运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术及超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)对小柴胡颗粒化学成分及大鼠口服后的入血成分进行鉴定.采用CORTECS UPLC C18+色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据后与对照品比较保留时间、精确相对分子质量、二级离子碎片以及参照相关文献进行化学成分鉴别;通过皮下注射干酵母建立大鼠发热模型后,灌胃给予正常组及模型组大鼠小柴胡颗粒,给药后于不同时间点眼眶静脉取血,分离血浆,在多反应监测模式(MRM)下进行扫描鉴定入血成分.从小柴胡颗粒中共初步鉴定出112种化学成分,包括63种黄酮类、31种皂苷类、6种有机酸类、4种苯丙素类、3种氨基酸类以及5种其他类化合物;从血浆中鉴定得到18个入血原型成分.该研究鉴定了小柴胡颗粒化学成分及入血成分,为进一步的药效物质基础及质量控制研究奠定了基础.

目的:建立超高效液相色谱法同时测定小儿金翘颗粒中绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、甘草苷、苦参碱、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、连翘苷、甘草酸铵、靛玉红10种成分含量的方法。方法:色谱柱为ACQUITY UPLCTMC18柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速0.2 ml/min；检测波长250 nm；柱温30 ℃；进样量2 μl。结果:绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、甘草苷、苦参碱、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、连翘苷、甘草酸铵、靛玉红的线性范围分别为0.789 5~15.793 4 μg ( r=0.999 6)、0.571 8~11.445 6 μg( r=0.999 4)、0.110 7~2.214 7 μg( r=0.999 3)、0.047 5~0.950 5 μg( r=0.999 2)、0.269 8~5.395 8 μg( r=0.999 7)、0.085 1~1.703 9 μg( r=0.999 5)、0.105 7~2.113 0 μg( r=0.999 4)、0.065 6~1.312 1 μg( r=0.999 3)、0.080 5~1.611 2 μg( r=0.999 5)、0.057 7~1.153 3 μg( r=0.999 4)；定量限分别为8.322、9.023、9.857、4.583、6.872、7.844、8.643、5.895、7.568、5.251 μg/ml；平均加样回收率分别为99.11%、98.87%、97.83%、98.10%、98.17%、98.30%、98.10%、98.14%、97.99%、98.02% ( RSD<2.0%)；精密度、重复性、稳定性试验的 RSD<2.0%。 结论:所建立的多成分含量测定方法快捷、准确、重复性好，可用于小儿金翘颗粒的质量控制。

运用高效液相色谱(HPLC)法比较柴胡-白芍单味、药对配方颗粒与传统汤剂的主要有效成分变化,建立利血平拮抗急性抑郁模型探讨药对合煎与单煎合并的抗抑郁作用差异.采用COSMOSIL5C18-MS-Ⅱ柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相;体积流量1.0mL/min;柱温30℃;进样量10 μL;采用双波长(210、230 nm)检测.酶联免疫吸附剂实验及对相关组织进行HE、Nissl染色分析不同剂型对小鼠抑郁效果的影响.结果表明,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷和氧化芍药苷的含量在柴胡-白芍单味配方颗粒混溶中低于柴胡-白芍药对配方颗粒与传统汤剂;柴胡-白芍单味配方颗粒混溶组、柴胡-白芍药对配方颗粒组和传统汤剂组均能使小鼠脑内5-羟色胺、多巴胺水平明显提高(P＜0.05,P＜0.01);血清中白细胞介素-6、白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),抗炎因子白细胞介素-10显著升高(P＜0.05,P＜0.01);肝组织中超氧化物歧化酶不同程度地升高,丙二醛显著降低(P＜0.05,P＜0.01).HPLC检测方法重复性好,稳定可靠.通过抑制炎症和缓解氧化应激,柴胡-白芍药对配方颗粒与传统汤剂较柴胡-白芍单味配方颗粒混溶改善抑郁症状显著.

目的 建立UPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b1、b2.方法 使用Acquity UPLC BHE C18 色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相:水-乙腈,梯度洗脱;检测波长:254 nm;体积流量:0.3 mL/min;柱温:30℃;进样量3 μL.结果 柴胡皂苷b1、b2 线性范围分别为 0.006～0.374 mg、0.003～0.214 mg,平均回收率分别为 98.97%、99.35%,RSD值分别为 1.82%、1.16%.结论 所建立方法准确、稳定,重现性好,可用于小柴胡颗粒的质量控制和评价.

目的 探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D,SSD)联合替莫唑胺(temozolomide,TMZ)对神经胶质瘤细胞(glioblasto-ma,GBM)的协同增敏作用及分子机制.方法 CCK-8法结合HE染色分析RG-2、U251、LN-428 3种GBM细胞系对SSD、TMZ敏感性差异并筛选最佳配伍浓度.通过克隆形成实验、HE染色结合Hoechst荧光染色检测联合给药对GBM细胞增殖影响.单丹磺酰胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察GBM细胞自噬小体形成.Western blot结合ICC法检测内质网应激相关因子及凋亡、自噬蛋白表达与分布变化.结果 GBM细胞对TMZ敏感性顺序为RG-2＞U251＞LN-428.SSD联合TMZ给药结果显示出对GBM细胞系增殖的协同抑制作用,并经细胞克隆形成实验证实.与TMZ组相比,Hoechst荧光染色显示联合给药组细胞核亮染数目明显增加.MDC荧光染色发现SSD/TMZ组胞质出现致密浓染绿色颗粒,且较TMZ组相比明显增多.Western blot结果显示,较TMZ组相比,SSD/TMZ组内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP、p-PERK、ATF6 表达增高(P＜0.05);凋亡蛋白 caspase-12、caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax 及自噬蛋白LC3、Beclin-1表达均明显增高(P＜0.05)并经ICC实验验证.结论 SSD可协同TMZ抑制GBM细胞增殖且诱导其发生凋亡与自噬,通过激活内质网应激途径提高GBM细胞对TMZ化疗敏感性.

目的 基于Wnt/β-catenin信号通路探讨双术抗纤方(黄芪、麸炒白术、柴胡、醋莪术、丹参、荔枝核)改善四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的作用及机制.方法 采用皮下注射 3.0 mL·kg-1 质量分数为 40%的CCl4 复制肝纤维化大鼠模型,每周注射 2 次,共注射 8 周.将SD大鼠随机分为空白对照组(8 只)、模型组(7 只)、阳性对照组(7 只,灌胃 43.19 mg·kg-1 水飞蓟宾)、中药低剂量组(6 只,灌胃 4.3 g·kg-1 双术抗纤方颗粒)、中药中剂量组(6 只,灌胃 8.6 g·kg-1 双术抗纤方颗粒)、中药高剂量组(7 只,灌胃 17.2 g·kg-1 双术抗纤方颗粒);每日 1 次,连续灌胃给药 4 周,除空白对照组外,余各组在给药同时继续皮下注射CCl4.采用HE、Masson染色法观察肝脏组织病理变化;ELISA法检测血清Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;Western Blot法检测肝脏组织Wnt1、β-catenin、PPAR-γ蛋白表达水平;qPCR法检测肝脏组织Wnt1、β-catenin、PPAR-γ mRNA表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠肝脏出现肝细胞部分坏死,正常的肝小叶结构被破坏,肝细胞索排列紊乱,中央静脉或汇管区增大,炎症细胞大量浸润,形成桥接坏死;肝脏中央静脉或汇管区胶原纤维增生明显,形成纤维间隔,纤维化评分明显升高(P＜0.05);血清Col Ⅳ、PCⅢ、HA、LN水平明显升高(P＜0.05);肝脏组织Wnt1、β-catenin蛋白及mRNA表达水平明显升高(P＜0.05),PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).与模型组比较,阳性对照组以及中药中、高剂量组大鼠肝细胞脂肪变性情况有所改善,坏死、炎性细胞浸润减少;肝脏纤维化程度有所改善,肝脏胶原纤维减少,纤维化评分明显降低(P＜0.05);血清ColⅣ、PCⅢ、HA、LN水平明显降低(P＜0.05);肝脏组织Wnt1、β-catenin蛋白及mRNA表达水平明显降低(P＜0.05),PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).结论 双术抗纤方有抗CCl4 诱导大鼠肝纤维化的作用,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及上调PPAR-γ表达有关.

采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法,依据"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"建立北柴胡饮片和北柴胡配方颗粒的指纹图谱,并进行相似度评价,确定共有特征峰.采用SPSS 22.0和SIMCA14.1软件进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析,筛选影响饮片和配方颗粒质量的差异性成分.结果显示,10批北柴胡饮片有24个共有峰,相似度均不低于0.985;20批北柴胡配方颗粒有16个共有峰,相似度在0.858～0.998.共指认了 6个共有峰,分别为柴胡皂苷c(峰6)、柴胡皂苷f(峰7)、柴胡皂苷a(峰9)、柴胡皂苷d(峰18)、柴胡皂苷b2(峰28)、柴胡皂苷b1(峰29).聚类分析和主成分分析结果一致,北柴胡饮片和北柴胡配方颗粒各为一类,有16个峰的变量重要性投影(VIP)值大于1,可能是二者的差异性物质.建立的指纹图谱法简便可行、重复性好,可用于评价北柴胡饮片和北柴胡配方颗粒的质量.

目的 观察大柴胡汤对结石性胆囊炎豚鼠血清炎症因子水平和胆囊动力的影响,探讨大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的作用机制.方法 将40 只雌性豚鼠随机分为正常组、模型组、消炎利胆片组、大柴胡汤组,每组10 只.模型组、消炎利胆片组、大柴胡汤组连续喂以高胆固醇致石饲料4 周建立结石性胆囊炎模型.造模成功后,大柴胡汤组给予大柴胡汤颗粒剂灌胃,消炎利胆片组给予消炎利胆片灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均连续灌胃4 周.灌胃结束后,腹主动脉取血测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、胆囊收缩素(CCK)、小窝蛋白-3(Cav-3)水平,测量胆汁量,取胆囊检测胆囊肌条收缩活性.结果 与正常组比较,模型组豚鼠血清TNF-α、IL-1β、Cav-3 水平均明显升高(P均<0.05),血清CCK水平明显降低(P<0.05),胆汁量明显减少(P<0.05),胆囊收缩频率明显减慢(P<0.05),胆囊收缩振幅无明显变化(P>0.05).与模型组比较,消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠血清TNF-α、IL-1β、Cav-3 水平均明显降低(P均<0.05),血清CCK水平均明显升高(P均<0.05),胆汁量均明显增加(P均<0.05),胆囊收缩频率均明显变快(P均<0.05),胆囊收缩振幅均无明显变化(P均>0.05).与消炎利胆片组比较,大柴胡汤组豚鼠胆汁量更多,血清TNF-α、IL-1β、CCK水平更高,血清Cav-3 水平更低,胆囊肌条收缩频率更快,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 大柴胡汤可以明显减轻结石性胆囊炎豚鼠的炎症反应,增加胆汁量,促进胆囊运动,其作用机制可能与下调血清TNF-α、IL-1β水平发挥抗炎作用,上调血清CCK水平并下调血清Cav-3 水平发挥利胆作用相关.

[目的]观察柴防止咳方(由北柴胡、防风、黄芩、清半夏、党参、乌梅、五味子等中药组成)治疗小儿风邪犯肺型变应性咳嗽的临床疗效.[方法]将60例风邪犯肺型变应性咳嗽患儿随机分为治疗组和对照组,每组各30例.治疗组给予自拟的柴防止咳方免煎颗粒口服治疗,对照组给予氯雷他定片联合苏黄止咳胶囊口服治疗.1周为1个疗程,连续治疗2个疗程.观察2组患儿治疗前后咳嗽症状评分、外周血嗜酸性粒细胞计数(EOS)和血清总免疫球蛋白E(IgE)水平的变化情况,并评价2组患儿的临床疗效.[结果](1)临床疗效方面,治疗2周后,2组患儿的总有效率均为93.33%(28/30),组间比较(χ2检验),差异无统计学意义(P＞0.05);但治疗组的总体疗效(秩和检验)优于对照组(P＜0.05).(2)咳嗽症状评分方面,治疗后,2组患儿的日间咳嗽症状评分和夜间咳嗽症状评分均较治疗前降低(P＜0.05),且治疗组的降低程度均优于对照组(P＜0.05).(3)实验室指标方面,治疗后,2组患儿的外周血EOS和血清总IgE水平均较治疗前降低(P＜0.05),且治疗组的降低程度均优于对照组(P＜0.05).[结论]柴防止咳方治疗小儿风邪犯肺型变应性咳嗽疗效显著,能有效减轻患儿咳嗽症状,纠正免疫失衡状态.

快速性心律失常是一种复杂的生物物理现象,在全世界的发病率和死亡率中占有重要地位.传统抗心律失常药物的安全性受到质疑,微创的侵入式治疗方案术后疗效也不理想.而中药可以多离子通道阻滞、非离子通道调节、多途径、多靶点的整合机制发挥抗心律失常作用,近年来中医药治疗心律失常的研究增多.现以经典方研究为切入点,包括以酸枣仁汤、柴胡加龙骨牡蛎汤、安神定志丸为代表的安神剂;以炙甘草汤、归脾汤、生脉散、小建中汤为代表的补益剂;以黄连温胆汤、泻心汤为代表的清热剂;以血府逐瘀汤为代表的活血化瘀剂;以小柴胡汤、逍遥散为代表的疏肝剂;以及稳心颗粒、参松养心胶囊2 味中成药;还有回心草、甘松、人参、莲子心4 味中药进行综述.另基于不同的快速型心律失常类型对当今时方研究作简单回顾,以期为临床提供参考.