目的 建立18个品种苦荞麦Fagopyrum tataricum指纹图谱,并以芦丁为内标物,采用一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)同时检测苦荞麦中葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素含量,以期对不同产地苦荞麦进行质量控制.方法 采用超高效液相-三重四级杆液质联用技术(UPLC-QQQ-MS/MS),首次以一级全扫(Full-MS)和多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)2种采集模式相结合的方式建立UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱共有模式,采用夹角余弦法进行相似度评价.以ThermoFisher AccucoreTMC18色谱柱(100mm×3.0mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液,体积流量0.3 mL/min,柱温30 ℃,梯度洗脱.以芦丁作为内标物,建立苦荞中其他6种指标成分的相对校正因子(fs/x),从而计算各待测成分的量,并将QAMS计算值与外标法(external standard method,ESM)实测值进行比较,以验证QAMS的准确性和方法适宜性.运用聚类分析、主成分分析、加权分析等化学计量学分析手段建立苦荞麦综合质量优劣评价方法.结果 建立了苦荞麦的UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱,在Full-MS扫描模式下标定了 15个共有峰,各品种间相似度在0.399～0.973;同时以MRM扫描模式结合对照品对其中芦丁等7种指标成分进行了峰指认.以芦丁为内标物,与葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素6种有效成分的建立的fs/x重现性良好,分别为0.283、1.338、0.654、1.162、8.509、0.709.且采用QAMS测定的18个品种苦荞麦中7种指标成分含量与ESM的实测值之间无显著性差异(P＞0.05).化学计量学分析结果表明,芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷和山柰酚是影响苦荞麦质量的主要潜在标志物,质量排序相对靠前的苦荞麦产区主要集中在海拔高、光照强、昼夜温差大的中国西南地区,而指纹图谱相似度差异较明显的荞杂2号、综甜2号和通荞1号排在后3位.结论 所建立的指纹图谱结合QAMS简便可行,结果准确,化学计量学分析方法全面客观,可为苦荞麦品质评价和质量控制提供参考和依据.

目的 建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分.方法 以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)联用技术,建立一种针对20种花青素类成分的定量方法,并利用该法对10批市售欧洲越橘提取物中的花青素类成分含量进行研究.采用DPPH自由基清除法和总抗氧化能力测试法评价不同欧洲越橘提取物的抗氧化能力.结果 方法学验证结果显示,20种花青素类成分线性良好,r为0.999 4～1.000 0,精密度RSD为0.05％～4.23％,稳定性RSD为0.29％～3.38％,平均加样回收率为98.1％～102.1％,RSD为0.50％～4.12％.样品分析结果显示,不同样品中部分花青素类成分含量存在显著差异,其中锦葵素变化最大,RSD为18.23％.欧洲越橘提取物具有较好的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力.其中矢车菊素与DPPH自由基率相关性为0.94,芍药素-3-O-半乳糖苷与总抗氧化活性相关性为0.93.二者有望作为欧洲越橘提取物清除DPPH自由基活性和总抗氧化活性的潜在质控成分.结论 基于UPLC-QQQ-MS/MS所建立的对照品非依赖性的欧洲越橘提取物中20种花青素类成分定量分析方法,灵敏度高,准确性好,方法简单,适用于欧洲越橘提取物中20种花青素类成分的含量测定,为中药对照提取物替代单体对照品在中药质量控制中的应用提供了数据支撑,为中药材质量控制研究提供新的研究思路.

同时检测黄花蒿Artemisia annua中多个化合物,以对黄花蒿的品质进行多角度评价.建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)同时检测黄花蒿中紫穗槐-4,11-二烯、青蒿醛、双氢青蒿酸、青蒿酸、青蒿素B、青蒿烯和青蒿素7个青蒿素类相关化合物的方法,并对黄花蒿不同组织部位(根、茎、叶和侧枝)中这7个化合物含量进行差异比较,检测其在黄花蒿中的累积情况.采集生长盛期4月龄黄花蒿的根、茎、叶和侧枝,检测黄花蒿不同组织部位7个青蒿素类相关化合物的含量.采用UPLC-QQQ-MS/MS的多反应监测(MRM)采集模式,大气压力化学离子源(APCI)正离子模式,色谱柱为Eclipse Plus RRHD C18(2.1 mm×50 mm,1.8 μm),流动相为含甲酸(0.1％)-甲酸铵(5 mmol·L-1)水溶液(A)和甲醇(B),梯度洗脱(0～8 min,55％～100％B;8～11 min,100％B;平衡 3 min).流速 0.6 mL·min-1,柱温 40 ℃,进样量 5 μL,检测时间 8 min.通过方法学考察,建立了基于UPLC-QQQ-MS/MS同时定量检测青蒿素生物合成途径中7个代表性化合物含量的方法.对黄花蒿根、茎、叶和侧枝的含量比较分析结果表明:黄花蒿中青蒿素含量高于青蒿素B,且青蒿素和双氢青蒿酸在黄花蒿各部位的含量相对较高;7个化合物在各部位的含量存在较大差异,均在叶片中最高,且青蒿烯和青蒿醛在根中未检测到.该研究建立了基于UPLC-QQQ-MS/MS同时检测青蒿素生物合成途径上7个代表性化合物的定量方法,准确、灵敏且高效,可用于黄花蒿中青蒿素类相关化合物的含量测定、新品种选育和中药材质量控制等.

目的 对天王补心丸质量分析中发现的异常成分进行研究,建立薄层色谱(TLC)、超高效液相色谱—三重四极杆质谱(UPLC-QQQ-MS)同时测定天王补心丸中盐酸小檗碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀等4种外源性污染成分的分析方法.方法 采用TLC法,通过优化展开系统,对158批样品进行定性鉴别;针对异常斑点,采用HPLC-Q/TOF-MS进行成分鉴定确认;采用UPLC-QQQ-MS进行定量分析.结果 158批天王补心丸样品中有9批检出盐酸小檗碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀等4种外源性污染成分,分别在0.97～483.34、0.98～98.49、1.00～100.50、0.88～87.75 ng·mL-1内呈线性,回收率为99.30％～103.99％,平均标准偏差(RSD)为0.90％～2.62％(n=6),9批样品中上述4种成分的含量分别为20.3～104.1、1.0～17.6、0.4～30.6、3.2～24.8μg·g-1.结论 该方法简便、准确、专属性强,可为天王补心丸的质量控制提供参考.

目的:探究何首乌中成分含量随生长年限和采收季节的变化规律.方法:建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ-MS/MS),测定德庆地区何首乌药材中 14 个成分反式-2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(trans-THSG)、顺式-THSG(cis-THSG)、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-(2"-O-阿魏酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷含量.结果:建立了准确可靠的UPLC-QQQ-MS/MS测定何首乌中 14 个成分含量的方法;随生长年限的增加,何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类、酚类化合物含量多降低;随采收季节的变化,二苯乙烯苷类、黄酮类、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷成分多春季含量最高、秋季含量最低,酚类化合物多夏季含量最高、春秋含量低.结论:成分的含量与何首乌药材生长年限及采收季节密切相关,其中采收季节变化较为明显;以trans-THSG、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷作为潜在肝毒性物质,cis-THSG作为有效成分,秋季为何首乌的适宜采收期,与《中华人民共和国药典》2020 年版规定相符.

目的 建立同时测定肋柱花药材中 5 种活性成分含量的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法.方法 色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18 柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm),流动相为甲醇-含 5 mmol/L甲酸铵的 0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min,柱温为 30℃,进样量为 5 μL;离子源为电喷雾电离(ESI),电离模式为ESI-(木犀草素、芒果苷)和ESI+(异荭草苷、獐牙菜苦苷、当药黄素),多反应监测(MRM)模式,喷雾电压为 3 500V(正离子模式)和 3 000V(负离子模式),雾化温度为 300℃.采用SIMCA 14.1软件进行主成分分析.结果 木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素的质量浓度分别在0.4041～12.9312 mg/L、0.392 2～12.550 4 mg/L、0.283 8～9.081 6 mg/L、0.305 5～9.776 0 mg/L、0.356 7～11.414 4 mg/L范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.999 0);检测限分别为 0.521 0,1.319 8,0.813 3,1.219 4,2.083 0 μg/L,定量限分别为 1.510 9,3.931 2,2.709 6,4.024 1,6.736 5 μg/L;精密度、稳定性、重复性试验结果的 RSD 均小于 3.5%(n = 6);加样回收率分别为 94.83%,92.30%,100.47%,95.13%,95.53%,RSD分别为 1.49%,2.50%,0.92%,0.91%,1.48%(n = 6).12 批不同产地的药材样品中 5 种活性成分的总含量为39.85～67.82 mg/g,獐牙菜苦苷的含量最多(33.87～61.44 mg/g).主成分分析结果显示,第一主成分、第二主成分的方差贡献率分别为 36.30%和 31.70%,筛选出的主要贡献成分为木犀草素(0.623 0)、獐牙菜苦苷(0.520 5)和芒果苷(0.753 3).结论 该方法操作简便、专属性强、结果准确、灵敏度高,可用于肋柱花药材中活性成分的定量分析,木犀草素、獐牙菜苦苷、芒果苷可作为肋柱花药材的质量控制标志物.

采用超声提取方法,利用液质联用仪建立快速的黄秋葵黄酮类物质提取检测方法,使其能应用于黄秋葵相关产品的品质检测.选定黄芩素、柚皮素、槲皮素、黄芩苷和芦丁这五种黄酮类物质,确定液相色谱、质谱条件和检测线性范围等,从而确定黄秋葵荚果黄酮类物质的提取检测方法.色谱条件:色谱柱为华谱unitary C18(2.1 mm× 150 mm,5 μm);流动相:A为乙腈,B为含0.1%甲酸的水;洗脱梯度:80%B~60%B(0~4 min),60%B(4~10 min),60%B~55%B(10 ~12 min),5%B(12.1~18 min),5%B~80%B(18~20 min),80%B(20.1~25 min).质谱条件:毛细管电压为4000 V,气体温度为330 ℃,气体流速为12 L· min-1,喷雾器压力为275.8 kPa.优化得到黄芩素、柚皮素、槲皮素、黄芩苷和芦丁这五个标样的裂解能量为34、22、30、18、34 eV;五个标样在11 min内完全分离,线性范围为0.5~400 μg·L-1,线性相关系数均大于0.99.黄秋葵荚果采用超声波法提取黄酮(75% 的乙醇,1 : 10的料液比,超声75 min),通过实验得到整个提取检测过程中黄芩素、柚皮素、槲皮素、黄芩苷和芦丁的回收率分别为(93.65 ± 3.66)%、(98.79 ± 204)%、(100.66 ± 1.83)%、(87.23 ± 6.61)%、(101.91 ± 0.61)%,并对黄秋葵果荚中这5种黄酮物质的含量进行了测定.该方法重复性好、灵敏度高、专一性强,为黄秋葵黄酮类物质的研究提供了实验基础.

目的:建立阿胶中驴皮源成分的鉴别方法.方法:通过序列比对发现理论的驴皮特征肽,并利用纳升液相色谱-高分辨质谱进行确证阿胶特征肽GPTGEPGKPGDK.利用胰蛋白酶对阿胶样品进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS)对阿胶的专属性特征肽段进行检测.色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～3 min,96％A;3～8 min,96％A→92％A;8～10 min,92％A→50％A;10～12 min,50％A;12～12.1 min,50％A→96％A;12.1～15 min,96％A),流速0.3 mL· min-1,柱温40℃,进样量5 μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择阿胶特征分子离子峰m/z 380.71→374.82,m/z 380.71→493.56作为检测离子对.结果:10批阿胶样品均检出驴皮特征肽.结论:所建立的方法专属性强,可用于阿胶中驴皮源成分的鉴别.

目的 建立超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ-MS)同时测定片仔癀(牛黄、麝香、三七等)中三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、牛磺酸、牛磺胆酸、胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、麝香酮的含有量.方法 该药物甲醇提取液的分析采用Waters CORTECS UP-LC C18色谱柱(100mm×2.1 mm,1.6 μm);流动相乙腈-水(含0.1％甲酸),梯度洗脱;柱温40℃;体积流量0.25 mL/min.结果 13种成分在各自范围内线性关系良好(r＞0.998 5),平均加样回收率91.1％～105.3％,RSD2.4％ ～4.6％.结论 该方法准确、简便、灵敏、重复性好,可用于片仔癀的质量控制.

目的:发现马皮特征肽,建立阿胶中马皮源成分专属性的检测方法.方法:采用序列比对技术发现理论马皮胶原蛋白特征肽,利用胰蛋白酶酶切马皮胶样品,通过纳升液相-高分辨质谱确证了马皮特征肽GASGPAGVR.利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ/MS)对马皮特征肽进行检测.色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～3 min,96％A;3～8 min,96％A→92％A;8～10 min,92％A→50％A;10～12 min,50％A;12～12.1min,50％A→96％A;12.1～15 min,96％A),流速0.3 mL·min-1,柱温40℃,进样量5 μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择马皮特征肽特征分子离子峰m/z 386.25→499.25,m/z 386.25→556.51作为检测离子对.结果:在马皮胶样品中检出了马皮特征肽,在阿胶、牛皮胶、猪皮胶、羊皮胶样品中均未检出马皮特征肽.该方法的检出限度为1％马皮胶的阿胶样品.对10批阿胶样品进行检测,在2批样品中检出了马皮特征肽.结论:所建立的方法经验证,专属性强,可用于阿胶中马皮源成分的检测.