅠ）标记，于倒置荧光显微镜下观察体外细胞标记情况。取20只4周龄雄性SD大鼠，按随机数字表法分为空白对照组、单纯ALI组、ALI+BMMSC组及ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组，每组5只大鼠。对空白对照组不进行任何处理，其余3组大鼠均给予LPS诱导ALI。造模后即刻，单纯ALI组大鼠经尾静脉注射1 mL生理盐水，ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠分别经尾静脉注入1 mL 1×10 7个/mL CM-DiⅠ标记的BMMSC、 NMⅡ基因沉默的BMMSC，空白对照组大鼠于相同时间点通过尾静脉注射1 mL生理盐水。干预后24 h，取肺组织于倒置荧光显微镜下观察BMMSC肺内归巢情况。干预后24 h、1周、2周，取肺组织行苏木精-伊红染色观察肺部炎症情况，行Masson染色观察肺纤维化程度并采用改良Ashcroft评分法对干预后2周肺纤维化程度进行评分（样本数为5）。采用免疫组织化学法检测干预后2周α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9的含量（样本数均为3），采用酶联免疫吸附测定法检测干预后24 h超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛、髓过氧化物酶（MPO）活性（样本数均为3），采用免疫荧光染色法检测干预后1周CD11b和含表皮生长因子样模块黏蛋白样激素受体1（EMR1）蛋白表达（样本数均为3）。对数据行单因素方差分析、Bonferroni法及Kruskal-Wallis H检验。 结果:干预后72 h，沉默NMⅡ组细胞NMⅡ蛋白表达水平显著低于空白对照组和空载组（ P值均<0.01）。BMMSC呈长梭形，簇状生长形如旋涡；CM-DiⅠ体外成功标记BMMSC。干预后24 h，ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺内细胞归巢现象较ALI+BMMSC组更明显，而空白对照组和单纯ALI组大鼠肺内未见CM-DiⅠ标记的细胞。空白对照组大鼠干预后各时间点肺组织中均未见明显炎症细胞浸润，ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠干预后24 h肺组织炎症细胞浸润较单纯ALI组明显减少，且2组大鼠干预后1、2周肺泡壁变薄，局部肺组织有少量淤血。干预后1、2周，单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较空白对照组明显加重，但ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较单纯ALI组显著改善。干预后2周，单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分分别为（2.36±0.22）、（1.62±0.16）、（1.06±0.26）分，均明显高于空白对照组的（0.30±0.21）分（ P<0.01），ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分均明显低于单纯ALI组（ P<0.01），ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分明显低于ALI+BMMSC组（ P<0.01）。干预后2周，与单纯ALI组比较，ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织α-SMA含量均显著下降（ P<0.05或 P<0.01）。4组大鼠肺组织MMP-2含量均相近（ P>0.05）。与空白对照组比较，单纯ALI组大鼠肺组织MMP-9含量显著升高（ P<0.01）；与单纯ALI组比较，ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MMP-9含量均显著降低（ P<0.01）。干预后24 h，与空白对照组比较，单纯ALI组、ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛、SOD、MPO活性均显著升高（ P<0.01）；与单纯ALI组比较，ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛活性显著升高（ P<0.05），ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性均显著升高（ P<0.01）；与ALI+BMMSC组比较，ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性显著降低（ P<0.01）。与单纯ALI组比较，ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MPO活性均显著降低（ P<0.01）；与ALI+BMMSC组比较，ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MPO活性显著降低（ P<0.01）。干预后1周，与其他3组比较，ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织CD11b蛋白表达显著增加（ P<0.05或 P<0.01）；4组大鼠肺组织EMR1蛋白表达均相近（ P>0.05）。 结论:移植沉默 NMⅡ基因的BMMSC能更明显改善LPS所致ALI大鼠肺组织ECM成分的活性，重塑其完整性，增强其抗氧化能力，减轻肺损伤和肺纤维化。

目的 探究发酵小麦胚芽提取物主要活性成分2,6-二甲氧基-1,4-苯醌(DMQ)抑制NLRP3炎症小体活化并缓解小鼠感染性休克的作用机制.方法 细胞学水平:在BMDM细胞中,经脂多糖(LPS)预处理、DMQ干预后,利用尼日利亚菌素(Nigericin)、ATP、尿酸钠结晶(MSU)分别活化经典NLRP3炎症小体以及胞内转染LPS活化非经典NLRP3炎症小体.利用聚脱氧腺苷酸(Poly A:T)活化AIM2炎症小体.在THP-1细胞中,利用Nigericin活化经典NLRP3炎症小体,通过Western blotting和ELISA方法测定NLRP3炎症小体活化产物的表达水平.蛋白分子水平:利用免疫共沉淀探究DMQ阻断NLRP3炎症小体活化的具体机制.动物水平:将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、感染性休克LPS组、DMQ 20 mg/kg治疗组、DMQ 40 mg/kg治疗组,6只/组,待DMQ治疗组小鼠预注射相应浓度DMQ后,对照组小鼠注射无菌PBS,其余3组小鼠腹腔注射相同剂量LPS,利用ELISA检测DMQ干预对LPS诱导的小鼠感染性休克模型中血清和腹腔灌洗液中TNF-α和IL-1β分泌水平的影响.DMQ预处理后注射LPS观察记录小鼠36 h内的生存状态并绘制生存曲线.结果 DMQ可有效抑制小鼠BMDM细胞和人THP-1细胞中经典NLRP3炎症小体活化(P<0.05),在小鼠BMDM细胞中对非经典NLRP3炎症小体活化也起到有效抑制作用(P<0.05),DMQ对AIM2炎症小体活化无影响(P>0.05).进一步实验结果揭示DMQ可阻断ASC和NLRP3之间的相互作用.DMQ治疗组可显著降低小鼠血清和腹腔液中IL-1β的分泌水平(P<0.05)并延长小鼠生存时间(P<0.05).结论 发酵小麦胚芽提取物主要活性成分DMQ通过阻断ASC和NLRP3之间的相互作用有效抑制NLRP3炎症小体活化并缓解LPS诱导的小鼠感染性休克.

油莎豆是莎草科植物油莎草Cyperus esculentus L.的块茎,在非洲地中海沿岸已有上千年的食用与药用历史.现代研究发现油莎豆含有萜类、脂肪酸、酚酸、多糖、甾醇等多种化学成分,具有抗氧化、预防和治疗心血管疾病、缓解神经系统疾病、改善生殖功能障碍、保肝、抗癌等多种药理作用.通过对油莎豆的化学成分及其药理作用进行全面阐述,系统归纳了油莎豆发挥药理作用的物质基础,旨在为油莎豆质量评价体系的建立和进一步研究提供理论依据,进而提高其综合利用价值.

目的:寻找与柴胡解表退热功效相关的生物活性指标,并探明此功效的生物活性量化值与柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d(SSd)含量是否具有相关性.方法:采用临床煎药方式获得柴胡水煎液,并通过醇沉去除多糖和蛋白质等大分子物质,得到适宜体外实验的柴胡提取物.从抗炎、抗过敏、抗氧化应激及解热这4类与柴胡解表退热功效相关的体外模型中筛选量效关系明确的生物活性指标,并赋予各项指标不同的权重系数,对7个柴胡样品在各项指标上的作用强弱进行排序打分;分数与相应指标权重的积为该项得分;每项得分之和为该样品解表退热之生物活性量化值;采用CCK-8法检测细胞活力;Griss法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平;ELISA法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及补体活化水平;铁离子还原能力法(FRAP)测定总抗氧化能力;高效液相色谱法测定柴胡中的SSa和SSd含量.结果:筛选得到4项关联柴胡解表退热功效的量效关系明确的生物活性指标,分别为脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO、LPS诱导THP-1细胞分泌TNF-α、总抗氧化能力及酵母多糖介导的替代途径补体活化.相关性分析显示,7个样品的SSa和SSd总量与解表退热的生物活性量化值不相关.结论:柴胡解表退热可能与其抑制促炎因子(NO)生成、压制内生性致热原(TNF-α)生成、抗氧化及抗补体C5a活化有关,而《中华人民共和国药典》2020年版柴胡指标性成分SSa和SSd可能并非柴胡该功效的物质基础.

铁皮石斛Dendrobii Officinalis Caulis是我国传统的名贵中药,具有益胃生津、滋阴清热等功效,其活性成分能够缓解、治疗及调节多种疾病,具有很高的开发价值.铁皮石斛主要活性成分包括多糖、生物碱、黄酮类化合物、酚类和氨基酸类等,目前铁皮石斛的相关研究已明确了其活性化合物的结构及传统记载功效.通过对铁皮石斛中不同活性成分种类对肝脏的保护与作用机制进行总结,初步分析了铁皮石斛多糖和其他活性成分保肝功能的构效关系.为铁皮石斛在植物医学和现代药物的应用提供依据,为铁皮石斛的进一步开发利用提供参考.

目的 研究消炎止痛膏对脂多糖诱导的C2C12肌管的作用机制.方法 体外培养C2C12细胞,用2％马血清诱导分化C2C12为成熟肌管,设置空白组、模型组、双氯芬酸钠组、消炎止痛膏组.非空白组加入不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),探究LPS对C2C12的最佳致炎浓度和作用时间,复制体外骨骼肌炎症细胞最佳模型;探究消炎止痛膏和双氯芬酸钠对C2C12肌管炎症模型的最佳干预浓度.采用CCK-8测定细胞活性,ELISA检测加入消炎止痛膏后LPS诱导的C2C12中IL-1β和IL-6浓度,SOD和MDA含量.结果 ①分化实验:经2％马血清诱导,C2C12第4～5d分化明显,肌管形成,第9～10 d达高峰.②C2C12炎症模型:在1 μg/mLLPS作用24h后C2C12炎症反应最明显,且CCK-8显示细胞活性无明显改变.③药物浓度:消炎止痛膏溶液1.25 mg/mL、双氯芬酸钠溶液6.25 μg/mL作用24h下C2C12炎症反应最轻,且CCK-8显示细胞活性无明显改变.④机制:与模型组比较,1.25 mg/mL消炎止痛膏显著抑制LPS诱导的C2C 12肌管细胞IL-1β(P=0.006)和MDA水平(P=0.002),提高SOD水平(P=0.0001);与双氯芬酸钠组比较,1.25 mg/mL消炎止痛膏抑制LPS诱导的C2C12肌管细胞IL-1β水平无显著性差异(P=0.188),但提高SOD(P=0.0001)和抑制MDA水平(P=0.014)有显著性差异.结论 消炎止痛膏成分可降低LPS诱导的C2C 12肌管炎症模型IL-1β、IL-6和MDA水平,提高SOD水平,可能与减轻组织炎症反应、降低机体氧化应激损害有关.

目的 通过茯苓三萜对小鼠腹水瘤抑瘤的药效学研究,以及利用HPLC-LTQ-Orbitrap法对茯苓三萜部位进行化学成分进行检测和鉴定,在此二者的基础上运用非标记定蛋白质组学技术,挖掘茯苓三萜对小鼠腹水瘤抑瘤潜在的作用机制.方法 采用溶剂法提取茯苓三萜部位,利用HPLC-LTQ-Orbitrap液质联用仪对茯苓三萜部位进行各主要成分检测和鉴定;将小鼠随机分为模型组(model group)、茯苓三萜组(terpene group)、阳性对照组(香菇多糖组),连续给药21天后,建立H22腹水瘤小鼠模型,继续给药1周后,观察各用药组对H22腹水瘤小鼠的腹水量、脾脏指数、胸腺指数、肝脏指数、血清中TNF-Alpha、IL-2的含量的影响;然后提取小鼠腹水中H22细胞,应用非标记(lable-free)定量蛋白质组学技术检测模型组小鼠和茯苓三萜组小鼠中H22细胞蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质(Differentially expressed proteins,DEPs);利用GO、KEGG等分析对差异蛋白进行生物信息学分析;采用RT-qPCR对差异蛋白编码基因在mRNA水平进行定量验证.结果 小鼠茯苓三萜组的腹水量明显低于模型组(P<0.05);小鼠茯苓三萜组的胸腺指数与模型组相比,明显升高(P<0.05);小鼠茯苓三萜组血清中TNF-α的含量对比模型组有极显著性差异(P<0.01),小鼠茯苓三萜组血清中IL-2的含量对比模型组有极显著性差异(P<0.01).通过对茯苓三萜部位化学成分图谱的分析,共鉴定出19个三萜类化合物,主要结构类型有四种.茯苓三萜组与模型组比较共发现188个差异表达蛋白,其中有86个差异蛋白表达上调,102个差异蛋白表达下调;GO数据库分析显示茯苓三萜组与模型组差异表达蛋白主要参与了调控白细胞介素-1的产生(Regulation of interleukin-1 production)、花生四烯酸分泌(Arachidonic acid secretion)、自噬(Autophagy)等生物过程;KEGG数据库分析显示茯苓三萜组对比模型组差异表达蛋白参与和肿瘤关系密切的信号通路,主要有MAPK、Apoptosis、mTOR、Wnt和p53通路等;采用RT-qPCR对7个代表性差异蛋白的编码基因进行mRNA水平的验证.结论 通过药效学研究发现茯苓三萜对H22腹水瘤小鼠有抑瘤作用,然后通过蛋白组学发现茯苓三萜组腹水H22细胞蛋白对比模型组发生了明显的改变,研究从而表明茯苓三萜对于小鼠腹水瘤的抑瘤作用机制主要涉及到细胞凋亡、炎症反应及免疫过程.

茯苓为经典药食同源中药,有利水渗湿、益脾和胃、宁心安神等功效,素有"十方九茯苓"之称.茯苓中含有多糖、三萜、甾体等化学成分类群,其中多糖和三萜是主要有效成分群.现代研究表明,茯苓多糖和茯苓三萜具有抗肿瘤、调节免疫、抗氧化等药理活性.茯苓多糖和三萜在传统的煎煮过程溶出率均较低,且茯苓多糖口服吸收率较低的情况下,茯苓依然展现了非常好的活性,提示茯苓多糖和三萜的高活性,因此本文针对茯苓多糖和茯苓三萜类成分的提取分离、结构鉴定、含量测定、结构修饰、生物合成、药理活性和潜在的产品开发价值等方面进行系统综述,以期为茯苓大健康产业的发展提供文献参考.

背景:游泳运动是膝骨关节炎重要的非药物治疗手段,可以有效缓解膝骨关节炎,但目前游泳运动对老年膝骨关节炎的影响和机制尚不明确.目的:探讨游泳运动对老年膝骨关节炎小鼠关节软骨的影响.方法:将6只3月龄雄性C57BL/6小鼠作为年轻组,将12只18月龄雄性C57BL/6小鼠随机分为老年组和游泳组,每组6只.游泳组小鼠进行1周的适应性游泳和8周的正式游泳运动.干预结束后,对各组小鼠进行步幅分析和取材.通过血常规检测外周血白细胞和淋巴细胞总数;苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色法观察软骨形态;软骨细胞计数和改良Mankin's评分评估关节软骨损伤程度;免疫组织化学染色和RT-qPCR法检测关节软骨中Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖和基质金属蛋白酶13的蛋白和mRNA表达.结果与结论:①与年轻组相比,老年组小鼠步幅明显下降(P＜0.05),外周血白细胞和淋巴细胞计数均明显升高(P＜0.05),关节软骨表面不平整、软骨细胞异常、蛋白多糖丢失,软骨细胞计数显著下降(P＜0.05),改良Mankin's评分明显升高(P＜0.05),Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的蛋白和mRNA表达减少(P＜0.05)、基质金属蛋白酶13的表达增加(P＜0.05).②与老年组相比,游泳组小鼠步幅明显上升(P＜0.05),外周血的淋巴细胞计数明显下降(P＜0.05),关节软骨表面较平整、软骨细胞较正常、蛋白多糖丢失较少,软骨细胞计数显著升高(P＜0.05),改良Mankin's评分明显下降(P＜0.05),Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的蛋白和mRNA表达增加(P＜0.05)、基质金属蛋白酶13的表达减少(P＜0.05).③结果说明,游泳运动可减少老年小鼠的血中炎性细胞,改善关节软骨细胞、基质成分及软骨组织形态,对老年膝骨关节炎小鼠软骨具有保护效应.

目的 对四君子汤非多糖组分的主要活性成分进行人源肠、肝微粒体中的代谢过程研究,明确其在肠、肝中的代谢轮廓及代谢差异,为其临床应用提供科学证据.方法 应用Acquity UPLC Ⅰ-class/VVION IMS QTOF技术分析四君子汤非多糖组分中主要活性成分(异甘草苷、甘草素、甘草酸、甘草次酸、人参皂苷Rbi、人参皂苷CK、白术内酯m)在人源肠、肝微粒体孵育体系下的代谢产物以及代谢转化途径.结果 甘草酸、甘草次酸在人源肠、肝微粒体中均以Ⅰ相代谢为主;而甘草素、异甘草苷、人参皂苷Rb1、人参皂苷CK则以肠Ⅱ相代谢为主.白术内酯Ⅲ在肠、肝微粒体中代谢均不显著,而四君子汤非多糖功效组分中其他化合物在肠微粒体中代谢速度均比在肝微粒体中更快.此外,甘草皂苷、人参皂苷主要进行脱糖基反应;异甘草苷以脱糖、羟基化等反应为主;甘草素则以葡萄糖醛酸结合为主;白术内酯Ⅲ则主要发生水解、羟基化反应.结论 阐明了四君子汤非多糖组分中主要活性成分在人体肠道及肝脏中的代谢轮廓及代谢差异,为后续进行四君子汤非多糖功效组分的药效研究提供了数据支持,也为中药复方的功效组分研究提供了思路和策略.