目的:建立一种基于高效液相色谱串联质谱技术的测定大鼠血浆中伐地那非浓度的方法，并评估其可行性。方法:采集正常Sprague-Dawley大鼠血浆样本。采用Phenomenex Synergi Polar-RP 80 A色谱柱（2.0 mm×50 mm，4 μm），柱温30 ℃，流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液，流速为0.4 ml/min；质谱采用API 4000Qtrap三重四极杆质谱仪的正离子多反应监测模式监测，伐地那非和内标监测离子质荷比分别为489.3（Q1通道）/151.2（Q3通道）和466.4（Q1通道）/234.2（Q3通道）；西沙必利为内标，检测大鼠血浆中添加的伐地那非浓度。然后评估该方法检测伐地那非浓度的专属性、线性及定量范围、精密度和准确度、基质效应、稳定性。结果:在选定的色谱和质谱条件下，伐地那非和内标的保留时间分别为2.62和2.80 min，峰形良好。该方法在0.2~200 ng/ml浓度范围内线性良好。该方法检测伐地那非的批内精密度（%CV）和准确度（%DEV）分别在1.5%~9.7%和-6.8%~6.6%之间。批间精密度和准确度分别在3.1%~8.4%和-3.7%~4.6%之间。均在要求的范围内。本样品处理方法，伐地那非的提取回收率在88.2%~104.6%之间，符合提取回收率的考察要求。该样品处理方法，伐地那非各质控浓度经内标归一化的基质效应因子（MF）分别为1.04、0.85、1.04，变异系数（%CV）在1.7%~10.7%之间，符合基质效应的考察要求。伐地那非的短期稳定性、长期稳定性、4次冻融循环稳定性的偏差都在±15%以内，变异系数均在5%以内。结论:本研究建立的高效液相色谱串联质谱法特异性好、准确性高，可用于检测大鼠血浆伐地那非浓度。

液相色谱-串联质谱技术在检验医学领域正在快速应用与发展，从高分辨质谱促进生物标志物的高效筛选，到三重四极杆质谱助力验证生物标志物对疾病的诊断与疗效监测，其应用贯穿于组学研究到实验诊断的不同领域与环节，逐渐成为疾病研究与诊断的一种不可或缺的技术手段。目前大部分液相色谱串联质谱平台处于医学研究阶段，临床推广与应用还存在一些挑战。

运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术及超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)对小柴胡颗粒化学成分及大鼠口服后的入血成分进行鉴定.采用CORTECS UPLC C18+色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据后与对照品比较保留时间、精确相对分子质量、二级离子碎片以及参照相关文献进行化学成分鉴别;通过皮下注射干酵母建立大鼠发热模型后,灌胃给予正常组及模型组大鼠小柴胡颗粒,给药后于不同时间点眼眶静脉取血,分离血浆,在多反应监测模式(MRM)下进行扫描鉴定入血成分.从小柴胡颗粒中共初步鉴定出112种化学成分,包括63种黄酮类、31种皂苷类、6种有机酸类、4种苯丙素类、3种氨基酸类以及5种其他类化合物;从血浆中鉴定得到18个入血原型成分.该研究鉴定了小柴胡颗粒化学成分及入血成分,为进一步的药效物质基础及质量控制研究奠定了基础.

目的:建立专属的鉴别蝉蜕真伪方法,对蝉蜕及其制剂进行质量评价.方法:采用超高效液相色谱(UPLC)-质谱(MS)串联法,以Shimadzu Scepter C18(2.1 mm×100.0 mm,1.9 μm)为色谱柱;以乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱.采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),进行多反应监测(MRM),选择特征肽[质荷比(m/z):493.77]特征峰作为检测离子,对蝉蜕药材及其制剂进行测定.结果:30批蝉蜕药材、30批蝉蜕提取物、5批成方制剂均能检出特征肽(m/z:493.77)色谱峰.震旦马蝉、螗蝉属、僚蝉、蟪蛄、鸣鸣蝉均未检出相应的色谱峰.结论:该方法能快速准确鉴别蝉蜕药材及其制剂,可为蝉蜕质量评价和基础研究提供参考.

目的 建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分.方法 以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)联用技术,建立一种针对20种花青素类成分的定量方法,并利用该法对10批市售欧洲越橘提取物中的花青素类成分含量进行研究.采用DPPH自由基清除法和总抗氧化能力测试法评价不同欧洲越橘提取物的抗氧化能力.结果 方法学验证结果显示,20种花青素类成分线性良好,r为0.999 4～1.000 0,精密度RSD为0.05％～4.23％,稳定性RSD为0.29％～3.38％,平均加样回收率为98.1％～102.1％,RSD为0.50％～4.12％.样品分析结果显示,不同样品中部分花青素类成分含量存在显著差异,其中锦葵素变化最大,RSD为18.23％.欧洲越橘提取物具有较好的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力.其中矢车菊素与DPPH自由基率相关性为0.94,芍药素-3-O-半乳糖苷与总抗氧化活性相关性为0.93.二者有望作为欧洲越橘提取物清除DPPH自由基活性和总抗氧化活性的潜在质控成分.结论 基于UPLC-QQQ-MS/MS所建立的对照品非依赖性的欧洲越橘提取物中20种花青素类成分定量分析方法,灵敏度高,准确性好,方法简单,适用于欧洲越橘提取物中20种花青素类成分的含量测定,为中药对照提取物替代单体对照品在中药质量控制中的应用提供了数据支撑,为中药材质量控制研究提供新的研究思路.

背景 精神分裂症是一种常见的重性精神障碍,其发病机制复杂,目前关于精神分裂症外周血清和尿液犬尿氨酸(KYN)代谢物相关性的研究有限.目的 分析精神分裂症患者外周血清和尿液色氨酸(TRP)-KYN代谢物与白细胞介素-6(IL-6)的浓度以及血清与尿液KYN代谢物的相关性以及代谢物水平与临床症状的相关性,以期为探索精神分裂症的潜在生物标志物提供参考.方法 纳入2021年12月—2022年12月在杭州市第七人民医院住院治疗或门诊就诊的、符合《精神障碍诊断与统计手册(第5版)》(DSM-5)精神分裂症诊断标准的38例患者为研究对象,同期在杭州市社区招募健康对照组共26例.采用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者的精神病性症状,采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱技术检测所有受试者血清和尿液TRP、KYN、犬尿喹啉酸(KYNA)、喹啉酸(QUIN)、吡啶甲酸(PIC)、黄尿酸和5-羟色胺(5-HT)水平,采用酶联免疫分析检测血清和尿液IL-6水平.采用Pearson相关分析考查精神分裂症患者血清与尿液TRP-KYN代谢物之间的相关性以及代谢物水平与临床症状的相关性.结果 精神分裂症患者血清IL-6水平高于健康对照组,差异有统计学意义(U=798.500,P<0.01).精神分裂症患者尿液PIC水平低于健康对照组,差异有统计学意义(U=253.000,P=0.013).精神分裂症患者血清KYN水平与尿液QUIN/KYNA、QUIN/PIC均呈正相关(r=0.562、0.438,P均<0.05).精神分裂症患者血清5-HT/KYN与PANSS总评分和阴性症状分量表评分均呈正相关(r=0.458、0.455,P均<0.01).结论 精神分裂症患者血清TRP-KYN代谢物水平与尿液中神经毒性代谢物比值有关,并与阴性症状严重程度呈正相关.

目的 建立鉴别山苦荬的化学成分以及7种成分(绿原酸、木犀草素、槲皮素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸A、木犀草苷)的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术对山苦荬的化学成分进行鉴定,采用高效液相色谱串联三重四极杆质谱技术测定山苦荬中绿原酸等7种成分的含量.结果 从山苦荬药材中共鉴别出45个成分,包括20个有机酸类成分、13个黄酮类成分、4个脂肪酸类成分、4个氨基酸成分、3个核苷类成分和1个香豆素类成分.绿原酸、木犀草素、槲皮素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸A、木犀草苷检测质量浓度的线性范围分别为503.00～25 150.00、42.00～2 100.00、5.05～252.50、20.05～1 002.50、25.10～1 255.00、750.00～37 500.00、196.00～9 800.00 ng/mL(r≥0.999 2),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3.00%(n=6),平均加样回收率为96.72%～105.84%(RSD均小于4.00%,n=6).3批山苦荬中绿原酸等7种成分的含量范围分别为1 145.77～3 261.25、23.75～97.90、0.92～2.12、1.06～23.18、9.35～21.85、833.25～1 045.58、199.56～1 869.78 μg/g.结论 本研究所建立的鉴别和定量方法快速、简便,可用于山苦荬药材化学成分的鉴别和绿原酸等7种成分的含量测定.

探讨黄精不同炮制品(黑豆黄精、炆黄精)干预阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠尿液代谢产物的影响.将 60 只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组、黑豆黄精组、炆黄精组,每组 12 只,各组进行腹腔注射D-半乳糖(100 mg·kg-1),假手术组腹腔注射等容积生理盐水.1 次/d,持续给药 7 周.D-半乳糖注射 3 周后,进行双侧海马Aβ25-35 注射进行造模.第 2 周开始灌胃给药,模型组与假手术组同体积的双蒸水,其余组给予对应的药物(10 mL·kg-1),1 次/d,连续灌胃 35 d.观察各组大鼠记忆行为学以及海马组织病理学.利用超高效液相色谱-串联三重四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)技术对尿液进行非靶向代谢物检测,并结合主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)处理数据以筛选差异代谢物、潜在生物标志物,并进行代谢通路富集分析.结果表明,AD大鼠经过黑豆黄精、炆黄精治疗后新物体识别指数升高,Morris水迷宫实验中逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加.苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色结果,给药组海马组织细胞排列紧密,海马组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量显著降低(P<0.01),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)相对降低,其中黑豆黄精组更为明显,具显著性差异(P<0.05).经过筛选处理,得到潜在生物标志物 15 个,代谢物主要涉及2 条代谢通路:双香豆素作用途径、吡罗昔康作用途径.因此,黑豆黄精、炆黄精对AD具有干预缓解作用,其作用机制可能与双香豆素代谢、吡罗昔康代谢有关.

目的 通过高效液相色谱-串联质谱和分子网络整合技术联合应用的快速分析方法分别鉴定川黄柏与关黄柏中的化学成分.方法 采用Agilent C18色谱柱(100 mm×4.5 mm,1.8μm),流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱.通过三重四极杆-飞行时间串联质谱检测数据,根据MS/MS碎片模式的相似性创建分子网络,在正离子模式下,将拥有相似结构的分子簇运用MSDIAL软件筛选出来.最后结合保留时间信息、高分辨质谱精确相对分子质量和MS/MS碎片信息,并根据相关文献和分子网络进行比对,分别对川黄柏、关黄柏中化学成分进行快速准确鉴定.结果 在川黄柏、关黄柏中共鉴定出22种化学成分,并通过质谱的积分面积确定了两者的相对峰面积比例为2.08:1.通过分子网络分析发现川黄柏中存在很多响应较低的未被鉴定出的生物碱类成分,而木兰花碱同系物多出现于关黄柏中,并且关黄柏中的巴马汀的离子响应较川黄柏更高.结论 该方法可为关黄柏、川黄柏的质量控制、基准物质以及药效物质研究提供参考,同时也可用于两者化学成分的快速定性分析.

目的 研究白术Atractylodes macrocephala多糖对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的影响,探讨白术多糖干预UC的代谢途径及可能的作用机制.方法 采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导小鼠UC模型,给予白术多糖或美沙拉嗪干预后,测定小鼠体质量、疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分及结肠长度;采用ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MOP)活性;采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;采用超高效液相色谱-串联三重四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)检测小鼠血清内源性代谢物水平,并结合主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析对差异代谢物进行表征,筛选出潜在的差异代谢物;采用MetaboAnalyst5.0网址分析可能的代谢通路.结果 白术多糖显著改善UC小鼠的症状和结肠组织病理损伤,提高血清中IL-10水平和SOD活性(P＜0.05、0.01),降低TNF-α水平和MPO活性(P＜0.05、0.01),并通过α-亚麻酸代谢通路、类固醇激素生物合成通路、初级胆汁酸生物合成通路、甘油磷脂代谢、泛酸和辅酶A生物合成通路、不饱和脂肪酸生物合成通路等代谢途径回调UC小鼠的异常代谢产物.结论 白术多糖具有防治UC的作用,其机制可能与平衡促炎因子与抗炎因子、增强抗氧化和调节脂质代谢等通路相关.