目的:研究抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对大鼠脊髓损伤（SCI）后星形胶质细胞（AS）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的作用及分子机制。方法:改良Allen打击法制作Sprague-Dawley（SD）大鼠SCI模型，使用丙酮酸乙酯（EP）或甘草甜素（GL）抑制HMGB1作用，将大鼠分为假手术组、SCI组、SCI+EP（50 mg/kg）组、SCI+GL（100 mg/kg）组，观察大鼠脊髓AS的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、MMP-9的蛋白表达。体外培养SD大鼠脊髓AS，建立氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型，观察OGD 6 h/R 6、12、24、48 h后脊髓AS的MMP-9蛋白表达，以表达最高的时间点用于后续实验为OGD/R组；通过HMGB1 shRNA或EP抑制HMGB1，观察HMGB1对OGD/R处理AS的MMP-9蛋白表达的作用；并使用Toll样受体4（TLR4）、 β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)及核转录因子- κB（NF- κB）的抑制剂，观察HMGB1/TLR4/TRIF/NF- κB通路在OGD/R处理AS的MMP-9蛋白表达中的作用机制。 结果:Western blot结果表明，SCI后1 d大鼠脊髓MMP-9蛋白表达增高，SCI+EP组和SCI+GL组大鼠脊髓MMP-9蛋白表达较SCI组显著减少，差异均有统计学意义（ P<0.001）。免疫荧光结果表明，GFAP与MMP-9蛋白在SCI后脊髓中共定位表达，SCI+EP组和SCI+GL组大鼠脊髓的GFAP、MMP-9蛋白表达较SCI组显著减少，差异均有统计学意义（ P<0.05）。由于在体外培养的脊髓AS中，OGD 6 h/R 12 h的MMP-9蛋白表达较正常组和OGD 6 h/R 6、24、48 h显著增加，以OGD 6 h/R 12 h为OGD/R组。OGD/R+HMGB1 shRNA组和OGD/R+EP组中AS中的MMP-9蛋白表达较OGD/R组显著减少，差异均有统计学意义（ P<0.001）。抑制TLR4、抑制TRIF或抑制NF- κB均可显著减少OGD/R的AS的MMP-9蛋白表达，差异均有统计学意义（ P<0.001）。 结论:抑制HMGB1作用减少大鼠SCI后脊髓AS的MMP-9蛋白表达，并减少OGD/R处理后AS的MMP-9蛋白表达。HMGB1通过TLR4/TRIF/NF- κB信号通路调节OGD/R处理的AS中的MMP-9蛋白表达。

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对大鼠脊髓损伤(SCI)后微血管内皮细胞(EC)葡萄糖转运体1(GLUT1)表达的作用及机制。方法:改良Allen’s法制作Sprague-Dawley大鼠SCI模型，观察SCI 1 d后抑制HMGB1作用脊髓GLUT1表达。培养大鼠脑脊髓EC，建立氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型，观察减少HMGB1对OGD 6 h/R 12 h处理EC的GLUT1表达的作用。使用Toll样受体4(TLR4)、TRIF及核转录因子-κB(NF-κB)的激动剂或抑制剂，激动或抑制通路蛋白作用，观察TLR4/TRIF/NF-κB通路在体内外HMGB1调节GLUT1表达中的作用。统计学方法采用单因素方差分析，两两比较采用Tukey’s检验。结果:SCI 1 d后大鼠脊髓GLUT1表达增高(SCI 1 d组高于sham组，1.655±0.083比1.000±0， q＝24.580， P<0.01)。丙酮酸乙酯(实验组低于SCI组，1.356±0.096比2.107±0.115， q＝14.730， P<0.01)或甘草甜素(实验组低于SCI组，1.311±0.093比2.107±0.115， q＝15.620， P<0.01)抑制HMGB1作用减少SCI 1 d大鼠脊髓GLUT1表达。SC 1 d大鼠激动TLR4增加GLUT1表达(实验组高于SCI组，1.880±0.120比1.655±0.076， q＝5.032， P<0.05)，抑制TRIF(实验组低于SCI组1.427±0.118比1.655±0.076， q＝5.109， P<0.05)或抑制NF-κB(实验组低于SCI组1.301±0.076比1.655±0.076， q＝7.948， P<0.01)都可减少GLUT1表达。体外培养的脑脊髓EC，加入含HMGB1的星形胶质细胞条件培养基(ACM)并进行OGD 6 h/R 12 h处理后增加GLUT1表达(OGD 6 h/R 12 h组高于Normal组，2.122±0.075比1.000±0， q＝38.720， P<0.01)，减少ACM内HMGB1含量降低GLUT1表达(实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.316±0.131比1.950±0.166， q＝8.737， P<0.01)。抑制TLR4(CLI-095：实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.753±0.103比2.230±0.103， q＝13.515， P<0.01；C34：实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.306±0.038比2.230±0.103， q＝16.440， P<0.05)，抑制TRIF(实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.383±0.027比2.230±0.103， q＝23.750， P<0.05)或抑制NF-κB(实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.149±0.064比2.230±0.103， q＝17.510， P<0.05)都可减少加入ACM并进行OGD 6 h/R 12 h处理的EC的GLUT1表达。 结论:抑制HMGB1作用减少SCI后EC的GLUT1表达，HMGB1通过TLR4/TRIF/NF-κB信号通路发挥上述调节作用。

目的:研究乳铁蛋白对放射性肺损伤的防护作用。方法:将15只C57BL/6 J小鼠按随机数表法分为健康对照组、15 Gy照射组(单纯照射组)和乳铁蛋白联合15 Gy照射组(联合组)，每组5只。联合组全程饮用10 mg/ml乳铁蛋白水溶液，3 d后单纯照射组和联合组给予单次15 Gy X射线全胸照射。于照后14 d处死，苏木素-伊红(HE)染色观察肺病理组织学改变、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎症因子高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及IL-6的水平，免疫组织化学染色和Western blot法检测肺组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、MyD88及核转录因子κB(NF-κB)炎症因子蛋白表达。结果:与健康对照组比较，单纯照射组小鼠肺重明显增加( t＝3.20， P<0.05)、肺充血水肿并伴有炎性细胞浸润，血清促炎因子TNF-α健康对照组为(291.80±5.49)pg/ml，单纯照射组为(332.25±22.18)pg/ml，两组比较差异有统计学意义( t＝3.07， P<0.05)；免疫组织化学染色显示HMGB1和NF-κB阳性明显增多。肺组织中HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义( t＝4.04、4.78、3.77、6.14， P<0.05)；与单纯照射组相比，乳铁蛋白干预能显著降低受照小鼠肺重( t＝2.18， P<0.05)、HMGB1、TNF-α和IL-1β水平( t＝4.67、2.97、3.49， P<0.05)。联合组肺组织中HMGB1和NF-κB表达阳性细胞数减少，并下调HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平，差异有统计学意义( t＝8.06、9.80、3.07、5.56， P<0.05)。 结论:乳铁蛋白能够减轻放射性肺损伤，其机制可能与下调炎症相关的HMGB1/TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

目的 探究牛蒡子苷元(ATG)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心室重构和炎性反应的影响,并分析其潜在机制.方法 79只SD大鼠随机选取12只为假手术组,其余大鼠采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,成功造模60只大鼠随机分为CHF组、ATG低剂量组(ATG-L组,10 mg/kg)、ATG高剂量组(ATG-H组,20 mg/kg)、ATG+阴性对照(ATG+NC)组[20 mg/kg ATG+100 μl高迁移率族蛋白B1(HMGB1)阴性对照质粒]、ATG+HMGB1组(20 mg/kg ATG+100μlHMGB1过表达质粒),每组12只.各组给予相应干预4周后,检测大鼠心功能、B型钠尿肽、N末端B型钠尿肽前体和炎性因子白细胞介素6、TNF-α水平、心脏质量指数和左心室质量指数、心肌组织病理变化、心肌细胞横截面积和心肌胶原体积分数、左心室心肌组织HMGB1/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-KB)信号通路相关蛋白表达.结果 与假手术组比较,CHF组大鼠心肌组织HMGB1(0.42±0.05 vs 0.15±0.02)、TLR4(0.70±0.09 vs 0.21±0.04)蛋白水平和磷酸化 NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-KB p65(0.73± 0.09 vs 0.26±0.05)蛋白比值显著升高,LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)显著降低(P＜0.05);与CHF组比较,ATG-L 组和 ATG-H 组大鼠心肌组织 HMGB1(0.33±0.04、0.24±0.04 vs 0.42±0.05)、TLR4(0.56±0.06、0.41± 0.05 vs 0.70±0.09)蛋白水平和 p-NF-κB p65/NF-κB p65(0.61±0.08、0.49±0.06 vs 0.73±0.09)蛋白比值依次降低,LVEF、LVFS依次升高(P＜0.05);HMGB1过表达能明 显减弱ATG对 HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路和CHF大鼠心室重构、炎性反应的抑制作用(P＜0.05).结论 ATG可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号炎性通路,抑制了 CHF大鼠的心室重构.

目的 探究吴茱萸碱通过调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路减轻大鼠输血相关性急性肺损伤(TRALI)的机制.方法 取72只SD大鼠随机分为对照组、模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、空载组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠通过腹腔注射脂多糖(LPS)联合输注人血浆的方法制备TRALI模型.分组处理后检测各组大鼠肺功能指标吸气阻力(Ri)、每分钟通气量(MV)、呼气峰流速(PEF);检测各组大鼠肺湿干比,苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织病理形态变化;免疫荧光染色检测各组大鼠肺组织内血小板与中性粒细胞聚集情况;检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和中性粒细胞百分比;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠BALF及血清促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;免疫印迹检测各组大鼠肺组织HMGB1/TLR4/NF-KB信号通路相关蛋白表达.结果 与模型组相比,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组大鼠肺功能指标MV、PEF均升高(P＜0.05),Ri、肺湿干比、肺组织病理评分、肺组织内血小板-中性粒细胞合光密度、BALF中细胞总数、中性粒细胞百分比、BALF及血清促炎因子TNF-α、IL-1β水平、肺组织HMGB1、TLR4蛋白表达与p-NF-KB p65/NF-κB p65均降低(P＜0.05).HMGB1过表达可减弱吴茱萸碱对TRALI大鼠肺功能的改善作用.结论 吴茱萸碱可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-KB信号激活而抑制TRALI大鼠体内炎症,进而减轻其急性肺损伤,修复其肺功能.

目的 探讨夹竹桃麻素(APO)对糖尿病白内障大鼠的改善作用并分析其可能机制.方法 实验研究.SPF级SD大鼠60 只,随机分为对照组、模型组、APO低剂量组(10 mg/kg)、APO中剂量组(20 mg/kg)、APO高剂量组(40 mg/kg)和阳性组(100 mg/kg二甲双胍).用一次性注射链脲菌素(STZ)法构建糖尿病白内障大鼠模型,建模成功后按组别给予不同药物处理.检测大鼠血糖值并测评晶状体混浊程度;HE染色观察晶状体病理学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1 β(IL-1 β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)指标;Western Blot检测高迁移率族蛋白 1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平.结果 模型组大鼠晶状体混浊,细胞肿胀、破裂、出现空泡,血糖值、MDA、IL-6、IL-1 β、TNF-α、HGMB1、TLR4、NF-κB蛋白表达水平升高,SOD和GSH-Px水平降低;与模型组相比,APO各组及阳性组大鼠晶状体混浊程度降低,晶状体病理症状改善,血糖值、MDA、IL-6、IL-1 β、TNF-α、HGMB1、TLR4、NF-κB蛋白表达水平有所下降,而SOD和GSH-Px水平则上升.结论 APO可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的激活,改善糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤和炎症水平.

目的:观察大柴胡汤对重症中暑患者的临床疗效及对Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)信号通路相关因子的影响.方法:53例重症中暑患者随机分为两组,对照组采用西医常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上辅以大柴胡汤治疗.观察两组治疗第5天,第10天APACHEII评分、TLR4信号通路相关因子的变化;对比两组ICU住院时间以及28天总死亡率.结果:治疗组28天死亡率14.81％ (4/27)低于对照组30.77％ (8/26),但无统计学差异(x2=1.122,P=0.2895);治疗组ICU住院时间(11.35±7.81)天,短于对照组(18.46±11.65)天(t=2.619,P=0.0116);治疗组第5天,第10天血清TLR4、高迁移率族蛋白B1 (HMGBl)、核转录因子-κB (NF-κB)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及APACHEII评分等指标的改善方面均优于对照组(P＜0.01).结论:大柴胡汤能抑制重症中暑患者ⅡR4信号通路介导的全身炎症反应,缩短患者ICU的住院时间、改善预后.

目的:探讨喂饲姜黄素对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠学习记忆和海马β-淀粉样蛋白(Aβ)含量及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)p65表达的影响. 方法:20只雄性转基因小鼠随机分为模型组(M组,n=10)和治疗组(T组, n=10),另选10只雄性同窝野生型小鼠作为对照组(C组,n=10).T组4月龄起喂饲含姜黄素(100 mg·kg-1·d-1)的饲料,M组和C组喂饲普通饲料,9月龄时进行Morris水迷宫实验,免疫组织化学和Western blot分别检测Aβ和HMGB1、RAGE、TLR4、NF-κB p65蛋白的表达.结果:与C组比,M组水迷宫实验中逃避潜伏期延长(P<0.05),且平均跨平台次数减少(P<0.05),海马CA1区和DG区Aβ数量及IOD值增加(P<0.05),海马中HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κB p65表达均增多(P<0.05).与M组比,T组逃避潜伏期缩短(P<0.05),且平均跨平台次数增多,海马CA1区和DG区Aβ数量及IOD值降低(P<0.05),海马中HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κB p65表达均减少(P<0.05).结论:持续喂饲姜黄素5个月可显著改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力并减少海马Aβ含量,其机制可能与抑制海马HMGB1-RAGE/TLR4-NF-κB信号通路有关.

目的:探讨木瓜醇提取物对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠神经功能的保护作用,并初步探讨其可能机制.方法:制备SCI大鼠模型,根据处理方式分为假手术组(Sham组),模型组(SCI组),木瓜提取物治疗组(Pap组);重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group histone B1,HMGB1)处理组(rHMGB1组);重组HMGB1+木瓜提取物处理组(rHMGB1+Pap组).应用basso beattie bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢运动功能;检测脊髓组织含水量评估脊髓水肿情况;应用苏木素-伊红(HE)染色进行组织学评估;运用酶联免疫吸附检测白细胞介素-1β(interleuki-1β,IL-1β),肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleuki-6,IL-6)水平;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测脊髓组织细胞凋亡情况;应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组织中HMGB1,Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4),核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65蛋白表达情况;Western blot检测半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA表达情况.结果:与Sham组比较,SCI组大鼠BBB评分明显降低(P＜0.05).SCI组和rHMGB1组脊髓组织松散,呈现嗜中性粒细胞浸润的组织学损伤;而Pap组和rHMGB1+Pap组中组织学损伤情况得到明显改善.与Sham组比较,SCI组大鼠脊髓组织中含水量,HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平均明显增加(P＜0.05).Pap组和rHMGB1+Pap组含水量,HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平均明显低于SCI组(P＜0.05).rHMGB1+Pap组含水量,HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平明显低于rHMGB1组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:木瓜提取物能够通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB p65信号通路活化,减轻SCI后的炎症反应、减少脊髓组织细胞凋亡,从而诱导脊髓组织修复和运动功能恢复.

目的 探讨高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终末产物/Toll样受体-核转录因子-κB(HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB)信号通路在骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗内毒素脂多糖(LPS)致凝血功能障碍大鼠中的作用.方法 体外分离培养4～5周龄雌性SD大鼠BMSC,取第4代细胞鉴定成功后用于后续实验.按随机数字表法将大鼠分为生理盐水(NS)对照组、LPS组和BMSC组,每组15只.经大鼠大隐静脉注射LPS 1 mg/kg构建LPS致凝血功能障碍模型;NS对照组给予等量NS.BMSC组于制模后2 h经尾静脉注射BMSC 0.5 mL(含BMSC 1×106个);NS对照组和LPS组给予等量NS.分别于术后1、3、7 d取大鼠腹主动脉血,检测凝血功能指标〔包括血小板计数(PLT)、血小板体积分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)、大型血小板比例(P-LCR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、国际标准化比值(INR)及纤维蛋白原(FIB)〕;分别采用实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血中HMGB1、RAGE、TLR2/4及NF-κB的mRNA表达和含量.结果 ① 体外培养细胞呈梭形或扁平型生长,第4代细胞表型经流式细胞仪鉴定为BMSC.② 凝血功能指标:与NS对照组比较,LPS组1 d PLT、PCT、FIB即明显下降,PDW、MPV、P-LCP、INR即明显升高,APTT、PT、TT即明显延长;随LPS诱导时间延长,各项凝血指标均有所好转.给予BMSC干预后能明显逆转LPS诱导的凝血功能异常,1 d时各指标与LPS组比较差异即有统计学意义〔PLT(×109/L):398.8±17.9比239.1±15.8,PCT(％):0.35±0.04比0.23±0.06,FIB(g/L):1.7±0.6比0.8±0.1,PDW(％):12.4±1.6比16.2±1.5,MPV(fl):11.0±1.6比13.7±1.1,P-LCR(％):13.0±2.1比15.3±2.7,INR:1.52±0.17比1.82±0.19,APTT(s):66.3±4.1比89.5±4.5,PT(s):18.3±0.7比25.1±1.9,TT(s):87.5±7.8比115.0±9.7,均P<0.05〕,并持续至7 d.③HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路相关分子:与NS对照组比较,LPS组1 d血中HMGB1、RAGE、TLR2/4及NF-κB的mRNA表达和含量即明显升高;随LPS诱导时间延长,各通路分子mRNA表达及含量逐渐下降.给予BMSC干预后,1 d时各通路分子的mRNA表达及含量即较LPS组明显降低〔HMGB1 mRNA(2-ΔΔCt):10.77±0.04比24.51±3.69,HMGB1含量(μg/L):0.48±0.01比0.95±0.06;RAGE mRNA(2-ΔΔCt):11.57±1.11比18.08±0.29,RAGE含量(μg/L):0.73±0.04比1.37±0.06;TLR2 mRNA(-ΔΔCt):2.60±0.22比12.61±0.27,TLR2含量(μg/L):0.81±0.03比1.59±0.09;TLR4 mRNA(2-ΔΔCt):2.95±0.52比4.06±0.11,TLR4含量(μg/L):0.80±0.09比1.18±0.11;NF-κB mRNA(2-ΔΔCt):1.29±0.06比7.79±0.25,NF-κB含量(μg/L):1.22±0.24比2.42±0.26;均P<0.05〕,并持续至7 d.结论 BMSC移植能够改善内毒素致凝血功能障碍大鼠的凝血功能,可能与抑制HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路活化有关.