目的:观察3xTg-AD小鼠海马突触可塑性与钙离子跨膜流动特征。方法:根据基因型不同，将6月龄小鼠分为APP/PS1/tau三转基因AD(3xTg-AD)模型小鼠和野生型(WT)对照组小鼠两组，每组13只。每组随机选取6只小鼠进行在体电生理记录，给予测试刺激记录其海马CA1区场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential，fEPSP)、配对脉冲刺激记录双脉冲易化(paired-pulse facilitation，PPF)、高频刺激(high frequency stimulation，HFS)诱导长时程增强(long-term potentiation，LTP)。每组剩余的7只小鼠采用非损伤微测技术(non-invasive micro-test technology，NMT)，检测海马CA1区脑片神经元的跨膜钙内流和钙外排情况。3xTg-AD小鼠在电生理和NMT实验中各损失1只，最终入组电生理实验5只，NMT实验6只。采用SPSS 18.0对所有数据进行统计学分析，两组间比较使用两独立样本 t检验。 结果:(1)在体电生理实验中，给予测试刺激后30 min内，3xTg-AD小鼠和WT小鼠的fEPSP斜率均比较稳定，其平均fEPSP斜率分别为[(97.8±2.3)%]和[(92.6±12.6)%]，两组之间差异无统计学意义( t＝0.91， P>0.05)；给予配对脉冲刺激后，3xTg-AD小鼠和WT小鼠的PPF值分别为(1.58±0.69)和(1.74±0.17)，两组间差异无统计学意义( t＝0.50， P>0.05)；给予HFS后30 min和60 min，3xTg-AD小鼠的LTP值分别为[(104.9±10.9)%]和[(98.0±10.8)%]，明显低于WT小鼠的[(156.5±21.3)%]( t＝4.43， P<0.01)和[(162.5±19.7)%]( t＝5.92， P<0.01)。(2)在NMT实验中，3xTg-AD小鼠海马CA1区神经元谷氨酸诱导的标准化跨膜Ca 2＋内流平均流速和峰值流速分别为[(-2 166.0±425.0)%]和[(-3 539.6±1 270.9)%]，远高于WT小鼠的[(-735.3±262.9)%]( t＝6.81， P<0.01)和[(-917.3±271.7)%]( t＝4.89， P<0.01)；而低钙溶液引起的3xTg-AD小鼠标准化Ca 2＋外排平均流速和峰值流速分别为[(1 451.6±297.1)%]和[(1 968.7±227.3)%]，显著低于WT对照组小鼠的[(2 579.3±810.9)%]( t＝2.92， P<0.05)和[(3 420.4±954.8)%]( t＝3.31， P<0.01)。 结论:6月龄3xTg-AD小鼠出现的海马突触可塑性损伤可能与钙内流增加和钙外排减少所导致的海马神经元胞内Ca 2＋超载密切相关。

目的:研究脑苷肌肽对APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)表达的影响。方法:5月龄APP/PS1双转基因模型小鼠36只，数字抽签随机分为模型组(氯化钠6.6 ml·kg -1·d -1腹腔注射)、脑苷肌肽组(脑腺苷肌肽6.6 ml·kg -1·d -1腹腔注射)、多奈哌齐组(多奈呱齐2 mg·kg -1·d -1灌胃)，每组12只，同月龄C57BL/6J小鼠12只为正常对照组，连续给药6周，取脑组织进行免疫组化染色检测β淀粉样蛋白(Aβ)、GFAP及NeuN的表达并定量分析。 结果:免疫组化染色结果显示，模型组小鼠的Aβ、GFAP表达均高于正常对照组，(0.147±0.068)%比0%、(61.750±22.020)个比(26.000±4.598)个(均 P<0.05)，NeuN的表达低于正常对照组，0.021±0.002比0.032±0.003( P<0.05)；脑苷肌肽组及多奈哌齐组的Aβ(0.058±0.055)%和(0.057±0.045)%、GFAP表达(38.250±5.418)个和(36.130±5.963)个均低于模型组(均 P<0.05)，NeuN的表达0.029±0.004和0.027±0.003均高于模型组( P<0.05)，脑苷肌肽组Aβ、GFAP、NeuN的表达水平与多奈哌齐组比较差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:脑苷肌肽具有多靶点的神经保护作用，该作用可能是通过降低AD小鼠的Aβ、GFAP表达水平并上调NeuN的表达实现。

目的:探究六味地黄丸对β-淀粉样蛋白前体/早老素蛋白1(amyloid β-precursor protein/presenilin-1，APP/PS1)双转基因小鼠行为及Toll样受体4/核因子κB(Toll-like receptor 4/nuclear factor kappa-B，TLR4/NF-κB)信号转导途径的影响。方法:3月龄雌性APP/PS1小鼠40只，按照随机数字表法分为模型组、六味地黄丸低剂量组(0.59 g/kg，2次/d，灌胃)、中剂量组(1.18 g/kg，2次/d，灌胃)、高剂量组(2.36 g/kg，2次/d，灌胃)和布洛芬组(0.04 g/kg，2次/d，灌胃)，每组8只；8只体质量相匹配的3月龄野生型C57BL/6小鼠作为对照组；对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃(2次/d)；所有小鼠连续干预3个月。采用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力，采用ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)水平，免疫组化法检测海马组织β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)及NF-κB水平，Western blot法检测海马组织TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88)及磷酸化NF-κB(phosphorylated NF-κB，p-NF-κB)蛋白表达水平。采用SPSS 20.0进行数据处理，多组间的比较采用重复测量方差分析或单因素方差分析。结果:重复测量方差分析结果显示，6组小鼠的逃避潜伏期比较，时间和组别的交互作用显著( F交互＝117.219， P<0.001)。各组小鼠第5天逃避潜伏期均低于第1天(均 P<0.05)；第1～5天布洛芬组和六味地黄丸中、高剂量组小鼠逃避潜伏期均低于模型组(均 P<0.05)；在第3～5天，六味地黄丸中、高剂量组小鼠的逃避潜伏期均低于六味地黄丸低剂量组(均 P<0.05)。6组小鼠平台象限停留时间百分比和穿越平台次数均差异有统计学意义( F＝5.451，4.824，均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组小鼠在平台象限停留时间百分比[(50.77±5.49) %，(54.39±5.71) %，(51.98±6.12) %]、穿越平台次数[(5.9±1.1)次，(6.0±1.3)次，(5.1±0.8)次]均高于模型组[(27.32±3.22)%，(2.2±1.0)次](均 P<0.05)。免疫组化结果显示，6组小鼠海马组织Aβ、GFAP和NF-κB积分光密度值均差异有统计学意义( F＝57.52，45.37，79.10，均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组海马组织Aβ、GFAP和NF-κB积分光密度值均低于模型组(均 P<0.05)，六味地黄丸高、中剂量组海马组织Aβ、GFAP和NF-κB积分光密度值均低于六味地黄丸低剂量组(均 P<0.05)。ELISA结果显示，6组小鼠血清TNF-α和IL-1β含量均差异有统计学意义( F＝3.996，6.395，均 P<0.05)；Western blot结果显示6组小鼠海马组织TLR4、MyD88及p-NF-κB蛋白表达均差异有统计学意义( F＝15.710，3.522，4.119，均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组血清TNF-α和IL-1β含量均低于模型组(均 P<0.05)，六味地黄丸高、中剂量组血清TNF-α[(18.90±2.33)ng/L，(21.56±2.49) ng/L]和IL-1β[(5.88±0.80)ng/L，(6.75±0.83)ng/L]含量均低于低剂量组[(30.77±2.89)ng/L，(9.11±1.27)ng/L](均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组海马组织TLR4、MyD88及p-NF-κB蛋白表达均低于模型组(均 P<0.05)，六味地黄丸高、中剂量组海马组织TLR4[(0.254±0.091)，(0.318±0.122)]、MyD88[(0.229±0.077)，(0.386±0.119)]及p-NF-κB[(0.412±0.188)，(0.358±0.119)]蛋白表达均低于低剂量组[(0.617±0.172)，(0.672±0.166)，(0.799±0.227)](均 P<0.05)。 结论:六味地黄丸能够明显改善阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆障碍，可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号转导途径，降低TNF-α和IL-1β的表达，从而减轻中枢免疫炎性反应，发挥抗AD的作用。

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合神经生长因子(NGF)纳米粒海马移植对APP/PS1双转基因小鼠行为学及海马突触素(SYP)的影响。方法:体外分离培养增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠胎脑来源NSCs，24只12月龄雄性APP/PS1双转基因AD小鼠随机分入NSCs联合NGF纳米粒移植组(NSCs＋NGF-NP组)、NSCs移植组(NSCs组)和AD对照组(AD组)，每组8只，另选8只同月龄雄性野生型小鼠作为健康对照组(WT组)。NSCs＋NGF-NP组和NSCs组分别行NSCs联合NGF纳米粒移植和NSCs移植，其余两组均行等量磷酸盐缓冲液(PBS)注射，移植部位为双侧海马区。移植4周后，采用Morris水迷宫检测4组小鼠学习记忆功能，用免疫荧光组化法检测移植细胞的迁移与分化，Western blot检测SYP蛋白水平。结果:体外悬浮培养的神经球表达EGFP阳性，免疫荧光显示NSCs特异性标志物Nestin阳性。移植4周后，可见EGFP示踪的NSCs在海马注射移植部位存活并向胼胝体，海马深部和齿状回迁移，可分化为双皮质素(DCX)阳性神经元及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性胶质细胞，并可见NSCs＋NGF-NP组存活细胞数量较多，突起较长，穿越海马颗粒层。海马突触相关蛋白SYP检测显示，WT组、NSCs组和NSCs＋NGF-NP组海马SYP蛋白水平较AD组明显增高( P<0.05)，NSCs＋NGF-NP组SYP蛋白水平明显高于NSCs组( P<0.05)，且与WT组比较，差异无统计学意义( P>0.05)。水迷宫检测显示，与AD组比较，WT组、NSCs组和NSCs＋NGF-NP组在平台象限停留时间及穿越平台次数均增加( P<0.05)，NSCs＋NGF-NP组穿越平台的次数大于NSCs组( P<0.05)，且与WT组比较，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:NSCs联合NGF纳米粒海马移植治疗可能促进移植细胞在体内存活及成熟，增加海马突触，从而改善AD小鼠学习记忆功能。

目的:探讨S14G-humanin(HNG)对淀粉样前体蛋白( APP)/早老蛋白-1( PS1)双转基因小鼠空间学习记忆能力和海马神经元自噬功能的影响。 方法:将16只 APP/ PS1双转基因小鼠按随机数字表法分为模型组、HNG治疗组，每组8只；另取8只C57BL/6J小鼠作为对照组。对照组和模型组小鼠每天腹腔注射0.5 mL双蒸水，HNG治疗组小鼠每天腹腔注射0.5 mL HNG(50 μg/kg)。连续注射4周后采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠的空间学习记忆能力，采用Western blotting、RT-PCR实验分别检测各组小鼠海马泛素化激酶1(ULK1)、P62、兔抗微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ及组织蛋白酶D蛋白和mRNA的表达，采用免疫组化染色检测各组小鼠海马神经元β淀粉样蛋白(Aβ)的沉积。 结果:Morris水迷宫实验显示对照组、HNG治疗组、模型组小鼠的逃避潜伏期依次延长，穿梭原平台所在象限次数依次减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。Western blotting、RT-PCR检测显示对照组、HNG治疗组、模型组小鼠海马ULK1蛋白和mRNA的表达依次减少，P62蛋白和mRNA的表达依次增加、LC3Ⅱ蛋白/LC3Ⅰ蛋白和 LC3ⅡmRNA/ LC3ⅠmRNA值依次增加、组织蛋白酶D蛋白和mRNA的表达依次减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。免疫组化染色检测显示对照组、HNG治疗组、模型组小鼠海马神经元Aβ阳性表达依次增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:HNG可提高 APP/ PS1双转基因小鼠海马神经元的自噬活性，减少脑内Aβ的沉积，从而改善小鼠的空间学习记忆能力。

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICS Ⅱ)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习和记忆能力的影响及其分子机制.方法:将 7 月龄APP/PS1 双转基因小鼠随机分为模型组、ICS Ⅱ组和阳性对照药组,每日灌胃给药 1 次,连续 30 d.用Morris水迷宫与筑巢实验检测小鼠学习记忆和生活能力;用免疫荧光化学法检测脑内β淀粉样蛋白(Aβ)沉积与细胞凋亡情况;用蛋白质免疫印迹法(Western blot)探究其抗凋亡作用与磷脂腺肌醇 3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的相关性.结果:与模型组比较,ICS Ⅱ组小鼠的学习记忆及生活能力都明显提高(P<0.01),其海马与皮层的Aβ荧光强度和裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)阳性细胞数均明显降低(P<0.05,P<0.01),说明ICS Ⅱ能抑制Aβ沉积、减少神经细胞凋亡,保护脑组织;同时ICS Ⅱ组小鼠海马PI3K蛋白质表达水平和p-Akt/Akt显著升高(P<0.05,P<0.01),而Bax/Bcl-2 明显降低(P<0.01),说明ICS Ⅱ抗凋亡作用的机制与激活海马PI3K/Akt信号通路,降低促凋亡蛋白、提高抗凋亡蛋白的表达水平有关.结论:ICS Ⅱ对AD小鼠脑内神经细胞有明显的保护作用,能改善小鼠的认知功能,其机制可能与激活海马PI3K/Akt信号通路有关.

目的 探讨黄连解毒汤对Tau/APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠神经元损伤的影响及机制.方法 将Tau/APP/PS1转基因AD小鼠随机分成模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组 10 只.选取 10 只相同月龄的雄性C57BL/6J小鼠作为对照组.药物干预4周后,ELISA法检测小鼠海马组织炎症因子及AD相关病理标志物可溶性淀粉酶前体蛋白α(soluble amyloid precursor protein α,sAPPα)、β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)40、Aβ42 和磷酸化Tau 蛋白(phosphorylated tau protein,p-Tau)的水平,免疫荧光双标法检测海马Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体和小胶质细胞特异性标志物离子钙结合衔接分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)的表达,Western blot检测小鼠海马NLRP3 炎性小体信号通路活化情况.结果 与对照组比较,模型组小鼠海马中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-1 和Iba1 表达明显增加(P<0.05),炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平上升(P<0.05),Aβ40、Aβ42 和p-Tau水平及p-Tau/Tau值均升高(P<0.05),sAPPα水平下降(P<0.05).与模型组比较,不同剂量黄连解毒汤治疗组小鼠海马中sAPPα水平上升(P<0.05),Aβ40、Aβ42 及 Tau 蛋白磷酸化水平均明显下降(P<0.05),IL-1β、IL-18、TNF-α 水平降低(P<0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1和Iba1表达减少(P<0.05).结论 黄连解毒汤可能通过下调AD小鼠海马NLRP3炎性小体信号通路活性,抑制小胶质细胞活化,降低Aβ、p-Tau等神经元毒性病理产物的水平,从而改善海马神经元损伤.

目的 探讨交泰丸对阿尔茨海默病模型小鼠大脑胰岛素PI3K/AKT通路的影响.方法 50只3月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为5组:模型组、交泰丸低剂量组(2.1 g/kg)、交泰丸中剂量组(4.2 g/kg)、交泰丸高剂量组(8.4 g/kg)、多奈哌齐组(3 mg/kg),C57BL/6J雄性小鼠为正常组,10只/组.给药4周后,采用水迷宫和旷场实验评估各组小鼠学习记忆能力,采用HE染色、尼氏染色观察小鼠脑组织神经元病理改变,免疫组化法观察小鼠脑组织Aβ淀粉样斑块沉积情况,ELISA试剂盒测定小鼠空腹血清胰岛素水平,采用Western blot和RT-qPCR检测小鼠脑组织中Aβ42、胰岛素PI3K/AKT通路以及下游GLUTs等相关指标蛋白和mRNA表达水平.结果 与正常组小鼠比较,模型组小鼠学习记忆能力受损,小鼠海马神经元细胞数量减少,排列稀疏,小鼠脑组织Aβ淀粉样斑块沉积显著增多(P<0.001),Aβ42蛋白表达水平升高(P<0.05),胰岛素抵抗指数升高(P<0.001),小鼠海马PI3K蛋白以及mRNA表达均降低(P<0.01),海马与皮质AKT蛋白表达(P<0.05)、AKT mRNA表达(P<0.001)、InR蛋白表达(P<0.05),GLUT1、GLUT3、GLUT4蛋白表达(P<0.05)及mRNA表达(P<0.001)均降低,GSK3β蛋白表达(P<0.01)及GSK3β mRNA表达(P<0.001)显著升高.与模型组比较,交泰丸各组和多奈哌齐组小鼠记忆能力明显改善,尤其是交泰丸中剂量组,小鼠海马神经元细胞数量增多,小鼠海马、皮质Aβ淀粉样斑块沉积减少(P<0.01),Aβ42蛋白表达下调(P<0.001),胰岛素抵抗指数降低(P<0.001),小鼠海马、皮质PI3K、AKT、InR、GLUT1、GLUT3、GLUT4蛋白(P<0.05)及mRNA(P<0.01)表达不同程度升高,GSK3β蛋白及mRNA表达降低.结论 交泰丸可通过激活APP/PS1双转基因小鼠大脑胰岛素PI3K/AKT通路,调控其下游GLUTs表达水平,提高大脑葡萄糖代谢能力,改善小鼠学习记忆能力,延缓阿尔茨海默病发展进程.

目的 基于脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)/原肌球蛋白相关激酶B(Tropomyo-sin-related kinase B,TrkB)通路探讨清心开窍方对淀粉样前体蛋白/早老素-1(APP/PS1)双转基因小鼠认知功能及神经元保护作用的影响.方法 将30只APP/PS1小鼠按照随机数字表法分为模型组、安理申组(1.67 mg·kg-1·d-1)、清心开窍方低剂量组(4.75 mg·kg-1·d-1)、清心开窍方中剂量组(9.5 mg·kg-1·d-1)和清心开窍方高剂量组(19 mg·kg-1·d-1).选取6只雄性C57/B6小鼠记为对照组,连续90 d于每日上午9点进行灌胃.完成灌胃后,通过Mor-ris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力;通过HE染色观察小鼠海马CA1区细胞形态变化;通过尼氏染色观察小鼠海马CA1区病理形态变化;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、TrkB、BDNF mRNA在小鼠海马中的表达;通过蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)检测P-TrkB、TrkB、BACE1、BDNF蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期明显增多(P＜0.01),而穿越平台次数以及在原平台所在象限滞留的时间明显增多(P＜0.01),其小鼠海马神经元出现严重损伤,排列松散,尼氏体数量减少,染色变浅,BACE1表达增加(P＜0.01),P-TrkB、TrkB、BDNF表达降低(P＜0.01);与模型组相比,清心开窍方治疗组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数以及目标象限停留时间明显增多(P＜0.05或P＜0.01),小鼠海马锥体细胞排列较紧密,形态完整,尼氏体数目增加,着色加深,BACE1表达降低(P＜0.05或P＜0.01),P-TrkB、TrkB、BDNF表达增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 清心开窍方可能通过BDNF/TrkB通路改善APP/PS1小鼠学习记忆能力,对神经细胞起保护作用.

背景:阿尔茨海默病患者脑部多存在Notch1信号通路异常,但这些信号通路在阿尔茨海默病发病中的作用尚未完全明确.长期有氧运动对于Notch1信号通路的相关因子甲基化率能够产生影响,从而改变Notch1的表达.然而,有氧运动是否会通过Notch1信号通路对阿尔茨海默病小鼠海马神经细胞增殖及组织病理学特征产生影响并不清楚.目的:观察DAPT抑制Notch1信号通路后有氧运动对阿尔茨海默病小鼠海马神经细胞增殖及组织病理学特征的影响.方法:随机将3月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠分成4组,分别为对照组、运动对照组、抑制剂组及运动抑制剂组,每组20只.采用自然喂养干预对照组,长期有氧运动干预运动组,各干预方式的周期为20周;然后在第18周对各组小鼠进行溶剂或Notch1抑制剂注射.20周后取脑组织,采用Real-time PCR、免疫荧光及Western blot技术分别检测Aβ1-42、Tau、Ki67及Notch1表达.结果与结论:与对照组小鼠相比,抑制剂组小鼠海马齿状回区Ki67、Notch1的表达显著降低(P<0.05),Aβ1-42、Tau没有显著差异;运动对照组小鼠海马齿状回区Ki67表达显著高于对照组,而Aβ1-42、Tau、Notch1表达显著低于对照组(P<0.05);运动抑制剂组小鼠海马齿状回区Aβ1-42、Tau、Ki67、Notch1表达与抑制剂组相比没有显著差异.由此可见,Notch1信号通路可能介导运动改善阿尔茨海默病小鼠海马神经细胞增殖及组织病理学特征的过程.