目的:通过小鼠动物模型探讨阳离子抗菌肽Cathelicidin-PY（PY）治疗急性肝衰竭的可行性。方法:内毒素鲎试验（LAL assay）检测不同浓度抗菌肽PY体外中和内毒素/脂多糖（LPS）能力；CCK-8法检测不同浓度抗菌肽PY对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）的毒性作用；体外溶血实验评价抗菌肽PY对健康人红细胞的溶血活性；构建D-氨基半乳糖联合LPS诱导的小鼠急性肝衰竭模型，观察抗菌肽PY对模型小鼠存活率的影响；通过HE染色观察肝脏病理学变化，并通过免疫组织化学、蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。组间比较采用 t检验、方差分析，率的比较采用χ 2检验。 结果:体外实验显示极低剂量（0.01 μmol/L）可达到较高的内毒素中和率，中等剂量（10～40 μmol/L）中和率可超过70%，且不同浓度组间比较，差异有统计学意义（ F = 569.22， P < 0.05）。中等剂量抗菌肽PY有较强的中和内毒素作用，较低的细胞毒性及溶血活性。进一步体内实验显示中等剂量抗菌肽PY可改善模型小鼠的肝脏损伤程度并显著提高存活率，且免疫组织化学检测结果显示中等剂量抗菌肽组较肝衰竭组肝组织内Caspase-3表达明显减少，与蛋白质印迹法检测结果一致。 结论:抗菌肽PY具有较强中和内毒素的能力且毒副作用小，特定剂量抗菌肽PY可以减轻肝细胞凋亡，并显著提高模型动物存活率，为肝衰竭治疗的研究提供了新思路。

目的:明确宣白承气汤对脓毒症小鼠肺和肠道损伤以及肠道功能的作用，分析其对脓毒症小鼠肠道菌群的影响。方法:健康清洁级C57雄性小鼠36只，随机（随机数字法）分为三组，每组12只，分别为对照组、模型组和宣白承气汤治疗组。通过腹腔注射细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）5 mg/kg制备脓毒症模型，造模前24 h、造模后0.5 h及造模后12 h宣白承气汤灌胃给药，造模后24 h采集肺脏、肠道以及血液标本。采用实时荧光定量PCR测定肺部和肠道组织炎症因子白介素1β（interleukin-1β, IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）含量，通过组织学染色评估肺部和肠道结构损伤和改变，通过特殊染色评价肠道黏蛋白表达，分别采用免疫组化和Western Blot分析肠道上皮紧密连接蛋白的表达，最后使用鲎试剂盒检测各组小鼠血浆中内毒素含量，并提取小鼠粪便DNA，通过菌群16S rDNA荧光定量PCR方法检测脓毒症小鼠肠道菌群变化。三组间的计量资料比较，采用单因素方差分析。结果:（1）宣白承气汤能够降低脓毒症小鼠肺部炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1的表达（均 P<0.05），减轻肺部炎症损伤；（2）与模型组相比，宣白承气汤治疗组小鼠肠道炎性损伤有所缓解，肠道炎症因子表达明显下调（均 P<0.05），肠道黏蛋白和上皮紧密连接蛋白表达增加，肠道屏障功能改善；（3）宣白承气汤减轻脓毒症小鼠循环血液中内毒素的含量（ P<0.05），并促进脓毒症小鼠肠道中有益菌阿克曼菌的生长，减少肠球菌属的表达（均 P<0.05）。 结论:宣白承气汤可显著改善脓毒症小鼠肺部和肠道炎症损伤，调节肠道上皮屏障和肠道菌群，改善肠道功能。

目的 探究重组C因子法检测不同医疗器械中细菌内毒素的适用性,为重组C因子法在医疗器械检验中的使用提供依据.方法 以2020年版《中国药典》四部9251细菌内毒素检查法应用指导原则为依据,对重组C因子检测法的准确度进行验证,并按GB/T 16886.1-2011中对医疗器械的分类,选取不同医疗器械样品,使用重组C因子试剂盒进行检测,与凝胶法及动态浊度法进行比对.结果 高、中、低浓度内毒素标准品采用重组C因子法的实测值与理论值具有良好的相关性,说明方法具有较好的准确度,且不同医疗器械产品使用重组C因子法和动态浊度法检测结果的比值在50%～200%范围内,回收率在50%～200%之间,与凝胶法检测结果也一致.结论 重组C因子法对于医疗器械中细菌内毒素的检测具有良好的适用性.

目的 建立测定样品中细菌内毒素的微量凝胶法.方法 按 2020 年版《中国药典(四部)》1143 细菌内毒素检查法进行试验,通过预试验确定适合试验的试管内径(4,8 mm)及加样量(10,20,30,40,50,60,70μL)后,再进行完整的鲎试剂灵敏度复核试验及样品细菌内毒素检查试验,并与药典收载现行凝胶法进行比较.结果 预试验结果显示,确定采用内径为 8mm的平底玻璃试管,加样量为 40μL或 50μL进行微量凝胶法试验.对鲎试剂进行灵敏度复核,微量凝胶法灵敏度复核结果与药典收载现行凝胶法一致,均在灵敏度合格范围内.对样品进行细菌内毒素检查,微量凝胶法试验结果与药典收载现行凝胶法一致.结论 该微量凝胶法可作为药典收载现行凝胶法的补充或替代方法,鲎试剂缺乏的情况下可用于灭菌制剂的细菌内毒素检查.

目的 探究熊果酸(UA)对I型糖尿病(T1DM)大鼠TLR4/NF-KB信号通路及Th17/Treg细胞的影响.方法 腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备T1DM大鼠模型,随机分为空白组(Control组)、模型组(Model组)、二甲双胍组(MET组)和熊果酸组(UA组).记录大鼠体重、血糖等一般情况,灌胃6周后采集大鼠外周血、胰腺组织评估胰岛素干预情况.免疫组化观察胰腺组织病理变化;鲎试剂检测血清脂多糖(LPS)含量变化;qRT-PCR法检测胰腺 TLR4、MyD88、IκBα、NF-κB p65 mRNA 的表达,以及转录因子 RORγt、Foxp3 mRNA 的表达;Western blot 法检测胰腺TLR4、MyD88、IKBα、NF-κB p65蛋白的表达,以及转录因子RORγt、Foxp3蛋白的表达;流式细胞术检测外周血 Th17、Treg细胞比例变化;ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量变化.结果 经STZ诱导的糖尿病大鼠经6周灌胃处理,与模型组相比,二甲双胍组大鼠和熊果酸组大鼠空腹血糖(FBG)均明显下降,体重均明显升高;胰岛β细胞炎性浸润减少;TLR4、MyD88、IκBα、NF-κB p65、RORγt mRNA和蛋白的表达明显降低;LPS含量明显下降;IκBα、Foxp3 mRNA和蛋白表达明显升高;Th17/Treg比值明显下降;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显下降.结论 UA可通过减少LPS移位,抑制TLR4/NF-KB通路,下调RORγt并上调Foxp3的表达纠正T1DM大鼠Th17/Treg细胞比例失衡来改善大鼠症状.

目的 探讨微量动态显色法定量检测胎牛血清中的细菌内毒素的可行性,并与凝胶法结果比较.方法 采用微量动态显色法鲎试剂,建立标准曲线,通过预干扰试验确定稀释倍数,测定供试品外加内毒素回收率进行干扰试验,对供试品进行定量检测,并与凝胶法试验结果进行比较.结果 标准曲线的线性范围为0.02～20EU·mL-1,回归方程为lgT=2.9334-0.2883 lgC,相关系数|r|=0.9992,供试品在稀释200倍时无干扰作用,细菌内毒素回收率在50％～200％内,其中3批供试品的内毒素定量检测结果小于规定限值,1批高于限值,检测结果与凝胶法一致.结论 本品可采用微量动态显色法定量检测细菌内毒素含量,进行质量控制.

目的 分析2011-2020年全国河鲀毒素中毒事件的流行病学特征,为制定河鲀毒素中毒的精准防控措施提供科学依据.方法 对2011-2020年通过"国家食源性疾病暴发监测系统"上报的河鲀毒素中毒事件进行描述性流行病学分析.结果 我国2011-2020年共报告河鲀毒素中毒事件92起,中毒339人,死亡15人,病死率为4.4％.河鲀毒素中毒主要发生在我国沿海地区,原因食品包括鲜河鲀鱼(71.7％,66/92)、河鲀鱼干(13.0％,12/92)、织纹螺(7.6％,7/92)、鲎(5.4％,5/92)和云斑裸颊虾虎鱼(2.2％,2/92),每年3～4月是中毒高发期.结论 做好河纯毒素中毒的防控,建立生物标本中河纯毒素检测方法,提高河鲀毒素中毒病原学鉴定能力;加强流通环节监管和科普宣传,改变民众捕食野生河纯的饮食习惯.

目的 总结药典及近10 年相关文献中有关难溶性样品检测方法的建立思路,为难溶性原料药、辅料、制剂的内毒素检查研究提供借鉴.方法 重点对药典及国内文献中难溶性样品的内毒素限值确定、检查方法、溶解方法、排除干扰的思路进行详细分析与论述,尤其对有机溶剂的选择重点阐述.结果 及结论 难溶性样品细菌内毒素检测方法建立的难点在于寻找合适的溶剂及排除干扰,溶解方法考虑有机溶剂、非有机溶剂、物理方法,排除干扰的方法考虑调节pH、补充二价阳离子、使用抗增液、分散剂等思路,以期为后续研究提供思路.

目的 为新型冠状病毒(简称新冠病毒)灭活疫苗(Vero细胞)的细菌内毒素检查和质量控制提供技术支持和理论基础.方法 利用凝胶法、光度测定法[包括动态浊度(TKA)法、微量动态显色(mKCA)法]测定并比较新冠病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液和成品中内毒素浓度.结果 3 种方法测得的供试品内毒素浓度均符合规定(原液为不超过 5 EU/600 SU,成品为每剂≤5EU),且后 2 种方法既能用于定性检测也能用于定量检测,特别是mKCA法下鲎试剂用量更少.结论 mKCA法是检查该疫苗内毒素浓度的最适宜方法,具有灵敏度高、稳定性强、鲎试剂用量少、数据完整和可追溯、人为操作误差较小的特点.

目的 研究肝硬化营养不良患者肠道菌群的组成特征和血清内毒素水平,旨在为提高肝硬化患者的营养状况提供新的诊疗思路.方法 收集2021年3月—2022年11月在郑州人民医院消化内科住院的58例肝硬化患者作为试验组(LC组),根据皇家自由医院营养优先排序工具分为低营养不良风险组(LC-A组,n=28)和中/高营养不良风险组(LC-B组,n=30),并选择同期25例健康体检者作为对照组(HC组).采集所有受试对象的外周血和粪便样本,用鲎试剂凝胶法检测外周血内毒素浓度,并用高通量测序技术及生物信息学分析肠道菌群间的特征.正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验.计数资料组间比较采用χ2检验.相关性分析采用Spearman检验.结果 三组ALT(H=7.054)、GGT(H=9.644)、Alb(F=32.768)、TBil(H=20.980)及血清内毒素水平(F=108.672)差异均有统计学意义(P值均<0.05).三组间Chao1指数比较差异有统计学意义(F=5.110,P=0.008),HC组与LC-B组Chao1指数比较差异有统计学意义(P<0.05).与HC组比较,LC-A组、LC-B组的Chao1指数和Shannon指数均下降,HC组与LC-B组Chao1指数比较差异有统计学意义(P<0.05).在门水平上,各组主要由拟杆菌门(Bacteroidota)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteriota)组成,并占总体门类的95%以上,HC组与LC-B组厚壁门相对丰度差异有统计学意义(P<0.05).血清内毒素与瘤胃菌科呈显著负相关(r=-0.420,P=0.007).螺旋体与TBil呈显著正相关(r=0.419,P=0.007),与Alb呈显著负相关(r=-0.492,P=0.001).结论 肝硬化营养不良患者中存在独特的肠道菌群改变,并且差异菌群与内毒素血症存在相关性,改善肝硬化肠道微生态可能有助于改善营养状况.