目的:通过小鼠动物模型探讨阳离子抗菌肽Cathelicidin-PY（PY）治疗急性肝衰竭的可行性。方法:内毒素鲎试验（LAL assay）检测不同浓度抗菌肽PY体外中和内毒素/脂多糖（LPS）能力；CCK-8法检测不同浓度抗菌肽PY对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）的毒性作用；体外溶血实验评价抗菌肽PY对健康人红细胞的溶血活性；构建D-氨基半乳糖联合LPS诱导的小鼠急性肝衰竭模型，观察抗菌肽PY对模型小鼠存活率的影响；通过HE染色观察肝脏病理学变化，并通过免疫组织化学、蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。组间比较采用 t检验、方差分析，率的比较采用χ 2检验。 结果:体外实验显示极低剂量（0.01 μmol/L）可达到较高的内毒素中和率，中等剂量（10～40 μmol/L）中和率可超过70%，且不同浓度组间比较，差异有统计学意义（ F = 569.22， P < 0.05）。中等剂量抗菌肽PY有较强的中和内毒素作用，较低的细胞毒性及溶血活性。进一步体内实验显示中等剂量抗菌肽PY可改善模型小鼠的肝脏损伤程度并显著提高存活率，且免疫组织化学检测结果显示中等剂量抗菌肽组较肝衰竭组肝组织内Caspase-3表达明显减少，与蛋白质印迹法检测结果一致。 结论:抗菌肽PY具有较强中和内毒素的能力且毒副作用小，特定剂量抗菌肽PY可以减轻肝细胞凋亡，并显著提高模型动物存活率，为肝衰竭治疗的研究提供了新思路。

脓毒症指宿主对感染反应失调所致危及生命的器官功能障碍，全身炎症反应是其最重要的病理生理特征。传统抗菌药物在脓毒症抗感染治疗中发挥着重要作用，然而多重耐药菌的出现，使得脓毒症的治疗面临更大的挑战。抗菌肽是一类阳离子多肽，几乎可在所有生物体中找到，具有广谱灭菌及免疫调节等作用，在脓毒症治疗中具有良好应用前景。本文就抗菌肽在脓毒症治疗中的应用和临床转化的优势及面临的困难进行简要综述，以期为抗菌肽在脓毒症治疗中转化应用提供思路。

玫瑰痤疮是一种慢性炎症性皮肤疾病,主要临床表现为面中部红斑、丘疹、脓疱、毛细血管扩张等,严重影响患者的社交和心理健康,导致生活质量降低.肥大细胞是过敏和炎症反应的关键启动和调节因子,在免疫监视中发挥着重要作用.近年来,越来越多的研究揭示了玫瑰痤疮中抗菌肽LL-37、阳离子通道TRPV(transient receptor potential vanilloid)与肥大细胞的相互作用机制.本文对肥大细胞参与玫瑰痤疮发病机制的研究进展和相关的治疗学进展进行综述.

目的 设计二茂铁(Fc)偶联阳离子多肽(以下简称"多肽")的2种同分异构多肽[Fc-K(C8)FFHK、C8-K(Fc)FFHK]以及对照多肽[C8-K(C8)FFHK],探究Fc位置异构对多肽自组装行为及其抗菌效果的影响.方法 采用标准固相合成法合成位置异构的多肽,采用反相高效液相色谱法进行纯化;采用紫外可见分光光度法检测紫外吸收光谱,Zeta电位分析仪测定Zeta电位以分析多肽的稳定性;采用圆二色光谱(CD)、傅里叶红外光谱(FTIR)、硫代黄素T(ThT)荧光光谱、透射电子显微镜(TEM)等进行二级结构表征;通过体外活性氧(ROS)生成效率实验、生长曲线法测定实验、平板法实验、细胞毒性实验和溶血性实验评价2种同分异构多肽在抗菌活性和生物相容性上的差异.结果 合成了3种纯度均高于95%的多肽.稳定性实验结果显示,室温下放置24、96 h时,Fc-K(C8)FFHK、C8-K(Fc)FFHK的紫外吸收图谱几乎没有改变,二者的Zeta电位分别减少了0.3、0.5 mV.二级结构表征结果显示,Fc-K(C8)FFHK、C8-K(Fc)FFHK分别自组装成扭曲纳米带和短纳米纤维结构,C8-K(C8)FFHK自组装成圆柱状纳米纤维结构;光学图谱结果显示,3种多肽的β-折叠、α-螺旋等结构含量具有一定差异.体外ROS生成实验结果显示,Fc-K(C8)FFHK在pH 6.0时的ROS生成效率高于C8-K(Fc)FFHK.体外抗菌活性结果显示,对于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,2种同分异构多肽的最低抑菌浓度(MIC)值均为50 μg/mL,远低于对照多肽的MIC值(400 μg/mL);对于大肠杆菌,Fc-K(C8)FFHK的抗菌活性优于C8-K(Fc)FFHK.细胞毒性实验和溶血性实验均结果显示,2种同分异构多肽均具有较好的生物相容性.结论 通过偶联Fc,能够提高多肽的抗菌活性;调节Fc在多肽序列中的位置,可调控多肽的自组装行为和抗菌效果.

目的 探究非小细胞肺癌(NSCLC)患者体内血清抗菌肽人类阳离子抗菌蛋白18(hCA P18)水平的变化及其在NSCLC辅助诊断和预后中的价值.方法 选取该院2014年4月至2015年6月收治的48例NSCLC患者,采用病例对照研究法分为对照组和观察组,观察组由48例NSCLC患者组成,对照组由48例同期体检健康者组成.使用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测观察组和对照组患者血清 hCAP18水平,并对NSCLC患者手术前后血清中hCAP18水平变化进行比较,通过分析受试者的操作特征(ROC)曲线计算血清中hCAP18的灵敏度和特异度,并且对血清内不同hCAP18水平的NSCLC患者术后复发率进行比较.结果 观察组患者血清中hCAP18水平为(6823.0 ± 751.8)μg/L,明显高于对照组的(247.0 ± 7.5)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者肿瘤切除后体内血清hCA P18水平为(423.5 ± 37.6)μg/L,明显低于术前,差异有统计学意义(P<0.05).血清hCAP18对NSCLC患者检测的灵敏度和特异度分别为93.75% 和95.83%,而常用的肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19(CyFRA21-1)对NSCLC患者检测的灵敏度和特异度分别为64.58% 和89.58%,62.50% 和89.58%,其差异有统计学意义(P<0.05).对NSCLC患者术后两年复发率进行比较,血清中hCAP18水平小于或等于(390.0 ± 37.6)μg/L的NSCLC患者复发率为12.5%(4/32),而血清中hCAP18水平大于(390.0 ± 37.6)μg/L 的 NSCLC患者复发率为50.0%(8/16),两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 血清hCAP18检测对NSCLC的辅助诊断具有良好的灵敏度和特异度,对于NSCLC的诊断有一定的临床应用价值.

抗菌肽(AMPs)是一种由先天免疫系统组成的小、阳离子、双亲性肽类物质,具有较强杀菌作用及免疫调节活性,已在抗结核方面展示出特殊的优势.由于其不同于传统的抗结核药物,有可能成为治疗结核病的新途径.文中就AMPs与结核分枝杆菌感染的研究进展作一综述.

防御素是一类富含精氨酸和半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,是软体动物抵御各种病原微生物侵染的重要免疫因子.太平洋牡蛎防御素(Crassostrea gigas defensin,CgD)近羧基端的43个氨基酸残基构成了其成熟肽区域,决定了CgD的生物学活性.首先通过逆转录PCR和设计特异性引物从太平洋牡蛎外套膜中分离并扩增到3'端添加和不添加6×His标签的两种目的基因CgDH+和CgDH-;与pPICZαA连接后构建的重组表达载体(pPICZαA-CgDH+和pPICZαA-CgDH-)电转至毕赤酵母Pichia pastoris X-33中,使用1.0％甲醇诱导表达目的蛋白CgDH+和CgDH-,最适培养条件为29℃、250 r/min、72 h;通过固化金属离子亲和层析(IMAC)获得分子量为5.78 kDa的纯化的重组蛋白CgDH+,根据其蛋白质浓度推算表达量为2.32 mg/Lo经MALDI-TOF-TOF质谱分析证明纯化产物即为预期的目的蛋白.抑菌试验结果显示分别含重组蛋白CgDH+和重组蛋白CgDH-的培养液上清对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa都具有抑菌活性,表明重组蛋白中6×His标签的存在与否并不影响其生物学活性.

贻贝素(Mytilins)是一类主要在贝类血细胞中表达的阳离子小分子抗菌肽,包括多种同工型,它们在免疫系统中发挥了重要作用,Mytilin-1是其中的一种同工型.厚壳贻贝(Mytilus coruscus)Mytilin-1的一级结构由信号肽、成熟肽和C端的延伸肽组成;其成熟肽决定了Mytilin-1的生物学活性,它由34个氨基酸残基组成,其中8个保守的半胱氨酸残基在空间上能形成4对二硫键,对Mytilin-1的稳定性和活性起了关键作用.以厚壳贻贝的Mytilin-1成熟肽为重组DNA表达的目的蛋白,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏爱性对编码该成熟肽的密码子进行优化,合成的目的基因"mMy1"与表达载体pPICZαA连接后电转至毕赤酵母X-33,通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子,获得的阳性转化子在29℃、250 r/min、pH6.0的条件下,使用1％ 甲醇诱导表达96 h;培养液上清经Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析证明:重组mMy1在毕赤酵母X-33中得到成功表达,其分子量为4.8 kD.抑菌试验表明,重组mMy1对革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)以及革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherchia coli)具有抑菌活性.

目的 探讨贝伐单抗联合长春瑞滨、顺铂对非小细胞肺癌患者的疗效及对血清血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)、抗菌肽人类阳离子抗菌蛋白18(hCAP18)水平的影响.方法 随机选择2015年1月-2017年1月在本院就诊的非小细胞肺癌患者86例,按随机数字表法分为观察组和对照组,各43例.对照组给予长春瑞滨、顺铂治疗,观察组给予贝伐单抗联合长春瑞滨、顺铂治疗.治疗2个疗程后观察两组患者的疗效、生活质量以及血清ANGPTL2、抗菌肽hCAP18水平、1年生存率等.结果 治疗后,观察组缓解率为55.8%,显著高于对照组(30.23%),差异有统计学意义(P<0.05).治疗前,两组患者QOL、ECOG评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者QOL评分显著高于治疗前,ECOG评分显著低于治疗前,且观察组变化更为显著,差异均有统计学意义(P<0.05).治疗前,两组患者血清ANGPTL2、抗菌肽hCAP18水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者血清ANGPTL2、抗菌肽hCAP18水平均显著降低,且观察组显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).观察组不良反应发生率高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).观察组1年生存率(76.74%)显著高于对照组(58.14%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 贝伐单抗联合长春瑞滨、顺铂可降低非小细胞肺癌患者血清ANGPTL2、抗菌肽hCAP18水平,改善其生活质量,提高生存率,整体疗效较好,在临床上可广泛应用.

[目的]革兰氏阳性菌中的dlt操纵子编码细胞壁中磷壁酸发生D-丙氨酰化修饰所必需的酶.D-丙氨酰化使细胞表面产生正电荷,并因此排斥带正电的分子,例如阳离子抗菌肽,从而赋予对宿主的抗性.本文中,我们研究了dlt操纵子对苏云金芽胞杆菌表型性状的影响及在对昆虫毒力中发挥的作用.[方法]通过同源重组构建了△dltABt基因缺失突变株,并对其进行形态学观察、表面电荷差异分析、抗逆性分析和毒力测定.[结果]结果表明,dltA的失活显著降低了细胞表面的净负电荷,对阳离子抗菌肽(多粘菌素B和溶菌酶)的抗性和碱耐受性显著下降.同时,△dltABt的生长曲线发生明显改变,细胞表面粗糙且形状不规则,生物膜形成减少和群游运动能力增强.此外,dltA的失活降低了对昆虫中肠上皮细胞的粘附能力,并减弱了对家蚕的毒力.[结论]研究结果表明,dlt操纵子介导的磷壁酸发生D-丙氨酰化修饰与苏云金芽胞杆菌的许多表型性状密切相关,并且在苏云金芽胞杆菌对昆虫的致病性及抵抗昆虫体液免疫保护中具有重要作用.