目的 基于液质联用(LC-MS)和模拟炮制初探诃子汤制狼毒大戟的减毒机制.方法 采用LC-MS分析狼毒大戟诃子汤制前后和狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制后的化学成分变化;小鼠分别灌胃给予狼毒大戟生品乙醇提取物、狼毒大戟水制品乙醇提取物、诃子汤乙醇提取物、狼毒大戟诃子汤制品乙醇提取物、狼毒大戟生品二氯甲烷提取物、狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷提取物、狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制提取物,以粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平以及肠道病理损伤情况评价诃子汤制狼毒大戟和诃子汤模拟炮制狼毒大戟生品二氯甲烷部位的毒性变化.结果 狼毒大戟中共鉴定出 115 种化合物,诃子汤中共鉴定出 53 种化合物.狼毒大戟经诃子汤炮制后有 58 种化合物的含量显著降低,12 种化合物的含量显著升高.与空白对照组相比,狼毒大戟生品组及其水制品组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著升高(P<0.01),肠道损伤明显.与狼毒大戟生品组相比,诃子汤组和狼毒大戟诃子汤制品组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著降低(P<0.01),肠道损伤得到修复.狼毒大戟生品二氯甲烷部位经诃子汤模拟炮制后,二萜类化合物和鞣质酚酸类化合物的离子强度变化率分别为-6.75%～8.09%和 66.06%～100.00%.狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷部位二萜类化合物的离子强度变化率为-9.92%～54.72%,无鞣质酚酸类化合物.与空白对照组相比,狼毒大戟生品二氯甲烷部位组和狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷部位组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著升高(P<0.01),肠道损伤严重.与狼毒大戟生品二氯甲烷部位组相比,狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平显著降低(P<0.01),肠道未见明显损伤.结论 诃子汤制能缓和狼毒大戟肠道毒性,其减毒机制可能是狼毒大戟在炮制过程中引入的诃子汤中大量的鞣质酚酸类化合物在动物体内起到了药理拮抗作用.

为探究狼毒(月腺大戟)诃子汤制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性,在整体动物模型水平灌胃给药,以小鼠的粪便含水量,肠道不同部位炎症因子及病理损伤情况为指标,比较月腺大戟生品二氯甲烷提取部位(二氯部位)、诃子汤制品二氯部位与模拟诃子汤制月腺大戟二氯部位的肠道毒性作用差异,考察诃子汤制对月腺大戟肠道毒性的影响.同时构建月腺大戟和诃子成分结构数据库,采用HPLC-TOF-MS分析这 3 个提取部位的二萜类成分与鞣质酚酸类成分组成变化.采用HPLC测定炮制前后月腺大戟饮片和炮制后锅壁残留物中的 4 种主要二萜类成分ent-11α-hydroxyabicta-8(14)、13(15)-dien-16,12-olide(HAO)、jolkinolide B(JNB)、fischeria A(FA)、jolkinolide E(JNE)的含量,考察诃子汤炮制是否对二萜类成分的含量与结构产生影响.结果表明,月腺大戟生品二氯部位组可显著增加小鼠的粪便含水量和各肠段炎症因子TNF-α和IL-1β释放水平,且发现肠道组织受损并伴随明显炎症细胞浸润,而与生品二氯部位组比较,模拟诃子汤制月腺大戟二氯部位组肠道组织损伤减轻,炎症细胞浸润减少,肠道毒性显著下降.质谱分析结果显示月腺大戟二氯部位模拟诃子汤制后二萜类成分含量无明显差异,但新增了大量来源于诃子的鞣质酚酸类等成分.HPLC结果显示,月腺大戟诃子汤炮制后 4 种萜类成分含量有不同程度下降,下降幅度在-0.35%～-19.74%,下降部分主要残留于锅壁,表明诃子汤制并未改变月腺大戟中毒性二萜类成分的结构.诃子汤中鞣质酚酸类成分拮抗作用是月腺大戟诃子汤炮制后肠道毒性下降的主要原因,民族药诃子汤炮制狼毒具有科学性.

目的:研究绒毛灯笼花Agapetes lacei var.tomentella Airy-Shaw的化学成分及其抗疟原虫活性.方法:采用硅胶、MCI、RP18 以及Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶等多种色谱方法,对绒毛灯笼花干燥块根 75%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构.采用鼠疟模型探讨绒毛灯笼花及部分单体成分的抗疟原虫活性.结果:从绒毛灯笼花中分离纯化得到 12 个化合物,分别鉴定为:(-)-表儿茶素(1)、(2R,3R)-3,5,6,7,3′,4′-hexahydroxyflavane(2)、(6a R,12a R)-5,5-dimethyl-7,12a-dihydro-6aH-isochromeno[4,3-b]chromene-2,3,8,10-tetrol(3)、epicatechin-(4β→1″,2→O→2″)-phloroglucinol(4)、epicatechin-(6′→6)-epicatechin(5)、epicatechin-(6′→8)-epicatechin(6)、epicatechin-(2β→O→7,4β→8)-ent-epicatechin(7)、dehydrodiepicatechin A(8)、桂皮鞣质B1(9)、3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,2-丙二醇(10)、香草酸(11)、丁香酸(12).活性研究结果显示,绒毛灯笼花块根 75%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位活性较好,抑制率达 32.24%;化合物 1、7、8 显示一定的抗疟原虫活性,抑制率分别达到 16.58%、32.79%、30.59%.结论:所得化合物均为首次从树萝卜属植物中分离得到,绒毛灯笼花具有一定的抗疟活性,其抗疟活性应与酚性成分密切相关.

目的 筛选余甘子鞣质调控巨噬细胞极化的活性部位,探讨其调控巨噬细胞极化的主要化学成分和作用机制.方法 采用CCK-8细胞增殖实验检测细胞活力;荧光定量PCR(qPCR)检测M2巨噬细胞标志物Arg-1、CD206、TNF-αmRNA表达水平以筛选有效部位;UPLC-Q-Exactive-MS/MS 表征其化学成分.利用 SwissADME 和 SwissTargetPrediction数据库筛选活性成分并获取其对应靶点,与GEO数据库中筛选的M1-M2型巨噬细胞差异基因取交集,运用Cytoscape3.7.2软件绘制"药物成分-潜在靶点"网络图,并在STRING数据库进行蛋白互作关系分析,并进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.结果 基于体外巨噬细胞极化模型,发现余甘子鞣质20％甲醇洗脱部位可显著抑制M2巨噬细胞标志物Arg-1和CD206mRNA的表达,升高M1巨噬细胞标志物TNF-αmRNA的表达(P＜0.001),且活性明显强于其他洗脱部位.通过比对余甘子糅质与20％甲醇洗脱部位UPLC-MS总离子流图,鉴定出20％甲醇洗脱部位中化学成分29个,筛选出有效成分11个,对应靶点94个,药物-巨噬细胞相关交集靶点37个;KEGG富集分析结果显示,余甘子糅质20％甲醇洗脱部位调控巨噬细胞极化相关靶点主要为HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、NF-kappaB信号通路等,涉及有机物的反应、对含氧化合物的反应、对化学刺激的细胞反应等显著相关生物过程.结论 本研究基于巨噬细胞极化模型筛选出余甘子鞣质中调控巨噬细胞极化的主要活性部位,借助网络药理学初步证明了余甘子鞣质20％甲醇洗脱部位可以多成分、多靶点、多通路共同调控巨噬细胞极化,为进一步阐明余甘子鞣质调控巨噬细胞极化的药效物质和作用机制提供依据.

石榴为石榴科石榴属植物,其果皮、种子、花、叶、根均可入药,在我国有着悠久的药用历史.石榴主要化学成分包括鞣质类、黄酮类、萜类、生物碱类、酚酸类、花青素类、脂肪酸类等,具有抗氧化、降血糖、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种药理作用.本文对石榴各药用部位的化学成分和药理作用进行综述,以期为其进一步研究和开发利用提供参考.

目的 研究民族药隔山消提取物的神经氨酸酶(NA)抑制活性及活性部位的化学成分,并通过分子对接技术和NA抑制实验进一步探究其活性成分的NA抑制作用.方法 隔山消经石油醚渗漉、乙醇提取、醋酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位,采用荧光法测定4个提取部位NA抑制活性.应用UPLC-Q-Exactive技术快速归属和鉴定最佳活性部位中的化学成分;利用MOE 2014软件,以NA为靶点,对该活性部位中7个主要成分进行分子对接;再通过荧光法测定该7个成分的NA抑制活性.结果 隔山消醋酸乙酯部位NA抑制活性最佳,半数抑制浓度(IC5o)为137.31 μg/mL;高分辨质谱鉴定了该部位21个化学成分,包括酚酸类3个、黄酮类2个、鞣质类16个,其中7个化学成分经与对照品比对而准确鉴定,13个化合物在该植物中首次报道;分子对接实验表明五没食子酰葡萄糖、鞣花酸、原儿茶酸对接效果较好,进一步NA抑制验证实验表明7个化合物均有NA抑制活性,其中鞣花酸和五没食子酰葡萄糖效果最好,IC50分别为426.67、440.28 μmol/L.结论 隔山消提取物具有NA抑制活性,鞣花酸和五没食子酰葡萄糖为其主要活性成分.

目的:研究余甘子鞣质部位主要药效成分在人工模拟胃、肠液中的稳定性,为余甘子体内代谢研究提供依据.方法:采用人工模拟胃液、肠液,体外温孵,HPLC-UV法测定余甘子鞣质部位中主要药效成分的含量变化情况;分别考察余甘子鞣质部位主要药效成分在人工胃肠液中的稳定性.结果:余甘子鞣质部位中主要药效成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在人工胃液中比较稳定,含量变化不明显,降解剩余量在100％左右波动,半衰期大于90 h;在人工肠液中不稳定,含量先增加后减少,降解剩余量在100-300％之间波动,半衰期大于10h.结论:余甘子鞣质部位主要药效成分在人工胃液中比较稳定,各成分含量变化不明显;余甘子鞣质部位主要药效成分在人工肠液中不稳定,主要成分含量先增加后减少,推测大分子可水解鞣质可以转化成小分子成分,但是随着时间延长所有成分均在降解.

石斛属Dendrobium Sw.是兰科重要的属之一,同具观赏价值与药用价值.石斛属植物的茎作为中药材石斛,已被广泛使用达千年,其主要有滋补、止痛、解热、抗炎等功效.近几十年来,国内外学者从40多种石斛属植物的药用部位中分离鉴定出约100种化合物,包括多糖、生物碱、黄酮、酚、萜、氨基酸、香豆素、鞣质、甾醇、微量元素等类化合物.综述近10多年从石斛中发现的化学成分及其在增强免疫、缓解糖尿病及其并发症、抑制肿瘤、抗氧化、延缓衰老、护肝、抗炎、保护神经系统、保护心血管、改善肠胃功能、抗血管生成、改善过敏性皮肤炎体征、缓解疲劳、抗血小板凝集等方面的药理作用,并提出了下一步研究的重点方向.

以玉米叶为研究对象,采用系统预试法对玉米叶的水、95％乙醇、石油醚等部位进行研究,对各部位含有的化学成分进行定性检测.采用GC-MS法对玉米叶挥发油成分进行分离和鉴定,并采用面积归一化法计算各组分的相对含量.结果表明,玉米叶中可能含有氨基酸、多肽、蛋白质、糖、多糖、鞣质、有机酸、生物碱、苷类、黄酮类、酚类、植物甾醇、三萜类、挥发油、油脂、皂苷等化学成分.从玉米叶挥发油中分离出84个组分,鉴定出其中的50个组分,占挥发油总含量的83.06％,其中主要成分为:植醇(29.73％);6,10,14-三甲基-2-植酮(23.76％);4-(2,6,6-三甲基-1-环己烯基)-3-丁烯-2-酮(3.77％);棕榈酸(3.2％);金合欢基丙酮(2.60％);十五醛(2.41％);香叶基丙酮(1.55％);顺式-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯(1.32％)等.本实验初步了解了玉米叶的化学成分及其挥发油成分,为玉米叶的进一步开发利用提供了理论依据.

目的:研究鸡血藤总鞣质的化学成分,并分析该有效部位对宫颈癌细胞HeLa的药效与作用机制,为鸡血藤抗宫颈癌提供实验依据.方法:运用UPLC-Q-TOF/MS对鸡血藤鞣质类化学成分进行定性分析.将不同质量浓度的鸡血藤总鞣质作用于宫颈癌细胞HeLa,通过3维(3D)微流控芯片筛选合适的给药浓度及时间.运用流式细胞仪测定鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa周期与凋亡的影响,分别应用FlowJo v10.0.7及ModFit LT 3.2软件进行分析.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)与半胱天冬酶-3(Caspase-3)因子的含量变化.结果:鉴定并推断了鸡血藤总鞣质中15种成分.最终确定鸡血藤总鞣质低、中、高给药质量浓度分别为0.5,1.0,2.0 g·L-1,36 h为最佳给药时间.经鸡血藤总鞣质作用后宫颈癌细胞HeLa早凋与晚凋比例明显增加,宫颈癌细胞HeLa DNA合成前期(G0/G1期)明显增加,DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2/M期)减小.经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中VEGF-A因子显著降低,Caspase-3因子显著增加.结论:鸡血藤中含有丰富的鞣质类成分,此类成分对宫颈癌细胞HeLa有明显的抑制其增殖并促进其凋亡的作用,为该有效部位的后续研究与开发提供了实验依据.